正交試驗法優(yōu)選參葛顆粒的醇提工藝

單鑫 徐丹 涂清波 陳璟

摘 要：通過對參葛顆粒的醇提工藝研究，選取最優(yōu)的醇提工藝，并進(jìn)行驗證。選取考察指標(biāo)葛根素、五味子醇甲、醇提浸出物得率，采用L9（34）正交試驗設(shè)計法考查乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時間進(jìn)行醇提工藝研究，發(fā)現(xiàn)醇提次數(shù)對所選指標(biāo)的影響較大，醇提時間、乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)、乙醇用量未見顯著性影響，優(yōu)選醇提工藝為加入飲片總量10倍的60%乙醇，提取3次，每次1 h。該醇提工藝穩(wěn)定可行，可用于參葛顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：參葛顆粒;醇提工藝;葛根素;五味子醇甲

參葛顆粒由葛根、黨參、五味子、枸杞子、甘草五味藥組成，諸藥合用，具有養(yǎng)陰清熱、化瘀通絡(luò)的功效，對絡(luò)脈不和、酒毒傷中所引起的酒精性肝損傷有較好的保護(hù)作用[1-2]。

醇提藥物葛根中的主要有效成分是葛根素，木脂素是五味子中的有效成分。本研究選取葛根素、五味子醇甲以及醇提浸出物得率作為評價指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗法優(yōu)選參葛顆粒的醇提工藝，以擴(kuò)大其適用范圍[3-4]。

1 ? ?試驗材料

1.1 ?儀器

WATERS Alliance-017（2998PDA）（美國Waters ? ? ? ?公司）;HH-420型水浴鍋（上海力辰邦西公司）;FA1104N電子天平（上海天平儀器廠）;MS-105DU型電子天平（MettlerToledo）;Milli-Q超純水系統(tǒng)（Millipore）; ? ? ?KQ-500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 ?試藥

葛根、黨參、五味子、（安徽豐原銅陵中藥飲片有限 ? ? ? 公司）;葛根素、五味子醇甲（中國食品藥品檢定研究院）;甲醇、乙腈（美國Merk公司）;超純水（實驗室自制），其余試劑為分析純。

2 ? ?試驗方法與結(jié)果

2.1 ?醇提工藝

按照L9（34）正交表進(jìn)行醇提工藝正交設(shè)計，考察因素選擇乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時間進(jìn)行3味飲片的回流提取工藝優(yōu)選，選取葛根素、五味子醇甲、醇溶性浸出物為指標(biāo)進(jìn)行測定，因素水平如表1所示。

2.2 ?樣品處理方法

稱取葛根素10 g、五味子20 g、黨參10 g，共9份，分別以相應(yīng)的因素水平進(jìn)行回流提取，醇提液過濾，濃縮成浸膏備用。

2.3 ?葛根素質(zhì)量

（1）色譜條件。色譜柱：Tnature C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：甲醇-水（25∶75），檢測波長：250 nm，流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

（2）供試品溶液。取樣品稠膏適量（相當(dāng)于葛根飲片0.1 g），精密稱定，置于250 mL錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱重，回流30 min，冷卻后稱重，用30%乙醇補(bǔ)足失重，搖勻、過濾、收取濾液即得。

2.4 ?五味子醇甲質(zhì)量

（1）色譜條件。Tnature C18柱（4.6 mm×250 mm， ? ? ?5 μm），流動相：甲醇-水（65∶35），流速：1.0 mL/min，檢測波長：250 nm，柱溫：35 ℃，進(jìn)樣量：10 μL。

（2）供試品處理。稱取樣品稠膏適量（相當(dāng)于五味子飲片0.25 g），精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇 ? ? ? ?20 mL，超聲處理（功率300 W，頻率20 kHz）25 min，取出，加入甲醇，定容、搖勻、過濾、收取濾液即得。

2.5 ?醇提浸出物得率

取各醇提正交樣品稠膏（相當(dāng)于生藥飲片2 g），精密稱定，置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中，置于105 ℃烘箱中，干燥3 h，取出，置于干燥器中，冷卻30 min，放涼，精密稱重，計算醇提浸出物得率。

2.6 ?正交試驗結(jié)果與分析

9份樣品中測得的葛根素、五味子醇甲、醇提浸出物得率。采用綜合評分法，綜合評分=（Amax-Ai）×0.4+（Bmax-Bi）×0.4+（Cmax-Ci）×0.2+100。

Ai為各組葛根素質(zhì)量，Amax為各組中葛根素質(zhì)量最大值;Bi為各組五味子醇甲質(zhì)量，Bmax為各組五味子醇甲質(zhì)量最大值;Ci為各組浸出物得率，Cmax為各組中浸出物得率最大值（見表2～3）。

方差結(jié)果表明，試驗各因素對所選指標(biāo)的影響依次為： C（提取次數(shù)）>D（提取時間）>A（乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)）>B（乙醇用量），且提取次數(shù)對結(jié)果有顯著性影響;確定參葛顆粒醇提最佳工藝為：A2B2C3D2，即加入飲片總量10倍的60%乙醇，提取3次，每次1 h。

2.7 ?最佳醇提工藝驗證

稱取配方量10倍的葛根、黨參、五味子飲片3份，依照上述優(yōu)選的醇提工藝進(jìn)行驗證，取樣測定浸膏中葛根素、五味子醇甲及浸出物得率。每份樣品中葛根素質(zhì)量分別為679.02、683.87、676.37 mg;五味子醇甲質(zhì)量分別為34.47、35.85、34.46 mg;浸出物得率分別為30.79%、30.41%、31.17%。結(jié)果表明，優(yōu)選醇提工藝穩(wěn)定可行。

3 ? ?討論

（1）醇取工藝選擇參葛顆粒葛根、黨參、五味子、枸杞子、甘草5味藥組成，以醇溶性成分為主，葛根主要化學(xué)成分為異黃酮類、甾體類、三萜類、葛酚苷類、香豆素類等。其中，主要有效成分為異黃酮類化合物等，五味子主要含有木脂素、多糖、揮發(fā)油、三萜類等有效成分，本試驗選擇回流提取法[5-7]。

（2）評價指標(biāo)選擇藥理研究表明葛根中的葛根素、三萜類成分均能顯著提高肝臟ALDH、ADH活性，緩解酒精中毒的癥狀。五味子中所含木脂素類、多糖類成分有興奮中樞神經(jīng)、增強(qiáng)心臟收縮力及心血管系統(tǒng)張力、降低ALT活性等作用。本試驗選取的葛根素、五味子醇甲是組方藥物的主要有效成分，與《中國藥典》（2015年版）質(zhì)量控制指標(biāo)一致，從原料到制劑全面控制制劑質(zhì)量，有助于臨床用藥的安全性及有效性[8-9]。

[參考文獻(xiàn)]

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Optimization of alcohol extraction process of Shenge granule by orthogonal test method

Shan Xin， Xu Dan， Tu Qingbo， Chen Jing

（Nanjing University of Chinese Medicine Hanlin College， Taizhou 225300， China）

Abstract：Through the study of alcohol extraction process of Shenge granule， the optimal alcohol extraction process was selected and verified. The extraction yield of puerarin， schisandrin and alcohol was studied by using L9（34） orthogonal test design method. The extraction process of ethanol concentration， ethanol dosage， extraction times and extraction time was studied. It was found that the extraction time， ethanol concentration and ethanol dosage had no significant effect on the selected indexes. The optimum extraction process was 60% ethanol with 10 times the total amount of drinking pieces and extracted three times and 1 h each time. The alcohol extraction process is stable and feasible， and can be used for quality control of Shenge granule.

Key words：Shenge granule; alcohol extraction process; puerarin; schisandra chinensis

基金項目：2018年江蘇省高校自然基金（18KJB360011）;2019年江蘇省中醫(yī)藥管理局項目（YB201997）

作者簡介：單鑫（1986— ），男，江蘇泰州人，講師，碩士;研究方向：中藥品質(zhì)評價與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

通信作者：陳璟（1987— ），男，講師，碩士;研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。