2020年廣東省動物飼料中4種主要霉菌毒素污染調查

李孟聰，丁燕玲，譚磊，鐘名琴，陳彤，宋素泉，羅燕*

(1. 南京農業大學動物醫學院，江蘇 南京 210095；2. 深圳市農產品質量安全檢驗檢測中心，廣東 深圳 518000；3. 廣東省市場監督管理局食用農產品監管重點實驗室，廣東 深圳 518000)

霉菌毒素是由絲狀真菌產生的小分子代謝產物，污染廣、毒性大，嚴重危害人類和動物健康[1]。氣候、干燥程度、處理、包裝和運輸條件不當都會導致谷物飼料易生霉菌并產生霉菌毒素污染[2]。研究表明，飼料霉菌毒素的污染非常普遍，而且廣泛存在著多種霉菌毒素混合污染的現象[3-4]。不同的霉菌毒素會攻擊不同的靶器官，從而表現出復雜的、全身性嚴重中毒[5]。

歐盟是目前對全球食品、飼料安全要求最高的組織，其發布的相關規定中嚴格明確了主要霉菌毒素的限量，如：黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1，AFB1)限制范圍為2～12 ng/g，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)為200～750 ng/g[6]。我國也制定了嚴格的法律法規，尤其是對于飼料中普遍污染且毒性危害嚴重的AFB1、伏馬毒素B1(fumonisin B1，FB1)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)及DON[7]，均從豬、反芻動物、禽、水產等不同動物種類以及仔畜期、泌乳期等不同時期的適用飼料進行了詳細的限量規定。然而由于部分小型企業認知水平和技術的局限，霉菌毒素污染飼料的現象仍是層出不窮。王金勇等[8]在2016年采集的豬飼料樣品中發現DON存在100%的陽性率，最高濃度可達4 878 μg/t。同時王金勇的調查報告還表示家禽飼料中的ZEN、FB1的檢出情況也值得關注(最高檢出值分別達1 588、6 587 μg/t)。朱風華等[9]2019年研究表明，山東省禽飼料中AFB1污染嚴重，豬飼料中ZEN的陽性樣本超過20.83%。但是值得注意的是，即使飼料中的霉菌毒素沒有超過最大允許水平，污染的飼料仍可導致動物慢性中毒[10]，對動物生產性能產生不利影響，對畜牧養殖造成嚴重的經濟損失。

因此，使用可行的技術方法定期監測飼料中霉菌毒素污染水平對于我國畜禽養殖業的發展是極其重要的。目前較為成熟的檢測方法包括：固液萃取(SLE)、液液萃取(LLE)、超臨界流體萃取(SFE)、免疫親和柱(IAC)等制備飼料樣品和色譜分離分析[11]，其中液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)的開發和使用在近些年取得了重大進展，不僅能夠檢測出極低霉菌毒素的含量，而且還具有更好的重復性和準確性，是目前我國霉菌毒素檢測的最常用技術[12]。為了解2020年廣東省動物飼料中AFB1、FB1、ZEN和DON 4種主要霉菌毒素的污染情況，本調查采用LC-MS/MS方法、檢測了共196份來自豬、雞、水產動物和寵物的飼料樣品，并對不同動物飼料霉菌毒素污染情況進行分析。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

樣品收集按照文獻[13]的要求執行，分別于深圳市多家飼料生產企業收集動物飼料及原材料樣品至少500 g，其中豬飼料88份，雞飼料30份、水產動物飼料24份、寵物用飼料54份。將飼料及原料樣品盡量粉碎并充分混勻，制備成能通過 0.45 mm實驗篩的待測樣。分裝部分樣品直接用于檢測，其余樣品密封后置于-20～-16 ℃長期保存。

1.2 霉菌毒素檢測

1 g飼料(精確至0.05 g)和10 mL提取液于多管渦旋混合器上2 000 r/min，15 min，超聲后以9 000 r/min離心，得到待檢測的上清液。取上清液2.5 mL保持1滴/s的速度通過微孔濾膜，收集全部濾液。取2.5 mL濾液用氮吹儀干燥后，蒸餾水定容至1.0 mL，直接用于Waters液相色譜串聯質譜聯用儀測定分析。色譜柱為ACQUITYUPLC BEH C18(規格：3.0 mm×100 mm×1.7 μm)，恒溫40 ℃，速度0.35 mL/min，進樣量5.0 μL。A流動相為乙腈，B流動相為0.1%甲酸。 洗脫：0～1.50 min，5%A；1.50～4.00 min，30%A；4.00～8.00 min，50%A；10.00～10.01 min，95%A；10.01～12.00 min，重新改回5%A。質譜選擇ESI，采用正離子掃描AFB1、FB1、ZEN、DON 4種霉菌毒素；毛細管電壓為0.5 kV；離子源溫度定為600 ℃；脫溶劑氣溫度500 ℃和氣流速900 L/h；錐孔氣流速：50 L/h。

2 結果與分析

2.1 動物飼料及原料樣品中霉菌毒素污染總體情況

對隨機抽取到的196份樣品中AFB1、FB1、ZEN和DON的污染情況逐一進行檢測。在196份樣品檢測中，僅有25%(49份)不存在4種霉菌毒素的污染；存在1種霉菌毒素的樣品有24份，占12.24%；受到2種霉菌毒素污染的樣品共有14份，占7.14%；而存在3種及以上霉菌毒素的樣品有110份，占56.12%。說明飼料中多種霉菌毒素的混合污染現象較為普遍。

2.2 豬飼料中霉菌毒素污染情況

表1總結了抽檢到的豬飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。抽檢的88份豬飼料樣本中AFB1、FB1、ZEN、DON限量標準參照最新版飼料衛生標準(GB 13078—2017)[14]。豬飼料中檢出率最高的為DON、FB1，其陽性檢出率分別達85.23%、82.95%，而且DON還保持了較高的超標率，在4種霉菌毒素中超標率排第2。ZEN的陽性檢出率和超標率也可高達76.14%、14.93%。抽檢發現，雖然AFB1的陽性檢出率不高(38.67%)，但是其陽性最高檢出值是限量標準4倍，超標率在4種霉菌毒素中最高，達20.59%。檢測結果說明，目前廣東省豬飼料中霉菌毒素污染仍較嚴重，對DON、AFB1的污染需要重點關注。

表1 豬飼料樣品霉菌毒素檢測結果

2.3 雞飼料中霉菌毒素污染情況

表2總結了生產企業中抽檢到的雞飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。抽檢的30份雞飼料樣本中檢出率最高的為DON(83.33%)，其次為FB1和ZEN，二者陽性檢出率均為66.67%。同時雞飼料中的ZEN還存在極高的超標率。雞飼料中AFB1的污染情況類似于豬飼料，陽性檢出率不高(46.67%)，但是超標率較高，達14.29%。因此飼料生產企業對于雞飼料中ZEN和AFB1污染還需要進行更嚴格細致的管控。

表2 雞飼料霉菌毒素檢測結果

2.4 水產飼料中霉菌毒素污染情況

有研究指出，廣東省每年生產水產飼料約531萬t，是我國最主要的水產飼料生產大省[15]。表3總結了抽檢到的水產飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。研究發現24份水產飼料的檢測結果要明顯優于動物用飼料。24份飼料中，有6份未檢測到AFB1、FB1、ZEN、DON。其余18份飼料中FB1和DON檢出率均較低(<30%)，ZEN的陽性檢出率為50%，且3種霉菌毒素超標樣本數均為0。樣本中檢出率最高的為AFB1(62.50%)，其超標率為12.5%。以上結果提示廣東省對水產飼料質量管控工作較到位，水產飼料的霉菌毒素污染整體水平較低。

表3 水產動物飼料樣品霉菌毒素檢測結果

2.5 寵物飼料中霉菌毒素污染情況

表4總結了抽檢到的寵物用飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。54份寵物用飼料樣本中犬糧有32份。寵物飼料中4種霉菌毒素檢出水平較相似，基本都在50%左右。ZEN、DON的污染含量均未超標。但AFB1的污染超標現象極為嚴重，陽性樣品中僅有4份未超標、陽性樣品最高值甚至是國家允許限量的12倍。此外，值得注意的是，新版GB 13078—2017沒有明確界定FB1在寵物飼料中的限量標準。總之對于寵物飼料中霉菌毒素污染的管控工作，還需要采取更嚴格的管理措施、減輕霉菌毒素污染。

表4 寵物飼料樣品霉菌毒素檢測結果

3 討論

出于經濟成本的考慮，為保證養殖效率的最大化，越來越多的養殖企業傾向于使用商品化飼料[16]。但是作為飼料原料的谷物很容易受到霉菌毒素污染，當污染谷物用于動物飼料生產后，會導致飼料中霉菌毒素的污染。據2015—2019年統計數據顯示，我國飼料中廣泛存在著霉菌毒素的混合污染，其中以AFB1、FB1、ZEN、DON 4種霉菌毒素污染最為嚴重，檢出率可達90%以上[17-19]。因此，本研究在抽檢的廣東省飼料樣品中重點檢測了這4種霉菌毒素的污染情況。結果與近些年其他的調查報告一致，飼料中霉菌毒素共污染現象極為普遍，抽檢的196份飼料中，高達63%樣品存在2種及以上霉菌毒素的污染。

雖然AFB1在豬飼料、雞飼料陽性檢出率不高，但存在極高的超標率。水產飼料、寵物飼料也存在著較高程度AFB1的污染。這種情況可能是因為廣州地理位置的原因。我國北方的谷物以鐮孢菌污染為主, 西北地區谷物飼料一般不存在發霉變質，而長江沿岸及以南地區則主要存在AFB1污染[20]。因此，廣東省及其他長江以南地區應更加關注飼料中AFB1的污染現象，加快技術改革，對飼料中AFB1的污染施行更嚴格的管控。另外，抽檢結果與2017年、2018年飼料霉菌毒素調查報告一致，DON在豬飼料、雞飼料、寵物飼料等都存在較高的陽性檢出率，尤其是在豬飼料中還存在較高的超標率[21-22]。因此對于DON在不同動物飼料中的嚴重污染，飼料生產企業也應該重點關注。本次調查發現ZEN和FB1在飼料中的污染水平(陽性檢出率和超標率)整體要低于AFB1和DON，但在不同動物飼料中均可檢出。所以飼料生產企業也不能放松對其污染的管控。雞飼料中ZEN的污染仍需引起重視，其超標率高達20%。寵物飼料中FB1的污染和造成的毒害作用大也需進一步詳細研究，以保證能夠更科學地規范寵物飼料中FB1的限量。

與農藥、防腐劑和其他飼料添加劑等人為毒素相比，大多數霉菌毒素在化學上非常穩定，作為一種天然毒素，對飼料的污染難以控制[23]。從檢測結果可以看出，75%的飼料中都可以檢測到霉菌毒素的存在，并且大多數飼料均表現為霉菌毒素共污染。雖然相比較2019年間高達100%的檢出率，飼料中霉菌毒素的污染情況已有明顯好轉[24]。但是對于畜牧養殖仍存在較大風險，這提醒我們仍要重點關注霉菌毒素污染造成的不良后果，加快技術改革，加強法規監管，精準預防并控制谷物原材料及飼料生產鏈中霉菌毒素的污染，保障動物養殖和食品安全。

4 結論

抽檢廣東省飼料生產企業的196份飼料，結果表明豬飼料和雞飼料中AFB1和 DON污染較為嚴重，ZEN、FB1的陽性檢出率也處于較高水平；寵物飼料中廣泛存在霉菌毒素混合污染；水產飼料的霉菌毒素污染管控工作最到位，平均霉菌毒素污染水平較低。飼料生產及養殖業在未來工作中應繼續加強對各類霉菌毒素的控制、更有力地保障畜禽健康養殖和人類的食品安全。