妊娠糖尿病患者血清miR-137、miR-351表達對妊娠結局的影響

熊雯 周新娥 李南

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是糖尿病的一種獨立類型，是指在孕婦妊娠期間發生或首次發現的糖耐量異常，屬于妊娠期常見并發癥[1]。GDM孕婦血糖調節能力、血脂代謝功能、心肺功能、免疫功能等發生異常，嚴重危害母嬰健康，易導致妊娠結局不良[2]。目前，GDM發病機制研究已取得了較大進展，由胰島素抵抗引起的體內血糖、血脂異常是GDM的重要病理機制，但具體過程尚未完全明確[3]。微小RNA(micro RNA，miRNA)是一種長度為19～24 nt的非編碼單鏈RNA分子，在多種疾病發生發展中均發揮作用。近年來，已有研究發現多種mRNA參與GDM的生理過程，并影響妊娠結局[4]。miR-137、miR-351分別與GDM患者血管內皮細胞功能異常及小鼠卵泡發育有關[5，6]，但兩者是否對GDM患者妊娠結局有影響筆者尚未見相關報道。本研究通過檢測GDM患者血清miR-137、miR-351水平，探討兩者對妊娠結局的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月至2019年8月在本院產檢并分娩的GDM孕婦138例(觀察組)為研究對象，根據妊娠結局分為良好組(70例)和不良組(68例)；選取同期健康孕婦140例(對照組)為對照。詢問受試者妊娠生育史、糖尿病家族史，記錄年齡、孕周、孕前體重、身高，計算孕前體重指數(body mass index，BMI)。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①診斷符合中華醫學會婦產科學分會產科學組、中華醫學會圍產醫學分會妊娠合并糖尿病協作組制訂的《妊娠合并糖尿病診治指南(2014)》[7]，當75 g口服葡萄糖耐量試驗(oral glucose tolerance test，OGTI)服糖后1 h血糖(plasma glucose，PG)≥10.0 mmol/L或服糖后2 h PG≥8.5 mmol/L或空腹血糖(fasting plasma glucose，FPG)≥5.1 mmol/L時診斷為GDM；②經醫院倫理委員會審核，符合倫理學相關規定；③研究對象及家屬知情，并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準：①患有嚴重器官性疾病、精神疾病、感染性疾病、代謝性疾病、免疫系統疾病、內分泌疾病或血液系統疾病者；②妊娠前存在糖尿病、脂代謝紊亂者；③患有妊娠期其他并發癥者；④多胎妊娠者；⑤不服從檢測安排者；⑥臨床資料不全者。

1.3 試劑與儀器 化學發光試劑盒(貨號：ZY-11256)購自上海澤葉生物科技有限公司；TRIzol試劑(貨號：GMS12279)購自深圳子科生物科技有限公司；逆轉錄試劑盒(貨號：AB-4366596)購自上海嶸崴達實業有限公司；熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR)檢測試劑盒(貨號：KL190)購自上海康朗生物科技有限公司；全自動生化分析儀(型號：AU5800)購自美國貝克曼庫爾特有限公司；qRT-PCR儀(型號：ABI 7500)購自美國Applied Biosystems公司；引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.4 血糖、胰島素、血脂水平檢測 清晨抽取受試者空腹外周靜脈血5 ml于采血管中，4℃ 3 500 r/min離心10 min，取上層血清。采用化學發光法檢測FPG、空腹血清胰島素(fasting serum insulin，FINS)水平，并計算胰島素抵抗指數(homeostasis model assessment-insulin resistance，HOMA-IR)，HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。使用全自動生化分析儀檢測血清總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)水平。

1.5 qRT-PCR法檢測血清miR-137、miR-351水平 使用TRIzol試劑提取血清總RNA，紫外分光光度計檢測RNA質量，瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA完整性。使用逆轉錄試劑盒將RNA逆轉錄成cDNA，檢驗合成cDNA質量。采用qRT-PCR法檢測血清miR-137、miR-351水平，U6作為內參基因。反應條件：94℃ 15 min；94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，循環40次；72℃延伸8 min。采用2-ΔΔCt法計算血清miR-137、miR-351相對表達量。miR-137上游引物：5’-ACACTCCAGCTGGGTTATGGCT-3’，下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’；miR-351上游引物：5’-ACACTCCAGCTGGGTCCCTGAGGAGCCCTTGG-3’，下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTCAGGCTC-3’；內參U6上游引物：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，下游引物：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。

2 結果

2.1 觀察組和對照組孕婦臨床資料比較 觀察組、對照組孕婦年齡、孕周、孕前BMI、血清HDL-C水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；與對照組相比，觀察組孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 觀察組和對照組孕婦血清miR-137、miR-351水平比較 與對照組比較，觀察組孕婦血清miR-137、miR-351水平均顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 觀察組和對照組孕婦臨床資料比較

表2 觀察組和對照組孕婦血清miR-137、miR-351水平比較

2.3 良好組和不良組GDM孕婦胰島素、血糖、血脂水平 良好組、不良組GDM孕婦血清HDL-C水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；與良好組比較，不良組GDM孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 良好組和不良組GDM孕婦胰島素、血糖水平比較

2.4 良好組、不良組GDM孕婦血清miR-137、miR-351表達水平 與良好組比較，不良組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平均顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

2.5 GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平與其他臨床指標的相關性 Pearson相關性分析結果顯示，血清miR-137水平與FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關(P<0.05)；血清miR-351水平與FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關(P<0.05)，與FPG、HOMA-IR均無明顯相關關系(P>0.05)。見表5。

表4 2組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平比較

表5 GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平與其他臨床指標的相關性分析

2.6 影響GDM孕婦妊娠結局的多因素分析 將妊娠結局作為因變量，以FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C、miR-137、miR-351水平為自變量進行COX回歸分析，結果顯示，FPG、血清TG、miR-137水平為影響GDM孕婦妊娠結局的獨立危險因素(P<0.05)。見表6。

表6 影響GDM孕婦妊娠結局的多因素分析

3 討論

研究認為，GDM發病與2型糖尿病發病基礎類似，可能與患者妊娠期間存在的胰島素抵抗和胰島素分泌功能相對不足有關，但也有研究認為GDM病理特征與肥胖類似，認為脂肪代謝異常、糖耐量異常等病理變化與由脂肪細胞分泌的特定細胞因子量變化異常有關[8]。妊娠過程中，因孕期進補超過母嬰正常營養需求等原因，體內糖脂水平異常，但大部分孕婦可增加胰島素分泌或調控脂肪細胞分泌以維持正常糖脂代謝[9，10]。存在胰島素抵抗的孕婦在血糖升高時，由于胰島素靶器官、靶組織對胰島素敏感性下降，無法增加胰島素分泌或增加胰島素分泌亦無法調控體內糖脂代謝，從而導致GDM發生[11]。本研究中，觀察組孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平較對照組均顯著升高，不良組GDM孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平較良好組均顯著升高，表明GDM孕婦體內糖脂代謝紊亂，胰島素分泌無障礙，可能是胰島素調控糖脂代謝的靶器官、靶組織、靶受體缺少對胰島素的敏感性所致。

miRNA可由胎盤分泌，并在母體血液中穩定存在，通過調控細胞增殖、分化、遷移、凋亡、血管再生及糖脂代謝等過程，參與胰島素抵抗、分泌、糖代謝等妊娠期糖尿病發病機制及胎盤異常、胎兒血管內皮細胞損傷等妊娠期病理學改變，并對胎兒生長發育及GDM患者母嬰健康近遠期風險造成影響。Poirier等[12]研究發現，miRNA在GDM患者妊娠過程中發揮代謝和發育調節劑功能，可能參與其發病和妊娠結局等過程。明艷等[4]研究發現，miR-301a可能通過調節機體抗炎-促炎失衡影響GDM發生發展，可能成為預測、治療GDM的重要靶點。張婧怡等[13]研究發現，miRNA-101水平在GDM患者胎盤中異常升高，可能通過EZH2-H3K27me3途徑降低胎盤滋養細胞增殖、遷移能力，從而參與GDM發病的病理機制。彭海燕等[14]在GDM樣本miRNAs差異表達分析調查中發現，miR-137在GDM患者16-19周外周血、37周胎盤中均呈差異性表達。張星星等[15]通過靶基因預測發現，miR-351與基因轉錄及細胞代謝水平有關，且其變化水平較miR-143更明顯。本研究中，觀察組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平較對照組均顯著升高，不良組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平較良好組均顯著升高，表明miR-137、miR-351可能參與GDM發生發展，并與患者預后有關，但具體途徑未知。本研究結果顯示，血清miR-137水平與FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關，血清miR-351水平與FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關，表明miR-137與糖脂代謝過程聯系緊密，miR-351與胰島素分泌、血脂水平關系密切，兩者均可能參與對糖脂代謝過程的調控[16,17]。

本研究進一步分析影響GDM孕婦妊娠結局的因素，結果顯示，FPG、血清TG、miR-137水平為影響GDM孕婦妊娠結局的獨立危險因素，表明FPG、血清TG、miR-137水平升高可初步預測GDM孕婦妊娠結局不良，需及時調整治療措施。

綜上所述，GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平顯著升高，與FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關，其中，血清miR-137水平是影響GDM孕婦妊娠結局的獨立危險因素，可為臨床GDM疾病治療提供一定實驗參考。