不同炮制方法對蒼術中蒼術素含量及蒼術特征圖譜的影響

趙娟，王科，楊帆（湘潭市食品藥品檢驗所，湖南 湘潭 411100）

蒼術為菊科植物茅蒼術Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北蒼術Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖，辛、苦，溫，歸脾、胃、肝經，具有燥濕徤脾、祛風散寒、明目的功效，用于濕阻中焦、脘腹脹滿、泄瀉、水腫、腳氣痿躄、風濕痹痛、風寒感冒、夜盲、眼目昏澀[1]。蒼術的炮制品從唐代開始已有記載，歷代沿用的方法有炒焦、炒黃、炒炭、米泔水炒、麩炒、土炒、醋炒、鹽炒、酒制等20 余種[2]，而目前《中國藥典》2020年版一部僅收錄了生品和麩炒兩種[1]。

蒼術是常用中藥材，不同的炮制方式在臨床使用時有不同藥效[3]，本文采用了麩炒、炒焦、曬干、烘干4 種常用且操作簡單的炮制方式，分別對茅蒼術和北蒼術進行處理，運用HPLC 法測定蒼術素的含量，并通過特征圖譜比較炮制前后的成分變化情況，旨在為蒼術的炮制和臨床使用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫1260高效液相色譜儀，包括VWD1260紫外檢測器（美國安捷倫公司）；SHIMADZU 電子天平（AUW220D）（日本島津）；高速萬能粉碎機FW100（北京市永光明醫療儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱WGLL-125BE（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

蒼術素對照品（批號：111924-201605，純度：99.5%）、白術內酯Ⅱ對照品（批號：111976-201501，純度：99.9%）、白術內酯Ⅲ對照品（批號：111978-201501，純度：99.9%）（中國食品藥品檢定研究院）；β-桉葉醇對照品（STANDARD，批號：473-15-4，純度＞98%）；蒼術苷A 對照品（成都普瑞發科技開發有限公司，CAS：126054-77-1，純度：98%）；北蒼術對照藥材（批號：120983-201605），茅蒼術對照藥材（批號：120932-201708）（中國食品藥品檢定研究院）；色譜甲醇（批號：R4CG2H）、色譜乙腈（批號：P3RA1H）（Honeywell）；磷酸（分析純，批號：20171218）（國藥集團化學試劑有限公司）；甲苯（上海沃凱生物技術有限公司，批號：20180111）；純化水實驗室自制。

1.3 樣品來源

樣品來源于當地采挖，經本所蔡永副主任藥師鑒定為茅蒼術Atractylodes lancea（Thunb.）DC.和北蒼術Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的根莖鮮品，其中茅蒼術采自湖北英山縣，北蒼術采自河北涉縣。

2 方法與結果

2.1 炮制方法

參照《中國藥典》2020年版四部[4]（通則）0213 炮制通則和《湖南省中藥飲片炮制規范》2010年版[5]，麩炒和炒焦由湖南亞飛中藥飲片有限公司炮制完成，具體操作如下：曬干：將鮮品洗凈，曬干，撞去須根，再洗凈潤透，切片，曬干。

烘干：將鮮品洗凈，烘干，撞去須根，再洗凈潤透，切片，調節電熱鼓風干燥箱溫度為50℃烘烤24 h。

麩炒：將鮮品洗凈，曬干，撞去須根，再洗凈潤透，切片，按照100 kg 洗凈曬干切片的樣品加10 kg 麩皮的比例加入麩皮，炒至表面呈黃色或深黃色時，取出，篩去麩皮，放涼。

炒焦：將鮮品洗凈，曬干，撞去須根，再洗凈潤透，切片，放至鍋中不斷翻炒，至表面呈棕黑色，取出，放涼。

2.2 水分值的測定

蒼術的水分值按照《中國藥典》2020年版四部[4]（通則0832）第四法測定，結果見表1。

表1 不同炮制方法下蒼術的水分值(%)Tab 1 Water percentage in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%)

2.3 不同炮制方法下蒼術中蒼術素的含量情況

精密稱取蒼術素對照品10.80 mg，加甲醇制成21.60 μg·mL－1的溶液，即得。將“2.1”項下4 種炮制方法制備的蒼術粉碎，過三號篩，取約0.2 g，按照《中國藥典》2020年版一部[1]蒼術項下的含量測定方法進行檢測，結果見表2。單因素方差分析采用統計軟件SPSS 21.0 進行分析。

表2 不同炮制方法蒼術中蒼術素的含量(%， ±s，n ＝3)Tab 2 Content of atractylodin in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%， ±s，n ＝3)

表2 不同炮制方法蒼術中蒼術素的含量(%， ±s，n ＝3)Tab 2 Content of atractylodin in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%， ±s，n ＝3)

注：不同字母代表差異有統計學意義（P ＜0.05）。Note：Different letters represent significant differences（P＜0.05）.

炮制方法 茅蒼術蒼術素含量 北蒼術蒼術素含量曬干烘干麩炒炒焦0.438±0.07a 0.416±0.01b 0.348±0.06c 0.273±0.03d 0.503±0.03a 0.528±0.05a 0.362±0.06b 0.287±0.05c

茅蒼術與北蒼術經過不同方法炮制后，蒼術素的含量為：曬干法＞烘干法＞麩炒法＞炒焦法，且不同方法之間蒼術素的含量有顯著差異，但均高于藥典標準（蒼術藥材及凈制飲片按干燥品計，蒼術素含量不得少于0.30%；麩炒蒼術則不得少于0.20%）。

2.4 不同炮制方法下蒼術的特征圖譜

2.4.1 對照品溶液的配制 精密稱取蒼術素、白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ、β-桉葉醇、蒼術苷A 對照品適量，分別置棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容到刻度，配制成含蒼術素0.0216 mg·mL－1，白術內酯Ⅱ0.3026 mg·mL－1，白術內酯Ⅲ0.4265 mg·mL－1，β-桉葉醇0.2282 mg·mL－1，蒼術苷A 0.4955 mg·mL－1的對照品溶液，裝入棕色液相進樣小瓶備用。

2.4.2 供試品溶液的制備 試驗避光操作。分別精密稱定不同炮制方法下的茅蒼術和北蒼術粉末各約1.00 g（過三號篩），置150 mL 具塞錐形瓶中，精密加入50 mL 甲醇，稱取重量，超聲提取40 min（功率250 W，頻率40 kHz），取出放置冷卻至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液即為供試品溶液。裝入棕色液相進樣小瓶備用。

2.4.3 色譜條件 色譜柱為Agilent 5 TC-C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A），0.5%磷酸溶液（B），梯度洗脫，洗脫程序見表3[6]；柱溫為30 ℃；流速為1 mL·min－1；檢測波長為220 nm；進樣量為20 μL。

表3 流動相梯度洗脫程序Tab 3 Gradient elution program

2.5 方法學考察

2.5.1 精密度試驗 取同一批北蒼術，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項下色譜條件連續進樣6 次，記錄色譜圖，以蒼術素為參照，共有峰相對保留時間RSD＜1.0%，相對峰面積RSD＜1.6%，結果表明儀器精密度良好。

2.5.2 穩定性試驗 取同一批北蒼術，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項下色譜條件分別在0、6、12、24 h 和1 周后進樣分析，記錄色譜圖，以蒼術素為參照，共有峰相對保留時間RSD＜1.0%，相對峰面積RSD＜1.9%。結果表明樣品在1 周內穩定性良好。

2.5.3 重復性試驗 取同一批北蒼術6 份，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，以蒼術素為參照，共有峰相對保留時間RSD＜1.3%，相對峰面積RSD＜1.7%。結果表明方法重復性良好。

2.6 對照特征圖譜

取“2.4.1”項下對照品溶液，按照“2.4.3”項下色譜條件進樣分析，色譜圖見圖1。

圖1 各對照品HPLC 圖譜Fig 1 HPLC chromatogram of the controls

2.7 茅蒼術和北蒼術對照藥材的特征圖譜

取茅蒼術對照藥材和北蒼術對照藥材各約1.00 g，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，結果如圖2所示。

2.8 不同炮制方法下茅蒼術和北蒼術的特征圖譜

取茅蒼術和北蒼術藥材各約1.00 g，按“2.4.2”項下方法制備供試溶液，按“2.4.3”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，結果見圖3及圖4。

如圖3所示，茅蒼術在不同炮制方法下特征圖譜的主要區別在與1號峰和2號峰，麩炒和炒焦后，1 號峰和2 號峰不明顯。如圖4所示，北蒼術的炒焦和麩炒品在3 號峰到6 號峰之間比曬干品有更豐富的色譜峰。結合圖2～4 來看，茅蒼術和北蒼術的比較：茅蒼術7 號峰比北蒼術含量高，茅蒼術9號峰和10 號峰的比值＞1，而北蒼術9 號峰和10號峰的比值＜1，但從茅蒼術和北蒼術的對照藥材來看并無這一特點，這可能還與樣品的產地有關。

圖2 茅蒼術和北蒼術對照藥材特征圖譜比較Fig 2 Characteristic chromatogram of Atractylodes lancea（Thunb.）DC and Atractylodes chinensis（DC.）koicz.

圖3 不同炮制方法下茅蒼術的特征圖譜Fig 3 Characteristic chromatogram of Atractylodes lancea（Thunb.）DC with different processing methods

圖4 不同炮制方法下北蒼術的特征圖譜Fig 4 Characteristic chromatogram of Atractylodes chinensis（DC.）koicz.with different processing methods

3 討論

3.1 提取條件的優化

考察了超聲提取、回流提取（1 h）和索氏提取（4 h）3 種方法，結果超聲提取效率較高，操作方便快捷。考察了不同超聲時間（30、40、50、60 min）（功率250 W，頻率40 kHz）提取的效果，以蒼術素的含量為依據，《中國藥典》2020年版一部標準規定為超聲1 h，本文對比不同超聲時間的蒼術素色譜峰面積，結果40、50、60 min 蒼術素的峰面積之間不存在顯著性差異，所以最終確定超聲提取40 min。考察了不同濃度的甲醇作為提取液，以蒼術素為參照物，最終確定無水甲醇提取率高。

3.2 色譜條件的確定

考察了甲醇-0.5%磷酸水、乙腈-0.5%磷酸水作為流動相，使用乙腈-0.5%磷酸水作為流動相時，各峰分離度較好，基線較平穩，色譜峰信息較豐富；對比了波長220、245、254、270、340 nm 條件下色譜峰的出峰情況，在波長220 nm 下，色譜峰信息豐富，基線較平穩[6]。

3.3 測定結果分析

不同的炮制方法對蒼術中的蒼術素的含量具有顯著影響，且含量高低呈現曬干法＞烘干法＞麩炒法＞炒焦法，但蒼術中的成分復雜，已知成分達100 多種，其質量控制需結合臨床藥效綜合評價[7]。

傳統炮制理論認為蒼術炮制后可去油以減緩燥性，減少不良作用，并增強健脾止瀉作用。現代研究也認為蒼術中過量的揮發油對人體有較強的中樞抑制作用，且能致瀉。因此適當降低蒼術炮制品中揮發油的含量是避免其臨床毒副作用的主要方法[8]。不同炮制方法下的茅蒼術和北蒼術，各峰含量不同，有學者指出炒制品尤其是麩炒品揮發油蒼術酮、蒼術素相對百分含量比生品低，而茅蒼術醇和β-桉葉醇相對百分含量高，本研究炮制品蒼術素的含量低于生品，從特征圖譜上也可以看出5 號峰β-桉葉醇在茅蒼術和北蒼術的炮制品中含量高于生品，目前因10 ～40 min 各峰的具體化學成分不能完全確認，有待進一步研究。

中藥炮制是指以中醫藥理論為指導，根據辨證施治用藥的需求和調劑、制劑、貯藏的不同要求，對中藥材加工處理的技術和工藝的總稱[9]，其主要目的是增效減毒，更加適合臨床應用[10]。蒼術的炮制方法沿用至今，對其炮制目的《中藥炮制經驗集成》有“泔制、土制、麩制，去油、減緩其燥性；炒焦、能溫脾祛濕，止瀉”[11]之論述。蒼術歷代流傳下來的炮制方法多達數十種，而目前《中國藥典》2020年版僅收載生品和麩炒品，有學者認為米泔水浸炒使蒼術揮發油含量減少較多，且其炮制方法條件較難掌握，需時也較長[12]，在滿足現代臨床需求的前提下，目前蒼術飲片實際上多使用生片、清炒（炒焦）和麩炒三種炮制品。炮制之后的蒼術各成分含量有新的變化，從中藥檢驗的角度出發，利用質譜探明蒼術各成分及其炮制前后的變化情況，是后續研究的內容，也有利于臨床更好地使用蒼術。