MDSC、Th2、FoxP3+Treg及炎癥因子與HR-HPV感染宮頸病變的關系研究

梁秀蘭，謝夢珍，邱紅兵，李 明

1.邢臺市人民醫院婦科，河北邢臺 054000；2.河北省內丘縣人民醫院婦產科，河北邢臺 100191

宮頸癌是臨床較為常見的女性生殖道腫瘤疾病之一，流行病學調查顯示，我國的宮頸癌發病率為98.0/10萬，死亡率高達30.5/10萬[1-2]。研究認為，宮頸癌的發病與人乳頭瘤病毒(HPV)顯著相關，在病毒對機體的不斷侵染階段，HPV病毒的感染可能會造成機體免疫微環境及炎性反應的改變，間接促進腫瘤細胞的增殖、進展[3]。在病毒對機體侵染的早期，機體可通過與病毒的免疫抑制性作用消除病毒，少數患者由于病毒的持續性增殖，可能會造成宮頸上皮細胞的癌變[4]。叉頭狀轉錄因子-3(Foxp3)主要在機體的調節性T細胞(Treg)中進行增殖，對機體的免疫狀態至關重要[5]。輔助性T細胞2(Th2)在腫瘤細胞與機體免疫水平的分析中發揮重要作用[6]。髓系來源抑制性細胞(MDSC)對腫瘤細胞的逃逸具有重要意義[7]。炎癥因子水平的變化在疾病的進展中也發揮重要作用。目前，對于Th2、MDSC、FoxP3+Treg細胞和炎癥因子在宮頸病變中的作用尚不明確，尤其是上述指標在宮頸癌前病變到宮頸癌發病階段的變化亟待研究。本研究通過對MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞及炎癥因子與高危性HPV(HR-HPV)感染患者宮頸病變的關系分析，以期為臨床治療提供科學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇邢臺市人民醫院2017年1月至2019年12月收治的180例宮頸病變患者作為研究對象，平均年齡(42.15±2.03)歲，平均病程為(3.26±1.36)年，平均體質量指數(24.56±2.33)kg/m2，平均孕次(2.59±1.12)次，平均產次(1.27±0.60)次。其中宮頸上皮內瘤變Ⅰ級(CINⅠ組)患者39例，宮頸上皮內瘤變Ⅱ級(CINⅡ組)患者31例，宮頸上皮內瘤變Ⅲ級(CINⅢ組)患者35例，宮頸癌(UCC組)患者37例，宮頸炎(CC組)患者38例，5組患者的年齡、體質量指數及病程之間差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。所有患者均簽署知情同意書，并經醫院倫理委員會論證通過。患者納入標準：(1)所有患者均符合宮頸病變診斷標準[8]；(2)所有患者均為HP-HPV感染患者。排除標準：(1)妊娠者；(2)嚴重感染患者；(3)內分泌異常患者；(4)肝腎功能異常患者；(5)結締組織疾病患者。

1.2研究方法 所有患者入組后及時采肘靜脈血4 mL，采用流式細胞儀(FACS CANTO Ⅱ)對患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞水平進行檢測。將患者的血樣100 μL使用RPMI-1640培養液100 μL進行稀釋，隨后將其加入96孔平板中，使用丙二醇甲醚醋酸酯工作液、離子霉素工作液、莫能霉素工作液進行混合，輕輕混合后，在含有5%的二氧化碳培養箱中培養5 h，棄去上清液，再次向上述液體中加入CD4-FITC 單克隆抗體10 μL。在避光狀態下保存15 min，使用磷酸鹽緩沖液(PBS)進行清洗，使用破膜劑，避光狀態下保存15 min，再使用PBS進行清洗。使用流式細胞儀檢測MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞水平。

表1 5組患者的基線資料比較

1.3觀察指標 (1)分別對CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、UCC組、CC組患者的Th2、MDSC、FoxP3+Treg細胞水平進行比較。(2)分別對患者的白細胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、γ干擾素(INF-γ)水平進行比較。炎癥因子水平檢測主要采取酶聯免疫吸附試驗法，實驗試劑來自羅氏診斷產品(上海)有限公司，實驗操作流程嚴格按照說明書進行。

2 結 果

2.15組患者MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞水平比較 5組患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。進一步兩兩比較結果顯示，患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞水平從高到低依次為UCC組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組、CC組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.25組患者的炎癥因子水平比較 5組患者的IL-2、IL-10、IL-17A、TNF-α水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)，IL-4、IL-6、INF-γ水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。進一步兩兩比較結果顯示，IL-10、IL-17A、TNF-α水平從高到低依次為UCC組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組、CC組，差異有統計學意義(P<0.05)；IL-2從高到低依次為CINⅠ組、CC組、CINⅡ組、UCC組、CINⅢ組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表2 5組患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞水平比較

表3 5組患者的炎癥因子水平比較

2.3MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞及炎癥因子對宮頸病變程度的影響因素分析 以病變程度為因變量，上述有統計學意義的免疫細胞水平和炎癥因子為自變量，Logistic回歸分析結果顯示，Th2細胞、MDSC細胞、FoxP3+Treg細胞、IL-10、IL-17A、TNF-α、IL-2是影響宮頸惡性病變程度的危險因素(P<0.05)，見表4。

表4 Th2、MDSC、FoxP3+Treg細胞水平及炎癥因子對病程的影響分析

3 討 論

隨著經濟社會的不斷發展，人們生活習慣及飲食習慣不斷發生變化[9]，宮頸癌的發生率呈逐年上升的趨勢。流行病學調查顯示，宮頸癌有年輕化的趨勢[10]。有研究報道顯示，HPV感染在已婚婦女中較為常見，同時HR-HPV感染已經成為宮頸癌患者發病的重要誘因。在對機體的感染過程中，90%的HPV病毒可被正常的免疫系統清除，但是該病毒也存在一定的免疫逃避機制[11]。

在病毒感染機體的早期，FoxP3+Treg細胞在機體的免疫調節及免疫逃避機制中發揮重要作用。研究顯示，FoxP3+Treg細胞所產生的FoxP3蛋白廣泛存在于生物中，在FoxP3+Treg細胞的新陳代謝過程中發揮重要作用，也是調節性T細胞的重要標志物[12]。以往的研究顯示,在乳腺癌、膀胱癌、肝癌、肺癌患者的研究中，FoxP3蛋白水平呈明顯上升趨勢，機體FoxP3+Treg細胞可作為患者重要的預后監測指標之一，FoxP3+Treg細胞明顯升高，提示病毒對于機體免疫系統的逃逸風險顯著升高，對腫瘤的進展具有積極意義。本研究對不同病變程度的宮頸病變患者的研究結果顯示，隨著患者宮頸惡性程度的不斷升高，其FoxP3+Treg細胞水平呈顯著上升趨勢。吳帆等[13]對FoxP3+Treg細胞水平與宮頸病變的相關性分析結果指出，FoxP3+Treg細胞水平與患者的病變程度呈正相關，與本研究結果一致。

在HPV對機體持續感染過程中，機體局部病灶部位出現顯著的炎性反應，而在炎性反應過程中，人體的免疫系統對于腫瘤的發生、發展具有重要意義。已有研究報道顯示，Th細胞在機體的免疫功能中具有重要的調節作用，Th2細胞主要通過對IL-4、IL-10炎癥因子的調控作用促進細胞的癌變[14]。同時，隨著Th2細胞水平的明顯升高，勢必會造成Th1細胞水平的顯著性下降，Th1/Th2失衡，Th1細胞對于抗腫瘤效應介導作用顯著下降，進一步促進患者的腫瘤進展。在本研究中，隨著患者的病灶部位惡性程度的不斷升高，Th2細胞呈明顯上升的趨勢。齊涵沁等[15]通過對宮頸癌病變程度與Th2細胞水平的分析顯示，隨著Th2細胞的上升，患者的宮頸惡變程度呈明顯上升趨勢。

MDSC是具有抑制性免疫作用的免疫細胞，在免疫逃逸、炎癥、感染中發揮重要作用。在惡變程度較高的腫瘤患者中，其細胞水平呈明顯上升趨勢，通過多種炎癥因子的相互作用，促進機體免疫系統對腫瘤細胞的逃逸作用。余花艷等[16]通過對不同病變患者MDSC細胞水平的分析顯示，患者的MDSC細胞與腫瘤病變程度明顯相關。

以往的研究顯示，IL-2主要通過對機體局部炎性反應水平的升高，進而影響病灶部位的腫瘤進展[17]，與本文結果不一致，分析原因為本研究樣本量較小，故與以往研究差異較大。

綜上所述，MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞均為HR-HPV感染患者宮頸病變的重要影響因素，通過MDSC、Th2和FoxP3+Treg細胞、炎癥因子的分析，可能實現對早期宮頸惡性病變的預測。