1株H9N2亞型禽流感變異株HA基因遺傳演化分析及反向遺傳操作系統的建立

范夢璐，田苗，趙永振，平繼輝

(南京農業大學動物醫學院，江蘇 南京 210095)

H9N2亞型禽流感病毒(H9N2 subtype AIV)自1966年從北美的火雞體內首次被分離以來，已在全世界范圍內廣泛傳播。1994年，在我國廣東省分離到第1株H9N2亞型AIV[1-2]。隨著該亞型病毒的不斷傳播和進化，H9N2 AIV已在我國家禽中成為流行最為廣泛的流感病毒亞型。雖然H9N2亞型AIV感染家禽后僅表現出較低的致病性，但與其他病原體混合感染時會導致嚴重發病，給家禽業造成重大的經濟損失[3]。疫苗接種是我國防控H9N2 AIV采取的最普遍的手段，研究表明，AIV在疫苗選擇壓力下正在不斷發生重組和變異[4-5]。HA和NA是流感病毒表面的2種糖蛋白，是決定病毒抗原性的重要基因，HA基因上某些氨基酸位點的改變與流感病毒變異和致病性密切相關[6-7]。

病毒的反向遺傳技術，又被稱為病毒拯救，是通過構建RNA病毒的感染性分子克隆，在DNA分子水平上對其進行體外操作并拯救出具有活性的病毒粒子，從而研究病毒基因結構與功能的方法[8]。Neumann等[9]在1999年建立了流感病毒的12質粒反向遺傳系統，將病毒8種vRNA片段的cDNA克隆到人RNA聚合酶Ⅰ啟動子和鼠RNA聚合酶終止子之間，在轉染8個vRNA片段的質粒DNA同時，共轉染聚合酶(PB2，PB1和PA)以及核蛋白NP的蛋白表達質粒，在4個蛋白表達質粒所形成的聚合酶驅動下，轉錄出8個病毒RNA片段，進而形成病毒的最小復制單位核糖核蛋白復合體(vRNPs)，隨后包裝出病毒粒子，因此流感病毒的“12質粒系統”具有很高的病毒拯救效率。

本研究從江蘇省某養雞場發……