系統性紅斑狼瘡患者血清PS-PLA1、DNase1L3和Lp-PLA2水平檢測及臨床意義*

張紹君,郭亞萍,李俊巧,陳 穎,劉 欣,宋文杰

保定市第一中心醫院：1.風濕免疫科；2.西院檢驗科；3.西院康復醫學二科，河北保定 071000

系統性紅斑狼瘡(SLE)是好發于育齡期女性的自身免疫性疾病，可累及全身多個器官，臨床表現復雜，發病機制不盡相同，多數患者死于感染或并發的心血管疾病[1]。SLE目前尚無根治方法，探討與SLE疾病相關的分子機制有助于指導臨床治療，改善患者預后。磷脂酰絲氨酸特異性磷脂酶A1(PS-PLA1)是一種特異性作用于磷脂酰絲氨酸并產生溶血磷脂酰絲氨酸的磷脂酶，被認為是一種參與免疫系統的溶血磷脂介質[2]。脫氧核糖核酸酶1 like 3 (DNase1L3)是一種能夠消化染色質中脫氧核糖核酸的分泌型核酸酶，以短片段的形式存在于外周血，其表達缺失可能導致抗脫氧核糖核酸反應和自身免疫[3]。脂蛋白相關磷脂酶A2(Lp-PLA2)是新型血管炎性反應標志物，與心腦血管疾病有關，近期研究發現Lp-PLA2在自身免疫性疾病中發揮重要作用[4]。本研究擬檢測79例SLE患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平，分析其與疾病活動度、血脂指標和腎功能的關系，旨在探討SLE的發病機制，為臨床治療提供一定參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入標準：(1)經臨床首次診斷為SLE，符合《系統性紅斑狼瘡診斷及治療指南》[5]中相關診斷標準；(2)既往無SLE病史；(3)SLE 疾病活動度評分(SLEDAI評分)≥5分。排除標準：(1)合并自身免疫性肝炎、自身免疫性胃炎、風濕或類風濕等其他免疫性疾病；(2)急慢性感染、血液系統疾病；(3)多囊腎、高血壓腎病、糖尿病腎病、腎癌；(4)合并糖尿病、代謝綜合征。選擇2018年1月至2020年4月本院風濕免疫科收治的79例SLE患者為SLE組；男11例，女68例；年齡22～48歲，平均(29.05±6.17)歲。另選擇同期于本院進行體檢的50例體檢健康志愿者為對照組；男9例，女41例；年齡21～52歲，平均(30.71±6.02)歲。SLE組和對照組性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。本研究獲得本院倫理會批準，患者及其家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法 所有受試者均采集空腹靜脈血3 mL(SLE組入院當日采集，對照組于體檢當日采集)，室溫靜置30 min血液凝固取上層液于離心管中，置于Microfuge 20低速自動平衡離心機(美國貝克曼庫爾特公司)3 000 r/min離心15 min(離心半徑10 cm)后取上清液上機檢測，當日未能完成檢測的標本-70 ℃保存于Snowsong DW-105W型超低溫冰箱(上海蘭嫩有限公司)，所有標本48 h內完成檢測。酶聯免疫吸附試驗法檢測血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平，所用儀器為Fluostar Omega全自動多功能酶標儀(德國BMG Labtech公司)，試劑盒購自上海酶聯生物科技公司。采用羅氏(上海)Modular全自動生化分析儀檢測血脂指標和腎功能指標，包括總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、血清尿素(Urea)、血清肌酐(Scr)。

1.3SLE疾病活動度評價 SLE患者入院后收集臨床和實驗室資料，采用SLEDAI評分[6]，根據胸膜炎、黏膜潰瘍、新發皮疹、脫發、膿尿、蛋白尿、血尿、管型尿、肌炎、關節炎、脈管炎、腦血管意外、發熱、血小板降低、白細胞減少、視覺受損、顱神經損傷、狼瘡性頭痛共計18項內容評價SLE疾病活動度，0～4分表示基本無活動，5～9分表示輕度活動，10～14分表示中度活動，≥15分表示重度活動。根據SLEDAI評分結果將患者分為輕度組(21例)、中度組(32例)、重度組(26例)。

2 結 果

2.1SLE組和對照組PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2、血脂指標、腎功能指標比較 SLE組入院時血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平高于對照組，DNase1L3水平低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05);SLE組血清TC、TG、LDL-C、Urea、Scr水平高于對照組，HDL-C水平低于對照組，差異有統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 SLE組和對照組 PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平、血脂指標、腎功能指標水平比較

2.2不同疾病活動度SLE患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平比較 血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平均隨疾病活動度的增加而升高(P趨勢檢驗<0.05)，輕度組、中度組、重度組整體比較，差異有統計學意義(P差異分析<0.05)；DNase1L3隨疾病活動度的增加而降低(P趨勢檢驗<0.05)，輕度組、中度組、重度組整體比較，差異有統計學意義(P差異分析<0.05)。見表2。

表2 不同疾病活動度SLE患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平比較

2.3相關性分析 Pearson相關分析顯示，PS-PLA1與SLEDAI評分、TC呈正相關，與HDL-C呈負相關(P<0.05)，與其他指標無相關性(P>0.05)。Lp-PLA2與LDL-C、SLEDAI評分、Urea、Scr呈正相關，與HDL-C呈負相關(P<0.05)，與其他指標無相關性(P>0.05)。DNase1L3與SLEDAI評分呈負相關(P<0.05)，與其他指標無相關性(P>0.05)。見表3。

表3 血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平與疾病活動度、血脂指標和腎功能指標的相關性分析

3 討 論

SLE是由環境、遺傳等因素引起的以B淋巴細胞異常活化、自身抗體產生、免疫復合物沉積為主要病理特征的自身免疫性疾病[7]。隨著疾病進展，SLE可累及多個臟器，尤其是腎臟，常威脅患者生命安全[8]。SLE患者血脂異常發生率在65.3%～84.6%，合并血脂異常SLE患者心血管疾病發病風險明顯增加[1]，因此，探討與SLE疾病活動度、血脂異常和腎功能損傷相關的生物學標志物有助于指導臨床治療和改善患者預后。

PS-PLA1是產生溶血磷脂酰絲氨酸的磷脂酶，屬于第2代生物活性脂質介質，從細胞膜中釋放的花生四烯酸衍生而來，通過細胞間信號轉導參與人體各種生理反應，與細胞活化有關[9]。目前PS-PLA1在SLE中的發病機制尚不清楚，本研究結果顯示，SLE組患者血清PS-PLA1水平明顯升高，且隨著疾病活動度增加而升高，說明PS-PLA1參與SLE發病和疾病活動過程，可為SLE疾病活動評估提供參考。相關性分析結果顯示，PS-PLA1水平與SLEDAI評分、TC呈正相關，與HDL-C呈負相關，提示PS-PLA1在SLE疾病活動和血脂異常機制中可能發揮一定作用，但具體機制尚不清楚。動物研究顯示，載脂蛋白A-I轉基因小鼠PS-PLA1高度表達，PS-PLA1過表達導致載脂蛋白A-I水平增加88%，TC水平增加78%，PS-PLA1參與體內脂質分解、代謝及細胞膽固醇外排過程，PS-PLA1過表達通過抑制清道夫受體-BI介導的膽固醇外排過程，進而增加血脂水平[10]。

DNase1L3是脫氧核糖核酸酶Ⅰ家族成員之一，具有3-OH端脫氧核糖核酸片段，能編碼分裂單鏈和雙鏈DNA的蛋白質，在細胞凋亡和壞死過程中參與核內脫氧核糖核酸的碎片化。目前研究顯示，DNase1L3基因功能缺失與SLE家族遺傳有關，DNase1L3參與強直性脊柱炎、類風濕關節炎、多發性肌炎/皮肌炎等多種自身免疫性疾病發病過程[11-14]。本研究結果顯示，SLE患者血清DNase1L3水平明顯降低，且隨著SLEDAI評分的升高而降低，DNase1L3水平與SLEDAI評分呈負相關，SUN等[14]報道顯示，強直性脊柱炎患者血清DNase1L3水平呈升高狀態，DNase1L3水平與疾病活動度、補體C3、C反應蛋白水平呈正相關，CARBONELLA等[12]研究顯示，SLE、多發性肌炎/皮肌炎患者中血清DNase1L3水平明顯降低，而類風濕關節炎患者血清DNase1L3水平保持不變，說明DNase1L3在不同自身免疫性疾病中可能存在不同的作用機制。本研究觀察DNase1L3與血脂指標、腎功能之間均無明顯相關性，說明DNase1L3可能并不參與SLE血脂異常和腎損傷過程。

Lp-PLA2是新型炎癥標志物，由巨噬細胞和淋巴細胞合成，可誘導單核細胞聚集于血管內膜并形成巨噬細胞，巨噬細胞凋亡后形成泡沫細胞，參與動脈粥樣硬化進程，Lp-PLA2 主要與血脂結合，其中80%的Lp-PLA2 與LDL 結合，其對于動脈粥樣硬化的作用與其結合的脂蛋白類型有關[15-16]。Lp-PLA2在SLE的研究報道尚不多見，本研究發現SLE組血清Lp-PLA2水平高于對照組，Lp-PLA2水平隨著疾病活動度增加而升高，說明疾病活動度高的SLE患者Lp-PLA2活性更高，Lp-PLA2可用來評估SLE活動度。本研究結果顯示，Lp-PLA2與SLE患者血脂指標HDL-C、LDL-C均存在相關性，說明Lp-PLA2可能通過調節脂質代謝參與SLE發病過程，此外，本研究還發現Lp-PLA2與SLE患者Urea、Scr呈正相關，提示Lp-PLA2水平升高可能導致SLE腎損傷。近年來研究顯示，腎臟功能受損時，單核細胞Lp-PLA2 mRNA表達上調，導致Lp-PLA2活性升高[17-18]。SLE患者血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平升高，DNase1L3水平降低，PS-PLA1、Lp-PLA2、DNase1L3水平均與SLE疾病活動度有關，Lp-PLA2、PS-PLA1可能參與了SLE血脂異常過程，且PS-PLA1可能在SLE腎損傷進程中發揮一定作用。值得注意的是，本研究納入的樣本量較少，且表3中r最大為0.631，呈中強相關，其相關性有一定誤差，后續可通過多中心調查、大樣本量的研究提高數據準確性。