一例赤猴魏氏梭菌感染的診斷

楊志剛 張 森 湯德元 郭倩妤 廖少山 韓超逸 晏仁潭

(貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴陽，550025)

赤猴(Erythrocebuspatas)是分布在西非的一種猴，為赤猴屬的唯一物種。貴州省某野生動物園的2只赤猴相繼突然死亡，2019年11月9日送檢其中死亡赤猴1 只(8月齡)到貴州大學(xué)動物醫(yī)院進行診斷。通過詢問其發(fā)病時的臨床癥狀、病理剖檢、細菌分離培養(yǎng)、生化鑒定及動物試驗，確診該赤猴為魏氏梭菌(Clostridiumwelchii)感染，且根據(jù)細菌藥敏試驗結(jié)果，制定出相應(yīng)的防治措施，現(xiàn)將診治結(jié)果報道如下。

1 臨床癥狀

該野生動物園共飼養(yǎng)有9只赤猴(1公、1母和7只后代)，其中2019年11月8日早晨發(fā)現(xiàn)1只赤猴(身體狀況良好)突然發(fā)病死亡，尸體腹脹，肛門周圍污穢，糞便呈黑褐色，對其他赤猴進行觀測，發(fā)現(xiàn)其中1只(身體狀況良好)表現(xiàn)離群、獨處、厭食、精神沉郁，11月9日突然發(fā)病死亡，死亡十分迅速。

2 剖檢變化

剖檢發(fā)現(xiàn)病死赤猴(8月齡)，肝臟出現(xiàn)腫大、淤血，邊緣鈍厚(圖1)；肺部有明顯的萎縮(圖2)；心臟變軟，心肌較薄、色淡(圖3)，心臟內(nèi)血液凝固不良，心內(nèi)膜出血；腸壁有出血(圖4)，腸系膜充血，剖開發(fā)現(xiàn)有大量白色結(jié)節(jié)及血液(圖5)，其中有暗紅色血便。

3 實驗室檢測

3.1 病料染色鏡檢

無菌操作取出死亡赤猴的心臟、肝臟、脾臟、腸容物，分別觸片，革蘭氏染色，經(jīng)100倍油鏡鏡檢，可觀察到一定量的革蘭氏陽性桿菌，多單個存在，少數(shù)有相連情況(圖6，圖7)。

3.2 細菌的分離培養(yǎng)與形態(tài)觀察

將死亡赤猴的心臟、肝臟、脾臟、腸容物進行細菌分離培養(yǎng)，劃線接種于血瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃條件下厭氧培養(yǎng)24—48 h。觀察細菌的生長狀態(tài)和菌落特征，然后挑取單個菌落進行純培養(yǎng)。結(jié)果厭氧培養(yǎng)的血瓊脂培養(yǎng)基生長出表面光滑、半透明、呈圓屋頂狀的菌落，具有溶血環(huán)。經(jīng)過純化培養(yǎng)后鏡檢，厭氧培養(yǎng)的血瓊脂培養(yǎng)基上的菌落兩端鈍圓著色，有莢膜，革蘭氏陽性桿菌(圖8，圖9)。

3.3 細菌的生化特性鑒定

將分離純化的細菌在無菌的條件下分別進行葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖等發(fā)酵試驗，靛基質(zhì)試驗，明膠液化試驗，硫化氫試驗，V-P試驗和含鐵牛乳試驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌可發(fā)酵麥芽糖、乳糖、蔗糖、葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；明膠液化試驗和硫化氫試驗呈陽性；靛基質(zhì)試驗和V-P試驗呈陰性，但不發(fā)酵木糖、甘露醇、山梨醇，在含鐵牛乳試驗中，分解乳糖產(chǎn)酸，出現(xiàn)“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象。

表1 生化試驗結(jié)果

3.4 藥敏試驗

無菌操作從厭氧血瓊脂培養(yǎng)基用接種環(huán)挑取一個純化培養(yǎng)的菌落，分別接種于培養(yǎng)基中，涂勻，選用8種常用藥敏片貼在培養(yǎng)基中，于37℃下厭氧培養(yǎng)24—48 h后觀察結(jié)果，并測定抑菌圈直徑，判斷其藥敏性。結(jié)果：該菌對氟苯尼考、泰樂菌素、環(huán)丙沙星敏感性較高，對青霉素、慶大霉素、卡那霉素、頭孢曲松、鏈霉素敏感性較差。

3.5 動物試驗

將血液瓊脂平板上培養(yǎng)的菌落制成懸液，取懸液給生長狀況相同小鼠腹腔注射0.2 mL/只，共5只，對照組5只注射等量生理鹽水，結(jié)果試驗組小鼠48 h均死亡，對照組小鼠正常存活。對死亡的小鼠進行剖檢，發(fā)現(xiàn)各臟器內(nèi)含有大量氣泡，肝大、變脆，腸道黏膜出血，取其肝、腸容物做涂片，革蘭氏染色觀察發(fā)現(xiàn)大量兩端鈍圓的藍紫色革蘭陽性桿菌，形態(tài)與注射的菌株相同。

4 診斷結(jié)果

根據(jù)臨床癥狀、結(jié)合流行病學(xué)、病理剖檢和實驗室染色鏡檢、細菌分離培養(yǎng)、生化鑒定及動物回歸試驗，確診本次疾病為魏氏梭菌感染。

5 防治

本病病程短，死亡率極高，一旦發(fā)病，治愈困難，因此本病應(yīng)以預(yù)防為主。該病無明顯季節(jié)性，在人工飼養(yǎng)條件下，由于冬季氣溫變化無常，長時間陰冷潮濕，且動物圈舍內(nèi)無避雨設(shè)施，再加上與人接觸，導(dǎo)致身體抵抗力降低，腸道菌群失調(diào)，從而引發(fā)赤猴患病[1]。因此，應(yīng)加強管理，在圈舍增加避雨設(shè)施，同時，保證食物衛(wèi)生，營養(yǎng)均衡，提高抵抗力。魏氏梭菌在自然界分布極廣，可見于土壤、污水、飼料、食物等，其主要以芽孢形式存在，同時也是患病和未患病動物的胃腸道微生物群落的成員[2]。因此，需定期進行全面消毒，用2%火堿水溶液對污染的圈舍和周邊環(huán)境進行嚴格消毒，用0.2%的過氧乙酸清洗料槽、飲水槽等用具[3-4]；飲水需要勤添勤換[5]；對病死赤猴及其排泄物、分泌物作無公害處理，如深埋、焚燒等。