補陽還五湯對氣虛血瘀模型大鼠血液流變學的影響

凌爽，畢悅，李孟，牛雯穎，肖洪彬，馮月男

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

中醫學認為，血瘀證是因氣滯、氣虛、寒凝、火熱等因素，導致血行不暢，或因外傷、各種急性、慢性病導致出血未消散者。氣虛血瘀證是中醫臨床的常見證型，也是臨床中多個學科、多種疾病的常見證候，其在心腦血管疾病、腎臟疾病及老年病中更為常見。目前對氣虛血瘀證發病機理的現代研究主要集中在血液流變學及血流動力學異常、血管內皮細胞分泌活性物質的失衡、促凝血因子增加、抗凝血因子及纖溶活性物質減少等。臨床研究也證明，氣虛血瘀證患者均有不同程度的全血黏度及血漿黏度增高、紅細胞聚集增加、紅細胞變形指數降低等[1-6]。補陽還五湯是臨床活血化瘀的經典方，運用了大量的補氣藥和多味活血藥進行配伍，是以氣虛血瘀為基本病機的疾病代表名方，受到醫家重視而沿用至今。本實驗主要側重于研究補陽還五湯對于氣虛血瘀型大鼠的血液流變學及紅細胞相關指數的影響，為臨床治療氣虛血瘀證候的相關疾病提供一定的實驗依據。

1 材料

1.1 實驗動物

清潔級健康的SD大鼠40只，雌、雄各半，體質量200～220 g，由遼寧長生生物技術有限公司提供。動物許可證號:SYXK(黑)2016-004。所有動物飼養于20～22 ℃的室內，自由攝食飲水。

1.2 實驗藥物

補陽還五湯組方：黃芪120 g，當歸尾6 g，赤芍5 g，地龍3 g，桃仁3 g，川芎3 g和紅花3 g。上述實驗中所需要的中藥飲片均嚴格遵守《中華人民共和國藥典》(2015年版)中規定的科、屬、種，均在黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院采購。

1.3 主要儀器

全自動血液流變儀(型號：LBY-N7500B，北京普利生儀器有限公司)；全自動血液細胞分析儀(型號：X500，日本希森美康有限公司)；高速臺式離心機(型號：TGL-16G，蘇州捷美電子有限公司)；全自動血凝儀(型號：C2000-A，北京普利生儀器有限公司)。

1.4 實驗試劑

凝血酶原時間 (prothrombin time，PT)試劑盒(批號：1812126)、凝血酶時間(thrombin time，TT)試劑盒(批號：1801007)、活化部分凝血活酶時間(activated partial thromboplastin time，APTT)試劑盒(批號：1812009)、纖維蛋白原(Human Fibrinogen，FIB)試劑盒(批號：1804041)均來自于上海長島生物技術有限公司。

2 方法

2.1 模型制備及給藥方法

40只SD大鼠按體質量隨機分為4組，分別為空白組、模型組和補陽還五湯高、低劑量組。每組大鼠10只，全部正常飲水攝食，適應性喂養7 d。各組大鼠以5%水合氯醛腹腔注射進行麻醉，大鼠麻醉成功后將其置于仰臥位，四肢與頭部固定于老鼠固定板上，模型組及給藥組采用氣管插管的方式將注射博萊霉素生理鹽水溶液(7 mg/kg)一次性經由氣管內完成注射，空白組給予同體積生理鹽水。完成注射后隨即將大鼠直立旋轉，使藥液在其肺內均勻分布。結束等待大鼠清醒后，將其放回籠中正常喂養。造模14 d后，開始進行灌胃給藥，空白組、模型組予等體積生理鹽水，補陽還五湯高、低劑量組予相應藥物(1 mL/100 g)，連續進行21 d灌胃治療。治療期間全部大鼠均自由進水，予普通的生長飼料喂養。

2.2 取血

取血前大鼠禁食12 h，但不禁水，末次給藥1 h后腹腔注射5%水合氯醛5 mL/kg進行麻醉，將大鼠仰臥于手術臺上腹主動脈采血，然后檢測相關指標。

2.3 指標檢測

2.3.1 血液流變學指標檢測

取肝素鈉抗凝血4 mL，進行全血黏度的測定。剪切參數分別設為低、中和高切變率，用血液流變儀測定全血黏度。

取枸櫞酸鈉抗凝血2 mL，3 000 r/min轉速離心10 min，取上層血漿，利用全自動血液流變儀測定血漿黏度。

2.3.2 紅細胞壓積、聚集、剛性、變形指數測定

取EDTA-K2抗凝血2 mL，利用全自動血液細胞分析儀，測定紅細胞壓積、聚集、剛性及變形指數相關參數指標。

2.3.3 凝血四項測定方法

取枸櫞酸鈉抗凝血2 mL，3 000 r/min離心10 min得到血漿，按試劑盒的說明書操作，利用全自動血凝儀測定凝血四項FIB、PT、TT和APTT值。

2.4 統計學方法

3 結果

3.1 補陽還五湯對大鼠全血黏度、血漿黏度的影響

與空白組比較，模型組在低、中切變率下全血黏度極顯著上升(P<0.01)、高切變率下全血黏度顯著上升(P<0.05)，血漿黏度顯著上升(P<0.05)；與模型組比較，補陽還五湯高劑量組高、中、低切變率下的全血黏度及血漿黏度均顯著下降(P<0.05)；補陽還五湯低劑量組高、中、低切變率下的全血黏度及血漿黏度均顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 補陽還五湯對大鼠全血黏度、血漿黏度的影響

3.2 補陽還五湯對大鼠紅細胞相關參數的影響

與空白組比較，模型組RBC壓積、RBC聚集指數、RBC剛性指數顯著升高(P<0.05)，RBC變形指數顯著降低(P<0.05)；與模型組比較，補陽還五湯高、低劑量組RBC壓積、RBC聚集指數、RBC剛性指數顯著降低(P<0.05)，紅細胞變形指數顯著升高(P<0.05)。見表2。

表2 補陽還五湯對大鼠紅細胞相關參數的影響

3.3 補陽還五湯對大鼠凝血功能的影響

與空白組比較，模型組的APTT、TT、PT時間顯著縮短(P<0.05)，FIB含量顯著增加(P<0.05)；與模型組比較，補陽還五湯高、低劑量組APTT、TT、PT時間顯著延長(P<0.05)，同時顯著降低了FIB含量(P<0.05)。見表3。

表3 補陽還五湯對大鼠凝血功能的影響

4 討論

補陽還五湯出自清代王清任的《醫林改錯》，有補氣活血通絡之功效，主治氣虛血瘀之中風。補陽還五湯可以廣泛用于臨床各科疾病的治療，主要以腦缺血、腦梗死、糖尿病等為主[7-14]。血液黏度增高是氣虛血瘀證的主要表現之一，多種因素均可以影響血液黏度，其中紅細胞自身的變形性和聚集性的改變是其發生變化的主要因素。而用來衡量血液黏滯程度的一項重要指標就是全血黏度。全血黏度從切變率上分為高、中、低切3個不同程度，而對全血黏度產生影響的因素又包括紅細胞壓積、紅細胞聚集性、變形能力以及血漿的黏稠程度等。在高切變率下的全血黏度主要由紅細胞的變形性決定，在該切變率下的血液黏度越高，說明紅細胞的變形能力或彈性越差；而在低切變率的條件下，全血黏度主要反映的是紅細胞聚集性，其全血黏度越高，表明紅細胞聚集性越高。全血黏度的變化在血栓性疾病的診斷、治療以及預防方面起著十分重要的作用。血漿黏度是反應血液黏滯程度的又一項重要指標，而影響血漿黏度的重要指標之一就是纖維蛋白原。凝血酶原時間(PT)是評價外源性凝血系統較為敏感和常用的試驗參數，它的變化主要反映凝血因子和纖維蛋白原的血漿水平的改變；活化部分凝血活酶時間及凝血酶時間的延長與內源系統的凝血酶的抑制有關；纖維蛋白原(FIB)通過凝血酶作用可以直接破壞內皮細胞，使其在血液中發生遷移，變性，導致平滑肌細胞增生、肥大，最終形成網狀結構，從而使血液黏度增高[15-17]。

本研究中，與空白組比較，模型組大鼠的全血黏度在高、中、低3個切變率下均顯著升高，血漿黏度也發生明顯的異常改變，同時，紅細胞壓積增大、紅細胞聚集力增強、紅細胞剛性增強以及紅細胞變形性出現下降；FIB、APTT、TT、PT均出現不同程度的病理改變，說明氣虛血瘀模型血液黏度升高。與模型組比較，補陽還五湯高、低劑量組均能夠顯著降低各切變率下的全血黏度，對血漿黏度、紅細胞聚集性、紅細胞壓積、紅細胞變形性以及凝血四項均有不同程度的改善作用。說明補陽還五湯可通過降低纖維蛋白原的含量、抑制凝血因子活性等途徑抑制內、外源性凝血途徑的激活，通過激活凝血酶原、促進凝血酶原激活物的生成、抑制凝血酶原激活物抑制物的釋放等途徑增強纖溶活性，改善血液瘀滯狀態。這一研究結果對于臨床治療氣虛血瘀證，改善血液濃、黏、凝、聚狀態具有一定的臨床指導意義。