膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用研究

摘 要：免疫膠體金技術(shù)多種方法結(jié)合固相標(biāo)記免疫檢測技術(shù)，GICA原理是以條狀纖維層材料為固相，使樣品與層析材料待測物受體發(fā)生免疫反應(yīng)。分析技術(shù)可用于家庭成員診斷保健等方面，目前廣泛應(yīng)用于食品檢測、生物制劑定性等領(lǐng)域。今后提高靈敏度同時(shí)，膠體金免疫層析技術(shù)將向定量及多元檢測方向發(fā)展。研究介紹膠體免疫層析技術(shù)，論述食品檢測中膠體金免疫層析技術(shù)的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：膠體金免疫層析技術(shù);食品檢測;應(yīng)用

食品安全問題是全球話題，目前食品安全出現(xiàn)生物毒素等問題，開發(fā)滿足要求的快速方便食品安全分析檢測技術(shù)非常迫切。近年來食品安全快速檢測技術(shù)包括ELISA等，ELISA法檢測時(shí)間較長，免疫層析技術(shù)是免疫與色譜層析技術(shù)結(jié)合的免疫分析法，原理是借助毛細(xì)作用使樣品溶液在層析條泳動(dòng)，通過酶促顯色反應(yīng)快速得到直觀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。省去繁瑣的加樣等步驟，技術(shù)適用于食品現(xiàn)場快速檢測。免疫金交通層析法具有靈敏度高，無需儀器等特點(diǎn)廣泛應(yīng)用于食品安全檢測領(lǐng)域。

1.膠體金免疫層析技術(shù)研究

當(dāng)前食品安全問題成為全球的公共衛(wèi)生問題，歐盟國家發(fā)現(xiàn)含有殺蟲劑氟蟲腈成分污染雞蛋，產(chǎn)毒菌在易感農(nóng)作物中頻繁出現(xiàn)，研究食品安全快速檢測方法尤為重要，CGIS膠體金標(biāo)記免疫層析技術(shù)是90年代興起的快速診斷技術(shù)，為食源性致病菌快速檢測提供解決途徑，成為食品安全快速定量檢測研究的熱點(diǎn)。隨著膠體金免疫層析技術(shù)的發(fā)展，將在食品安全檢測中得到廣泛應(yīng)用。

1.1 膠體金免疫層析技術(shù)檢測原理

免疫層析按抗原與抗體結(jié)合方式分為競爭性與非競爭性，膠體金是繼放射性核素標(biāo)記發(fā)展的固相標(biāo)記物，膠體金顆粒在顯微鏡下大多為較小球形，膠體金為疏水性金溶膠，檢測中可用肉眼快速檢測樣品【1】。膠體金標(biāo)記是在弱堿環(huán)境下膠體金帶負(fù)電荷，技術(shù)可形成穩(wěn)定膠體，膠體金可與其他生物大分子非共價(jià)結(jié)合，近年來膠體金標(biāo)記成為重要的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是在還原劑作用下聚合呈特定金顆粒，膠體金顆粒具有高電子密度特性，聚集出現(xiàn)肉眼課件粉色斑點(diǎn)。

1.2 免疫膠體金制備

生物納米顆粒在免疫測定中性能取決于蛋白質(zhì)生物活性，制備膠體金質(zhì)量關(guān)乎試條特性。膠體金制備法分為理化法，物理法包括熱分解法等，常用的為化學(xué)還原法，還原劑原理為使金粒子還原變位金原子，可制備不同大小膠體金顆粒【2】。膠體金粒徑與制備加入檸檬酸鈉量相關(guān)，可通過測定吸光度確定膠體金顆粒大小。免疫膠體金制備是膠體吸附到膠體金表面，受到電解質(zhì)等多方面的影響。免疫膠體金標(biāo)記步驟為將蛋白質(zhì)用雙蒸水透析除去電解質(zhì)，用0.1mol/L的K2CO3調(diào)節(jié)膠體金pH，標(biāo)記蛋白適當(dāng)稀釋后滴加入膠體金中，滴加10%的BSA至濃度0.5%攪拌1h終止反應(yīng)。加入等體積1%BSA溶液，獲得膠體金探針保存?zhèn)溆谩?/p>

2.膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用

近年來全球發(fā)生食源性病原微生物引起食品安全事故頻發(fā)，大腸桿菌等致癌病菌引起感染常見。目前廣泛使用的病原微生物檢測法存在過程繁瑣，不利于現(xiàn)場快速檢測等問題。研究食品安全快速檢測方法非常重要。膠體金免疫層洗發(fā)是將膠體金標(biāo)記等多種方法結(jié)合的固相免疫檢測技術(shù)，具有適用于現(xiàn)場檢測等特點(diǎn)。食品安全檢測中膠體金免疫層析技術(shù)應(yīng)用包括食品污染，食品添加劑，農(nóng)藥殘留檢測等。

2.1 食品農(nóng)獸藥殘留檢測

食品中農(nóng)獸藥速度殘留嚴(yán)重威脅消費(fèi)者的健康，由于膠體金免疫層析法簡單方便等優(yōu)點(diǎn)廣泛應(yīng)用。研究利用膠體金標(biāo)記抗幅喹諾酮類單克隆抗體制備膠體金免疫檢測失調(diào)，經(jīng)LC-MS/MS法驗(yàn)證檢測結(jié)果可靠【3】。研究以膠體金標(biāo)記抗磺胺二甲嘧啶多克隆抗體，與高效液相色譜法對(duì)比檢測豬肉樣品檢測結(jié)果一致。阿特拉津是持久性廣譜除草劑，使用量達(dá)殘留期長，目前被列為可疑致癌物質(zhì)。研究采用膠體金免疫層洗發(fā)進(jìn)行檢測玉米中阿特拉津殘留實(shí)驗(yàn)，通過樣品實(shí)際檢出值對(duì)比得出滿足對(duì)最高殘留限量要求。

2.2 非食品添加劑成分檢測

近年來一些食品經(jīng)營者非法添加食品添加劑，研究非食用食品添加成分羅丹明B檢測技術(shù)非常迫切。大量文獻(xiàn)采用HPLC等方法精度滿足要求，但存在適用范圍小，操作復(fù)雜等問題。國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)有關(guān)食品有害物檢測研究多數(shù)藥物殘留為有限量標(biāo)注。羅丹明類非食品色素不允許檢出，將免疫膠體金技術(shù)用于羅丹明檢測可行。三聚氰胺是對(duì)身體有害的化工原料，研究乳制品三聚氰胺檢測方法，實(shí)驗(yàn)采用膠體金免疫層析法快速檢測，對(duì)三聚氰胺定性檢測，可適用于三聚氰胺快速篩查檢測。實(shí)現(xiàn)乳制品三聚氰胺定性定量檢測。

結(jié)語

免疫膠體金技術(shù)是第四大標(biāo)記技術(shù)，由于具有簡單快速等優(yōu)點(diǎn)，適用于批量檢測等。目前國內(nèi)對(duì)膠體金免疫層析產(chǎn)品研究尚無成型產(chǎn)品，由于食品快速檢測產(chǎn)品市場巨大，盡快研制高質(zhì)量免疫層析產(chǎn)品，對(duì)改善食品質(zhì)量安全起到重要作用。實(shí)現(xiàn)多元檢測是未來免疫層析分析發(fā)展方向。多元檢測可在精確控制樣品加入量下對(duì)待測物定量。可通過復(fù)合多條件層析條方式，確定待測物含量濃度區(qū)間。提高檢測特異性對(duì)免疫層析產(chǎn)品非常重要。

參考文獻(xiàn)：

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[2]農(nóng)彩美. 膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用[J]. 現(xiàn)代食品，2021，（09）：108-110.

[3]翟培，韓晉輝.膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全現(xiàn)場快速檢測中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2020（04）：225-227+229.

作者簡介：

邵麗雁，1982年7月25日，女，漢，遼寧省普蘭店市人，本科，畢業(yè)院校：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，任職單位：黑龍江省榮貝測試科技有限責(zé)任公司，職稱：初級(jí)，研究方向：食品檢驗(yàn)。