犬子宮內膜基質細胞的分離培養與鑒定

倪珺，雷詩敏，羅麗平，謝國玉，劉序，芮榮

(南京農業大學動物醫學院，江蘇 南京 210095)

子宮疾病是危害犬類健康與繁殖性能的臨床常見疾病，嚴重者甚至威脅生命。近年來，我國寵物行業發展迅速，寵物犬飼養數量不斷增加，犬的健康日益受到寵物主人的重視。眾所周知，大多數子宮病變均與激素失調和細菌感染有關，而母犬生殖生理特點使其更易受微生物感染，引發生殖系統疾病[1]，其中子宮蓄膿發病率較高、危害較大，不及時治療可能引發母犬死亡，研究犬子宮內膜細胞的變化對闡明子宮疾病的發病機制具有重要意義。培養犬子宮內膜基質細胞，可為了解犬子宮內膜病變過程中基質細胞的生長代謝、相互作用和內分泌調控等提供有益的體外模型，國內有關犬子宮內膜細胞的分離培養鮮有報道。本試驗旨在通過優化基質細胞的分離培養程序，以期提高犬子宮內膜基質細胞體外培養的純度和成功率，為進一步探討犬子宮內膜相關疾病的發病機制提供有價值的體外細胞模型。

1 材料與方法

1.1 子宮組織樣本的來源

2018年9月至2019年12月從南京數家寵物醫院采集2～8歲進行子宮卵巢摘除術的健康犬子宮，摘取的子宮樣本立即放入4 ℃含雙抗(100 IU/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素)生理鹽水中，2 h內送達實驗室進行分離培養操作。

1.2 主要試劑

DMEM/F12培養基、胎牛血清購自Gibco公司；Ⅰ型膠原酶、胰蛋白酶、臺盼藍均購自美國Sigma公司；100×青霉素-鏈霉素溶液購自Biosharp公司。鼠抗人波形蛋白(vimentin)抗體、鼠抗人細胞角蛋白(cytokeratin-18，CK-18)抗體購自北京Bioss公司?！?br>