長(zhǎng)鏈非編碼RNA 作為胃癌診斷標(biāo)記物的系統(tǒng)評(píng)價(jià)

吳華振，吳茂鋒，劉秋蘭，賈晶晶，黃丹麗

（廣州醫(yī)科大學(xué) 附屬第六醫(yī)院/清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院 ，廣東 清遠(yuǎn) 511518）

0 引言

胃癌（gastric cancer，GC）是癌癥導(dǎo)致死亡的第三大原因，也是全球第五大常見(jiàn)腫瘤，已構(gòu)成嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。胃癌的無(wú)進(jìn)展生存率和預(yù)后高度依賴于診斷時(shí)的疾病分期，其高死亡率與缺乏標(biāo)準(zhǔn)的篩查程序和早期缺乏明確的癥狀有關(guān)，因此胃癌患者的早期篩查發(fā)現(xiàn)至關(guān)重要，研究表明，外周血中長(zhǎng)鏈非編碼RNA 可作為胃癌診斷的生物標(biāo)記物[1-2]，并且與傳統(tǒng)檢驗(yàn)檢查指標(biāo)（CEA、CA724、CA-199）相比具有一定的優(yōu)越性[3]。本研究對(duì)近幾年發(fā)表的關(guān)于長(zhǎng)鏈非編碼RNA 對(duì)胃癌的診斷價(jià)值的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)文獻(xiàn)進(jìn)行meta 分析，旨在為lncRNA 用于胃癌的診斷提供循證依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

網(wǎng)絡(luò)檢索數(shù)據(jù)庫(kù)PubMed、Embase、Cochrane Library、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)等，獲得相關(guān)的文獻(xiàn)，截止時(shí)間為2019年12 月。檢索詞包括：“胃癌”、“胃腫瘤”、“診斷”、“敏感性”、“特異度”、“曲線下面積”、“stomach neoplasm”“stomach cancer”、“gastric cancer”、“l(fā)ong non-coding RNA”、“l(fā)ncRNA”“sensitivity”、“specificity”、“diagnosis”等。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①檢測(cè)對(duì)象為血清或血漿長(zhǎng)鏈非編碼RNA。②研究組中患者為經(jīng)病理學(xué)確診的胃癌患者，對(duì)照組為健康人。③文獻(xiàn)中有l(wèi)ncRNA 用于胃癌診斷，可提取到樣本例數(shù)、特異度、靈敏度、真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性、假陰性等數(shù)據(jù)。④能獲取全文語(yǔ)言為中文或英文。排除標(biāo)準(zhǔn)：①綜述、會(huì)議、系統(tǒng)評(píng)價(jià)、個(gè)案報(bào)道、社論等文獻(xiàn)。②研究對(duì)象為動(dòng)物、細(xì)胞等文獻(xiàn)。③重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)。④檢測(cè)對(duì)象為組織或其他體液的lncRNA。⑤低質(zhì)量的文獻(xiàn)。⑥數(shù)據(jù)不全的文獻(xiàn)。

1.3 資料提取與質(zhì)量評(píng)價(jià)

由2 名研究者分別獨(dú)立的進(jìn)行文獻(xiàn)納入，入排意見(jiàn)不一的文章討論后決定。所納入文獻(xiàn)中提取的相應(yīng)資料包括作者、發(fā)表時(shí)間、國(guó)家、對(duì)照來(lái)源、樣本量、樣本類型、lncRNA 類型、檢測(cè)方法、內(nèi)參。

采用QUADAS-2 軟件，根據(jù)診斷性實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性質(zhì)量評(píng)價(jià)工具，獨(dú)立評(píng)價(jià)每個(gè)研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)每部分納入的相關(guān)標(biāo)志性問(wèn)題的回答“是”、“否”或“不確定”，可對(duì)應(yīng)將偏倚風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)判斷為“低”、“高”或“不確定”，“是”記1 分，“否”或“不確定”記0 分，打出相應(yīng)分?jǐn)?shù)，滿分14 分。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用Meta-Disc1.4、STATA12.0 軟件對(duì)所提取的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Q 統(tǒng)計(jì)量和I2檢驗(yàn)評(píng)估異質(zhì)性，I2統(tǒng)計(jì)量低于25% 判為異質(zhì)性較小，25%-50% 判為中度異質(zhì)性，大于50% 判為高度異質(zhì)性。如果Q 統(tǒng)計(jì)量估計(jì)的P＜0.05 或I2＞50%，則采用隨機(jī)效應(yīng)模型，否則采用固定效應(yīng)模型。納入研究的發(fā)表偏倚采用Deeks 檢驗(yàn)來(lái)評(píng)估，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢索結(jié)果

文獻(xiàn)初步檢索出651 篇文章，查重后剩余418 篇，對(duì)文章標(biāo)題和摘要篩選，排除綜述、會(huì)議、系統(tǒng)評(píng)價(jià)、個(gè)案報(bào)道、機(jī)制研究等392 篇，全文閱讀剩下的26 篇文章，14 篇由于數(shù)據(jù)缺失、注重胃癌預(yù)后、無(wú)法獲得原文被排除，最后納入12 篇[4-15]。病理檢查視為胃癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。研究組和對(duì)照組共2148例，其中病例組1185 例，對(duì)照組963 例。文獻(xiàn)篩選流程，見(jiàn)圖1。

2.2 納入文獻(xiàn)特征

共納入12 項(xiàng)研究，納入研究的基本特征包括：第一作者、出版時(shí)間、國(guó)家、病例組和對(duì)照組的數(shù)量、樣本類型、lncRNA名稱、內(nèi)參基因、檢測(cè)方法、真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、假陰性、真陰性。納入研究的基本特征見(jiàn)表1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程

表1 納入的12 項(xiàng)研究基本特征列表

2.3 閾值效應(yīng)和異質(zhì)性分析

診斷閾值檢測(cè)結(jié)果為Spearman 相關(guān)系數(shù)為0.203（P=0.527），表明各研究結(jié)果間不存在閾值效應(yīng)。診斷比值比的Cochran-Q 值為34.83，I2值為68.4%，P＜0.05，Q 檢驗(yàn)提示入選研究間存在除閾值效應(yīng)的其他異質(zhì)性來(lái)源，可能與樣本類型、選擇的內(nèi)參、lncRNA 個(gè)數(shù)有關(guān)，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta 分析。

2.4 診斷價(jià)值評(píng)估

隨機(jī)效應(yīng)模型用于評(píng)估lncRNA 在診斷胃癌的整體效果，合并后lncRNA 診斷靈敏度為74%（95%CI:0.72～0.77）,見(jiàn)圖2；特異度79%（95%CI:0.76～0.82）, 見(jiàn)圖3；陽(yáng)性似然比3.91（95%CI:2.81～5.43）, 見(jiàn)圖4；陰性似然比0.30（95%CI:0.23～0.39）, 見(jiàn)圖5；診斷比值比13.71（95%CI:9.02～20.84）, 見(jiàn) 圖6；SROC 曲 線AUC 為0.8521, 見(jiàn)圖7。上述結(jié)果表明，循環(huán)lncRNA 對(duì)于胃癌具有一定的診斷價(jià)值。由于非閾值引起的異質(zhì)性能夠通過(guò)診斷指標(biāo)的森林圖觀察到，因此對(duì)樣本類型、內(nèi)參基因、lncRNA個(gè)數(shù)進(jìn)行meta 回歸分析，結(jié)果P＞0.05, 表明未找到異質(zhì)性的來(lái)源（表2）。Fagan 列線圖呈現(xiàn)了lncRNA 檢測(cè)確定或排除胃癌的可能性，總體分布總結(jié)，見(jiàn)圖8。對(duì)于檢測(cè)前有20%患胃癌可能性的人來(lái)說(shuō)，如果在檢測(cè)中l(wèi)ncRNA 是陽(yáng)性，則患胃癌檢測(cè)后概率將達(dá)到51%；檢測(cè)值陰性則意味著檢測(cè)后概率將降低至7%。因此lncRNA 檢測(cè)在胃癌輔助診斷中發(fā)揮著較好作用。

表2 Meta 回歸檢測(cè)異質(zhì)性的來(lái)源

圖2 lncRNA 診斷胃癌的靈敏度森林圖

圖3 lncRNA 診斷胃癌的特異度森林圖

圖4 lncRNA 診斷胃癌的PLR 森林圖

圖5 lncRNA 診斷胃癌的NLR 森林圖

圖6 lncRNA 診斷胃癌的診斷比值比

圖7 lncRNA 診斷胃癌的SROC 曲線

圖8 lncRNA 診斷胃癌的Fagan 列線圖

2.5 發(fā)表偏倚

Deeks 檢驗(yàn)來(lái)評(píng)估納入的研究是否存在發(fā)表偏倚，Deeks檢驗(yàn)的P值為0.08，表明lncRNA 在研究中沒(méi)有發(fā)表偏倚（圖9）。

圖9 lncRNA 診斷胃癌的發(fā)表偏倚

3 討論

胃癌（GC）是全世界癌癥相關(guān)死亡的主要原因，盡管近年來(lái)在診斷和治療方面取得很大進(jìn)展，但許多病人在確診時(shí)已中晚期，無(wú)法手術(shù)治療，預(yù)后仍然較差，或根治性胃切除術(shù)后復(fù)發(fā)快，當(dāng)前仍缺乏可用來(lái)早期預(yù)測(cè)胃癌及能用于胃癌術(shù)后治療復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)的靈敏度特異度高的生物標(biāo)記物；傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物，如血清癌胚抗原（CEA）和糖類抗原199(CA-199)，缺乏足夠的敏感性和特異性；因此，尋找有效的生物標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)早期胃癌，預(yù)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)和化療敏感性尤為重要[16]。血清及血漿lncRNA 作為生物標(biāo)志物用于胃癌診斷是近年來(lái)研究熱點(diǎn)，已有相關(guān)系統(tǒng)評(píng)價(jià)[17]證實(shí)lncRNA 可作為生物標(biāo)志物用于胃癌診斷進(jìn)行評(píng)估，顯示出較好的特異性，靈敏度一般，是胃癌診斷的潛在生物標(biāo)記。

本次研究中，Spearman 模型的相關(guān)系數(shù)顯示不存在閾值效應(yīng)，閾值效應(yīng)是診斷性meta 分析異質(zhì)性中最重要的因素，森林圖和I2顯示存在異質(zhì)性，對(duì)指定協(xié)變量進(jìn)行meta 回歸分析顯示，P＞0.05，未找到異質(zhì)性來(lái)源，因此采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并分析其診斷價(jià)值。

本次納入的12 項(xiàng)研究中，血清及血漿lncRNA 作為生物標(biāo)記物用于胃癌診斷呈現(xiàn)出較高的敏感度（0.74）和特異度（0.79），DOR 取值范圍為0 至無(wú)窮大，DOR 取值為1.0 時(shí)，提示診斷試驗(yàn)無(wú)法區(qū)分疾病與健康狀態(tài)，診斷比值比（DOR）為13.71，表明血漿或血清lncRNA 對(duì)胃癌診斷具有一定診斷價(jià)值；曲線下面積（AUC）是評(píng)估診斷性試驗(yàn)總體精確性指標(biāo)之一，取值范圍為0～1，曲線下面積（AUC）為0.5 時(shí)，提示診斷性試驗(yàn)無(wú)意義，AUC＞0.5 時(shí)，越接近1，診斷效果越好，本次研究中，SROC 曲線AUC 為0.8521，表明血清或血漿lncRNA用于胃癌診斷有一定的診斷價(jià)值；本研究中陽(yáng)性似然比PLR為3.91，提示胃癌患者lncRNA 陽(yáng)性率為未患胃癌人群的約4倍；NLR 為0.30，提示可能30%的未患胃癌人群lncRNA 檢測(cè)可顯現(xiàn)為陽(yáng)性。

本系統(tǒng)評(píng)價(jià)的一些局限性，文獻(xiàn)語(yǔ)言限定為中英文、網(wǎng)絡(luò)檢索數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)量的限制可能導(dǎo)致部分文獻(xiàn)缺失，納入的文獻(xiàn)數(shù)量較少。對(duì)于血清或血漿lncRNA 用于胃癌早期診斷的文獻(xiàn)較少。

綜上所述，血清或血漿lncRNA 是潛在的胃癌生物標(biāo)志物，結(jié)合其他生物標(biāo)志物用于胃癌的診斷，或許具有更高靈敏度及特異度，作為無(wú)創(chuàng)檢查，推廣應(yīng)用的價(jià)值大，但是現(xiàn)階段循環(huán)lncRNA 的檢測(cè)試劑盒、檢測(cè)方法較多，不同的研究中l(wèi)ncRNA 檢測(cè)內(nèi)參的選擇不同，缺乏質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，lncRNAs要進(jìn)入臨床應(yīng)用仍面臨許多挑戰(zhàn)[18]，仍需進(jìn)一步的多中心研究及大數(shù)據(jù)的驗(yàn)證。