非酒精性脂肪性肝病患者血清Chemerin和頸動脈內膜中層厚度的相關性

高海麗 楊道坤 梁海軍 王新偉 王燕平 陳寶鑫

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指除酒精及其他確定因素導致的以肝細胞內大量甘油三酯沉積為特征的慢性肝臟疾病[1]。NAFLD對肝臟的危害基本得到共識，但近年來研究發現[2-3]，NAFLD患者心腦血管疾病的發病風險顯著升高，而動脈粥樣硬化是心腦血管疾病發病的基本病理生理基礎[4]，如何早期識別NAFLD患者是否發生動脈粥樣硬化并盡早給予干預是提高其遠期預后的關鍵。Chemerin為一種脂肪細胞因子，與頸動脈粥樣硬化的發病機制密切相關[5]，頸動脈內膜中層厚度(carotid intima-media thickness, CIMT)增厚是評估亞臨床動脈粥樣硬化的一項指標，本研究通過回顧性收集新鄉醫學院第一附屬醫院NAFLD患者，探討NAFLD患者血清Chemerin水平與CIMT的關系，現將具體內容報道如下。

資料與方法

一、研究對象

納入2019年1月1日至2020年5月1日于新鄉醫學院第一附屬醫院感染科就診的96例NAFLD患者和體檢中心35例健康體檢者(對照組)作為研究對象，NAFLD患者中男56例，女40例，平均年齡(42.56±5.22)周歲；對照組男20例，女15例，平均年齡(43.58±4.95)周歲，兩組研究對象在性別和年齡上相比無顯著差異。所有NAFLD患者均為住院后通過肝臟組織病理初次診斷，符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南(2010年修訂版)》中的標準[6]，且年齡超過18周歲，入院后臨床資料完整；排除酒精性脂肪肝、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、藥物性肝損傷、遺傳性肝病及合并其他惡性腫瘤、嚴重感染性疾病患者。入院后采用Philips IE33彩色多普勒超聲診斷儀對所有研究對象進行CIMT檢查，參考中國醫師協會超聲醫師分會制定的《血管和淺表器官超聲檢查指南[7]》，CIMT≥1.0 mm定義為內膜增厚，本研究中CIMT≥1.0 mm共41例(ACIMT組)，男20例，女21例，平均年齡(42.02±4.23)周歲，其余CIMT<1.0 mm共55例(NCIMT組)，其中男36例，女19例，平均年齡(42.86±4.19)周歲。所有研究對象均知情同意且簽署知情同意協議書，本課題經過醫院倫理委員會同意并批準(批準號：2181102)。

二、研究方法

(一)基本臨床特征及生化指標 所有研究對象的基本情況如性別、年齡、BMI(body mass index)、吸煙史、合并糖尿病病史、高血壓病史、收縮壓、舒張壓等均來源于住院病歷；清晨空腹抽取外周靜脈血，生化指標如總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triacylglycerol，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-c)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹血糖(fasting blood glucose，FPG)、空腹胰島素(fasting insulin，FINS)、胰島素抵抗指數(HOMA-IR=FPG*FINS/22.5)、丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase，AST)、尿酸(uric acid，UA)等均通過醫院檢驗科進行檢測。

(二)CIMT的檢查 由1名高年資超聲科醫師對患者進行CIMT檢查，儀器為Philips IE33彩色多普勒超聲診斷儀，頻率為10 MHz，分別檢查頸總、頸內動脈和分叉部。CIMT距離為腔內膜交界面到外膜上層的距離，以后壁值為標準，檢測6個點，取平均值。

(三) Chemerin表達水平的檢測 所有研究對象均于清晨空腹抽取外周靜脈血3 mL在4 ℃離心機離心，收集上層血清置于-80 ℃冰箱中保存備用。血清Chemerin濃度采用ELISA法檢測，具體操作步驟按照ELISA試劑盒內說明書進行(美國，R&D公司)，最終研究對象血清Chemerin水平按照酶標儀(thermo酶標儀，美國Thermo Fisher Scientific公司)在450 nm波長下測定吸光度(OD值)。

三、統計學分析

結 果

一、一般資料的比較

對照組、NCIMT組和ACIMT組三組研究對象在性別、年齡、BMI、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、收縮壓、舒張壓、TC、HDL-c、HbA1c上相比較均無顯著差異(P>0.05)；TG、LDL-c、FINS、HOMA-IR、ALT、AST、Chemerin在對照組、NCIMT組和ACIMT組中依次升高，組組比較均存在顯著差異(P<0.05)；FPG、UA和CIMT在對照組和NCIMT組中相比較均無顯著差異(P>0.05)；與對照組和NCIMT組相比較，ACIMT組中FPG、UA和CIMT均顯著升高(P<0.05)。結果見表1。

二、相關性分析

96例NAFLD患者CIMT水平與TG、LDL-c、HOMA-IR、UA和Chemerin均呈現顯著正相關性，相關系數分別為0.322、0.474、0.354、0.365和0.489，而與其他指標無明顯相關性。結果見表2。

表1 NAFLD患者和對照組基線資料的比較

表2 NAFLD患者CIMT與臨床參數的相關性分析

三、NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的危險因素

以CIMT為因變量(CIMT<1.0 mm為0，CIMT≥1.0 mm為1)，以表1中性別、年齡、吸煙史、合并糖尿病病史、高血壓病史、BMI、收縮壓、舒張壓、FBG、TC、TG、HDL-c、LDL-c、HbA1c 、FPG、FINS、HOMA-IR、ALT、AST和UA等指標為自變量進行Logistic回歸分析，結果顯示，TG(OR=4.221)、HOMA-IR(OR=1.353)、LDL-c(OR=5.548)和Chemerin(OR=8.015)是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的危險因素。結果見表3。

四、血清Chemerin診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的ROC曲線

ROC曲線結果發現，血清中Chemerin表達水平診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的曲線下面積為0.885(95%CI:0.813～0.942，P<0.000)，當截斷值為265.29 ng/mL時，診斷敏感度和特異度分別為 93.24%和95.25%。ROC曲線見圖1。

討 論

研究認為NAFLD屬于代謝綜合征的肝臟表現[8]，NAFLD患者不僅發生肝臟損傷，也是心腦血管疾病發病的一項獨立危險因素。meta分析結果顯示[9]，相對于非NAFLD患者，NAFLD患者發生致命性和(或)非致命性心血管疾病的風險顯著升高(OR=1.64，95%CI：1.26～2.13)。此外，Ekstedt M等[2]對88例NAFLD患者進行長達13.7年左右的隨訪后發現，NAFLD患者發生心腦血管疾病的風險高達29%，而肝癌的發病風險僅僅為10%。動脈粥樣硬化是心腦血管疾病發病的基礎[4]，而NAFLD也會促進動脈粥樣硬化的發生[10]，因此，動脈粥樣硬化可能是連接NAFLD和心腦血管疾病的“橋梁”，近年來尋找能反映NAFLD患者發生頸動脈粥樣硬化的生物學標志物已成為研究的重點。

Chemerin屬于一種脂肪細胞因子，由163個氨基酸構成，由肝臟和脂肪組織分泌，研究認為血清中Chemerin主要來源于肝臟的分泌[11]。大量研究報道認為，Chemerin與NAFLD的發病機制有關。呂驥等[12]研究顯示，NAFLD患者血清中Chemerin水平顯著升高，且與HOMA-IR及TG等呈現顯著正相關性；Krautbauer S等[13]同樣證實NAFLD患者肝臟組織中Chemerin表達水平升高，且Docke S等[14]認為肝臟的脂肪變性、肝小葉炎癥、氣球樣變及肝纖維化等與肝臟組織中Chemerin高表達有關。上述結果提示，Chemerin在NAFLD患者肝臟病變進展中可能扮演了重要作用。Chemerin在動脈粥樣硬化的發病機制中同樣扮演了重要作用，Liu H等[15]構建動脈粥樣硬化小鼠模型后發現，小鼠血清中Chemerin及其他炎癥因子如NF-κB、IL-1β等水平顯著升高，但Chemerin基因表達被抑制后，小鼠動脈粥樣硬化得到明顯改善，NF-κB和IL-1β表達水平顯著降低；Dimitriadis

表3 Logistic回歸分析NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的影響因素

圖1 血清Chemerin診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的ROC曲線

GK等[16]證實Chemerin通過上調NF-κB和IL-1β的表達參與血管內皮細胞的異常活化增殖、功能障礙和收縮異常，從而加速動脈粥樣硬化的發展。本研究結果發現，相對于對照組和NCIMT組，ACIMT組患者Chemerin表達水平顯著升高，且與CIMT呈現顯著正相關性，提示NAFLD患者血清Chemerin表達水平在一定程度上反映了頸動脈粥樣硬化的嚴重程度；其他研究也進一步發現頸動脈粥樣斑塊不穩定組患者血清Chemerin表達水平高于斑塊穩定組，且與斑塊指數呈現顯著正相關性(r=0.301)[17]，Zhao D等[18]證實血清Chemerin是中國人群頸動脈斑塊不穩定的危險因素。因此，本研究結果提示血清Chemerin表達水平與NAFLD患者CIMT密切相關，Logistic回歸分析也證實Chemerin(OR=8.015)是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的一項獨立危險因素，而Lachine NA等[19]也同樣證實Chemerin是2型糖尿病患者CIMT的獨立危險因素；另一方面，本研究發現其他指標如TG(OR=4.221)、HOMA-IR(OR=1.353)、LDL-c(OR=5.548)同樣是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的獨立危險因素，NAFLD患者TG、LDL-c水平均顯著高于對照組，與王萍等[20]研究結果基本一致，說明NAFLD患者常常發生血脂水平紊亂，而血脂水平異常升高導致大量脂質沉積于動脈內皮下，被平滑肌及巨噬細胞等吞噬形成泡沫細胞，最終引起CIMT增厚。胰島素抵抗早已被證實屬于動脈粥樣硬化的獨立危險因素之一，胰島素抵抗與炎癥反應、內皮細胞功能紊亂、脂質代謝異常等均密切相關，共同參與了動脈粥樣硬化的發生[21]，馮南山[22]證實HOMA-IR是腦卒中患者動脈粥樣硬化的獨立危險因素。

為進一步探討Chemerin是否可以作為NAFLD患者動脈粥樣硬化的一項血清學指標，本研究發現，血清Chemerin在診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的AUC高達0.885，診斷敏感度和特異度分別為 93.24%和95.25%，提示血清中Chemerin可作為診斷NAFLD患者動脈粥樣硬化的一項血清學標志物。

綜上所述，NAFLD患者血清中Chemerin表達水平顯著升高，可作為NAFLD患者動脈粥樣硬化的一項血清學標志物，但本研究為一項橫斷面研究，存在著樣本量不足等缺陷，以后可開展大型隊列研究探討血清中Chemerin表達水平與NAFLD患者心腦血管疾病發生風險的相關性。