檢測豬瘟病毒E0抗體ELISA方法的建立與應(yīng)用

吳許丹，吳月，陳艷，張錦，陳婧，胡家歡，龍云鳳，姜焱*，周斌*

(1. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095;2. 南京海關(guān)動植物與食品檢測中心，江蘇 南京 210019)

豬瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)是黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)的一種正鏈RNA病毒[1]。豬瘟一旦暴發(fā)，疫源地的養(yǎng)殖業(yè)及政府都苦不堪言，全球每年因豬瘟遭受的經(jīng)濟損失數(shù)以億計[2]。CSFV基因組是由兩端的非編碼區(qū)和位于中央的開放式閱讀框(open reading frame，ORF)組成[3]。該閱讀框編碼的多聚蛋白在蛋白酶的作用下被分解成4個結(jié)構(gòu)蛋白(C、E0、E1和E2)和8個非結(jié)構(gòu)蛋白(Npro、P7、NS2、NS3、NS4B、NS4A、NS5A和NS5B)[4]。E0蛋白又稱為Erns蛋白，是CSFV的一種囊膜糖蛋白，由多聚蛋白上268位的Glu至494位的Ala之間的227個氨基酸構(gòu)成，分子量大小為44～48 kDa[5-6]。E0蛋白存在大量的抗原表位，能在病毒感染機體后誘導(dǎo)產(chǎn)生特異的免疫應(yīng)答反應(yīng)。可利用E0蛋白的初級抗原表位進行鑒別診斷，特異性區(qū)分CSFV、牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)和邊界病病毒(border disease virus，BDV)感染[7]。我國《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃(2012—2020)》中已經(jīng)明確將豬瘟的凈化列為重點任務(wù)。鑒于目前的豬瘟病毒兔化弱毒疫苗免疫豬群后不能開展血清學(xué)鑒別診斷，不少豬場已經(jīng)開始采用新疆天康生物股份有限公司[8]或者武漢科前生物股份有限公司[9]生產(chǎn)的豬瘟病毒E2亞單位疫苗，免疫后可以引導(dǎo)豬群產(chǎn)生針對E2蛋白的抗體。但應(yīng)用檢測E2抗體的試劑盒無法區(qū)分豬群中是否存在野毒感染，因此可通過檢測E0蛋白的抗體確定豬群中是否存在野毒感染。本研究根據(jù)石門株E0基因序列，設(shè)計1對特異性引物，通過RT-PCR擴增目的基因，插入原核表達載體pET-28a中，構(gòu)建了pET-28a-E0原核表達質(zhì)粒。……