雞源大腸桿菌M1株的分離鑒定及遺傳進化分析

王育偉，劉亞東，周玉剛，張曉暉，周愛民，李廷見

（綿陽市農業科學研究院畜禽水產研究所，四川 綿陽 621023）

大腸桿菌（E.coli）是養殖環境中存在最為廣泛的病原菌之一［1］，常單獨或混合感染引起家禽細菌性疾病，每年給家禽養殖業造成了巨大的經濟損失。E.coli單純感染可引起禽大腸桿菌病［2］，主要癥狀包括心包炎、失明、腹瀉、滑膜炎、大腸桿菌性肉芽腫和臍炎等。常與沙門氏菌（Salmonella）和雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum，MG）共同感染引起雞白痢、雞毒支原體病等疾病［3］。

細菌鑒定對精準的用藥和疾病防控具有重要意義，除了常規的形態學鑒定方法以外，分子生物學鑒定方法因分型精確等優點而成為重要的鑒定方法。16S rDNA 序列是研究細菌系統發育和分類最常用的管家遺傳標［4］，atpD 基因等功能基因也非常有助于細菌進化分析［5］。本研究對從綿陽一養雞場腹瀉病例中分離到的M1菌進行鑒定，并建立16S rDNA 和atpD 基因遺傳進化分析，為科學防控該類疾病提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 從四川省綿陽市游仙區一養雞場腹瀉病例中分離出1 株細菌，命名為M1 菌。

1.2 主要試劑 糖鐵瓊脂、麥康凱培養基，購自成都康迪生物科技有限公司；伊紅美藍培養基，購自青島日水生物技術有限公司；微量生化反應管，購自杭州天和微生物試劑有限公司；細菌基因組DNA 提取試劑盒（TIAN amp Bacteria DNA Kit），購自天根生化科技（北京）有限公司。

1.3 菌株的分離培養 將采樣拭子置于5 mL LB 培養基中，37 ℃振蕩培養6～8 h，然后于普通固體培養基上劃線，37 ℃培養24 h，革蘭氏染色后鏡檢，觀察細菌形態。……