肝癌組織中血管內皮生長因子、胰島素樣生長因子-Ⅱ的表達情況及影響因素分析

鄭 碩，黃奕紅

(1.福州市二醫院肝膽外科，福建 福州 350007；2.福州市二醫院超聲診斷科，福建 福州 350007)

原發性肝癌(PHC)是全球最常見的惡性腫瘤之一，具有起病隱匿、發展速度快、臨床預后差的特點。研究顯示，PHC患者自然生存期平均僅為4.3個月，即使手術切除仍具有較高的復發率及致死率，術后5年復發率仍高達70%以上，是導致患者預后不良的重要因素，患者5年生存率僅為37.2%[1]。PHC屬于典型多血管腫瘤，發生、進展、復發與血管生成密切相關[2]。血管內皮生長因子(VEGF)是最重要的血管生長因子之一，能通過刺激內皮細胞增殖進而促進腫瘤新生血管生成，也能抑制樹突狀細胞進而影響機體抗腫瘤免疫功能，在腫瘤細胞生成、遷移及侵襲過程中扮演重要角色[3]。胰島素樣生長因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)是一種功能復雜的生長調控因子，會引起細胞因子網絡的動態平衡破壞，進而促進腫瘤細胞分化、生長，與腫瘤的發生、發展、轉移等過程密切相關[4]。目前，臨床關于PHC患者肝癌組織中VEGF、IGF-Ⅱ表達情況的變化及其機制少見報道，為此本研究旨在探討探討肝癌組織中血管內皮生長因子(VEGF)、胰島素樣生長因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)的表達水平及影響因素，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料:選擇我院收治的82例接受手術治療的原發性肝癌(PHC)患者作為研究對象，符合以下入組標準：①符合PHC的診斷標準[5]，經病理證實；②術前未接受放化療及介入治療；③均實施肝癌切除術治療；④患者知情同意。82例患者中男48例，女34例；年齡：<60歲35例、≥60歲47例；腫瘤直徑：<5 cm 28例、≥5 cm 54例；分化程度：低分化26例、中分化36例、高分化20例；TNM分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期45例、Ⅲ期27例；肝功能Child-Pugh分級：A級47例、B級35例；AFP水平：<400 μg/L 49例、≥400 μg/L 33例；淋巴結轉移35例。術后收集82例PHC患者的肝癌組織及癌旁組織(距肝癌組織2～5 cm)，癌旁組織病理證實沒有腫瘤細胞浸潤，未見增生性病變。本次研究經過本院醫學倫理委員會同意。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集：采用自行設計調查表收集患者一般資料、臨床病理特征，包括性別(男、女)、年齡(<60歲、≥60歲)、腫瘤直徑(<5 cm、≥5 cm)、腫瘤包膜(有、無)、分化程度(低分化、中分化、高分化)、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、肝功能分級(A級、B級)、淋巴結轉移(是、否)、甲胎蛋白(AFP)水平(<400 μg/L、≥400 μg/L)。

1.2.2VEGF、IGF-Ⅱ檢測：收集肝癌組織及癌旁組織(距肝癌組織2-5cm)，使用石蠟包埋，連續切片，采用免疫組織化學法檢測VEGF、IGF-Ⅱ表達情況，經免疫組化染色后使用Nikon YS100光學顯微鏡觀察染色情況，每張切片選取5個高倍視野進行觀察，參考文獻標準[6]根據陽性細胞比例評分×著色強度評分將表達結果分為陰性(-)、弱陽性(+)、中度陽性(++)、強陽性(+++)。

1.3觀察指標：①比較肝癌組織和癌旁組織VEGF、IGF-Ⅱ表達陽性率差異,總陽性率為弱陽性(+)率、中度陽性(++)率、強陽性(+++)率之和；②分析一般資料、臨床病理特征與VEGF、IGF-Ⅱ表達陽性率的相關性。

1.4統計學分析：采用SPSS20.0統計軟件進行分析，計數資料以率(%)表示，組間進行χ2分析，采用單因素χ2分析及多因素Logistic回歸分析VEGF、IGF-Ⅱ表達影響因素，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1肝癌組織及癌旁組織VEGF、IGF-Ⅱ表達比較：癌組織中VEGF表達陽性率為65.85%(54/82)、IGF-Ⅱ表達陽性率為68.29%(56/82)，均明顯高于癌旁組織28.05%(23/82)、26.83%(22/82)，差異具有統計學意義(χ2=23.526、28.262，均P<0.01)，見表1～2。

表1 肝癌組織及癌旁組織VEGF表達比較[例(%)]

表2 肝癌組織及癌旁組織IGF-Ⅱ表達比較[例(%)]

2.2VEGF、IGF-Ⅱ表達影響因素分析:單因素分析顯示，不同腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、肝功能分級、淋巴結轉移、AFP水平患者癌組織VEGF、IGF-Ⅱ表達陽性率差異具有統計學意義(P<0.05)。多因素分析顯示，腫瘤直徑(OR=1.645,95%CI=1.102～3.783)、分化程度(OR=1.943,95%CI=1.203～4.004)、TNM分期(OR=2.018,95%CI=1.287～4.742)、肝功能分級(OR=1.865,95%CI=1.134～3.953)、淋巴結轉移(OR=2.121,95%CI=1.303～4.944)、AFP水平(OR=1.809,95%CI=1.129～3.887)是影響癌組織VEGF表達的獨立危險因素(P<0.05)； 腫瘤直徑(OR=1.672,95%CI=1.112～3.896)、分化程度(OR=1.958,95%CI=1.212～4.116)、TNM分期(OR=2.042,95%CI=1.272～4.778)、肝功能分級(OR=1.927,95%CI=1.156～3.971)、淋巴結轉移(OR=2.166,95%CI=1.324～4.967)、AFP水平(OR=1.659,95%CI=1.130～3.967)是影響癌組織IGF-Ⅱ表達的獨立危險因素，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3～5。

表3 VEGF、IGF-Ⅱ表達影響因素的單因素分析[例(%)]

表4 VEGF表達影響因素的多因素分析

表5 IGF-Ⅱ表達影響因素的多因素分析

3 討論

PHC早期癥狀不明顯，病情進展迅速，確診時多為局部晚期及晚期，部分發生淋巴結轉移或遠處轉移，部分患者喪失手術切除的機會。因而，PHC早期診治具有重要意義。目前，PHC診斷仍以檢測甲胎蛋白(AFP)為主，但具有較高的漏診率，其中40%的早期肝癌和15%～20%的晚期肝癌患者AFP檢測結果為陰性。尋找具有更高靈敏度和特異度的腫瘤標記物來彌補AFP不足，以提高早期肝癌的診斷率，實現PHC早期發現、早期診斷、早期治療，成為臨床研究的重要課題。

VEGF是多功能的血管生長因子，能夠與血管內皮細胞膜絡氨酸激酶受體結合，進而促進細胞分化、增殖，促進腫瘤新生血管形成，是血管增生的強烈刺激因子，與肺癌、腸癌、肝癌等多種腫瘤發生、進展密切相關[7]。研究顯示，腫瘤患者癌組織中的VEGF表達明顯增加，表明VEGF在腫瘤發病過程發揮重要作用。VEGF表達增加能夠血管生成，從而為腫瘤細胞提供充足的血液供應，保證腫瘤細胞生長及增殖所需的營養，促進了腫瘤細胞生長，另外VEGF表達增加能夠使血管內皮細胞基質發生降解，削弱血管屏障作用，導致癌細胞血管滲透，致使癌細胞通過血流擴散，引起腫瘤轉移。本研究結果顯示，癌組織中VEGF表達陽性率為65.85%(54/82)，明顯高于癌旁組織28.05%(23/82)，與文獻研究[8]相符，提示PHC患者癌組織中VEGF呈高表達，與PHC發病密切相關。

IGF-Ⅱ大部分由肝臟合成，是細胞增殖的重要調控因子，具有多重的生物效應。IGF-Ⅱ過度表達會破壞細胞因子網絡的動態平衡，放大腫瘤細胞持續生長信號的傳遞，刺激癌前期的肝細胞增殖失控而發生腫瘤，同時也在一定條件下加速高增殖活性狀態的癌前肝細胞惡性轉化，最終導致肝癌發生[9-10]。研究顯示，IGF-Ⅱ與肝癌的發生、發展密切相關，可作為肝癌診斷及評判治療效果的新腫瘤標記物，能夠使AFP陰性的PHC患者獲得進一步明確診斷。本研究結果顯示，癌組織中IGF-Ⅱ表達陽性率為68.29%(56/82)，明顯高于癌旁組織26.83%(22/82)，提示PHC患者癌組織中IGF-Ⅱ呈高表達，與PHC發病密切相關，與文獻研究[11]相符。

本研究結果顯示，腫瘤直徑≥5 cm、低分化程度、高TNM分期、肝功能Child-Pugh分級差、淋巴結轉移、AFP≥400 ug/L是導致癌組織VEGF、IGF-Ⅱ達增加的獨立危險因素，表明癌組織VEGF、IGF-Ⅱ表達與肝癌生物學行為有關。VEGF、IGF-Ⅱ高表達則會誘導血管生成，能夠維持腫瘤的持續生長，促使腫瘤直徑持續增大。低分化程度患者則腫瘤惡性程度越高，腫瘤的新生血管數量越多，VEGF、IGF-Ⅱ表達增加越顯著，臨床預后也越差。高TNM分期及高肝功能Child-Pugh分級患者肝功能受損更加嚴重，提示腫瘤侵襲性更強，肝癌細胞生長速度更快，局部缺氧、缺血狀況更明顯，進而刺激癌細胞分泌大量的VEGF、IGF-Ⅱ，使癌組織VEGF、IGF-Ⅱ表達增加。VEGF、IGF-Ⅱ高表達可促進淋巴管生成，癌細胞進入淋巴管后向管腔內聚集，侵襲淋巴結致淋巴結受累。AFP水平與肝癌的惡性程度呈正相關，AFP水平越高，則肝癌的惡性程度越高，則VEGF、IGF-Ⅱ表達增加越顯著。

綜上所述，PHC患者肝癌癌組織中VEGF、IGF-Ⅱ表達明顯增加，其表達水平與腫瘤直徑、淋巴結轉移、病理分化程度、TNM分期、肝功能分級、血清AFP水平存在相關性。