陰道微生態(tài)環(huán)境在人乳頭瘤病毒感染中介作用的研究

金丹丹，孫藝秀，葛運(yùn)生，謝潔瓊

1.廈門大學(xué)附屬婦女兒童醫(yī)院（廈門市婦幼保健院）中心實(shí)驗(yàn)室,福建廈門 361000；2.中國人民解放軍陸軍第七十三集團(tuán)軍醫(yī)院檢驗(yàn)科,福建廈門 361000

目前,宮頸癌已成為威脅女性生殖健康最常見的惡性腫瘤[1],在中國,每年約14萬女性患有宮頸癌,而高危型人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸病變的危險(xiǎn)因素,據(jù)統(tǒng)計(jì)每年約15.71%的孕齡期女性曾感染過HPV,大部分都可以自行清除,只有少數(shù)人最終發(fā)生了宮頸病變[2]。由于宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)漫長的、多因素導(dǎo)致的,對于危險(xiǎn)因素的預(yù)防及阻斷可以及時(shí)有效的減少宮頸癌變的發(fā)生。目前認(rèn)為HPV的感染與清除不僅與個(gè)體的免疫防御功能有關(guān),還與陰道微生態(tài)環(huán)境平衡相關(guān)[3],重視陰道微環(huán)境,及時(shí)進(jìn)行干預(yù)是防治宮頸癌變的一個(gè)新思路。該研究選取2019年5月—2020年5月該院就診患者4 459例,通過對患者陰道分泌物的微生態(tài)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),探討陰道微生態(tài)平衡的改變在HPV感染中扮演的角色。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取某集團(tuán)軍醫(yī)院就診患者共4 459例,年齡18～60周歲,平均年齡(42.15±9.47)歲,經(jīng)患者同意自愿接受HPV基因型檢測以及陰道病原學(xué)檢查,該研究所選病例經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):①非月經(jīng)期,非妊娠期;②兩周內(nèi)未曾接受抗生素治療的患者;③無宮頸相關(guān)手術(shù)史；④檢查前72 h無性生活史。排除標(biāo)準(zhǔn):妊娠期或哺乳期婦女；患有各種自身免疫性疾病、其他器官惡性腫瘤、使用免疫抑制劑患者或其他疾病導(dǎo)致免疫功能低下的患者。

1.2 方法

1.2.1 陰道分泌物檢測 使用無菌窺陰器充分暴露陰道子宮頸,用2支無菌棉拭子采集陰道壁中上1/3處的分泌物,1支棉拭子加生理鹽水涂片后在顯微鏡下觀察清潔度、滴蟲、菌群、白細(xì)胞等,另外1支棉拭子分泌物檢測pH值、過氧化氫酶（H2O2）、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶、淋球菌、沙眼衣原體等。

1.2.2 陰道微生態(tài)實(shí)驗(yàn)室檢查評(píng)價(jià) 革蘭氏染色后鏡

檢:①菌群密度:在10×100倍的浸油顯微鏡下,觀察菌群密度,按每個(gè)視野細(xì)菌平均數(shù)記錄為I～I(xiàn)V級(jí)(記為+～++++)。②多樣性:根據(jù)細(xì)菌的種類數(shù),結(jié)果被劃分為I～I(xiàn)V級(jí)(表示為+至++++)。

1.2.3 HPV基因型檢測 采用窺陰器暴露子宮頸,用宮頸刷在子宮頸口按照順時(shí)針方向輕輕旋轉(zhuǎn)3～5圈,將宮頸刷存放在細(xì)胞保存液中,采用多重聚合酶鏈?zhǔn)剑╬olymerase chain reaction,PCR）進(jìn)行HPV基因分型檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

主要觀察HPV感染基因分型及陰道微生物功能指標(biāo):陰道菌群密度及多樣性、pH值、乳酸菌、過氧化氫酶、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶,陰道病原微生物:沙眼衣原體、淋球菌、白假絲酵母菌。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

選擇SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)對比分析,其中計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用例數(shù)與百分比（%）表示,比較采用χ2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV基因型檢出情況

HPV基因型檢測結(jié)果如下圖顯示,其中感染最常見的基因型是HPV16,其次是HPV52、HPV18,檢出情況見表1。

表2 HPV感染與陰道微環(huán)境比較[n(%)]

2.2 HPV與陰道微生態(tài)環(huán)境

HPV陽性組中細(xì)菌密度、多樣性、乳酸桿菌異常在HPV陽性組中所占比例較高,分別為24.16%、16.54%、14.42%,在HPV陰性組分別為8.32%、6.02%、8.40%,兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。pH＞4.5、清潔度異常、沙眼衣原體感染、H2O2、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶異常同樣在HPV陽性組感染較高,在HPV陽性組中異常率分別為12.56%、10.64%、8.47%、9.13%、11.3%、14.22%,在HPV陰性組中異常率分別為6.34%、3.96%、4.32%、5.94%、7.63%、4.81%,兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,且相關(guān)系數(shù)r＞0,具有相關(guān)性。在HPV陽性組淋球菌、滴蟲、白假絲酵母菌感染率分別為7.92%、5.50%、9.03%,在HPV陰性組異常率分別為6.42%、4.52%、7.43%,兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）,雖然r＞0但考慮為偶然因素造成,說明淋球菌、TV、白假絲酵母菌感染與HPV無相關(guān)性,結(jié)果見表2所示。

表1 HPV基因型檢出情況

3 討論

宮頸癌在我國呈逐年增高且低齡化的趨勢[4],高危型人乳頭瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的持續(xù)感染是宮頸癌變的危險(xiǎn)因素,隨著人們對微生態(tài)平衡的研究深入,微生態(tài)平衡在維持人類生殖健康中的作用越來越受到重視[5],宮頸微生態(tài)環(huán)境的改變是否會(huì)影響HPV的感染、致病、癌變等已成為目前研究的熱點(diǎn)[6]。該研究通過分析4 459例患者陰道微生態(tài)指標(biāo),探討微生態(tài)環(huán)境在HPV感染中所起到的作用。

3.1 菌群密度、多樣性、乳酸桿菌與HPV感染相關(guān)性

Kyrgiou[7]研究表明在乳酸桿菌缺乏組HPV陽性且具有菌群密度、多樣性改變的婦女發(fā)生發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于HPV陰性組(OR:34.1,95%CI:4.95～284.5)。該研究HPV感染陽性組中,菌群密度、多樣性、乳酸桿菌異常率最高,分別占24.16%、16.54%、14.42%,與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,說明菌群密度、多樣性改變及乳酸桿菌異常能夠促進(jìn)HPV感染。

3.2 pH值與清潔度與與HPV感染的相關(guān)性

研究指出[8]陰道的pH值升高是CIN發(fā)生的危險(xiǎn)因素（P＜0.01,OR值為4.77）,該研究中pH值異常、清潔度下降在HPV陽性組所占比例分別為12.56%、10.64%,在HPV陰性對照組中異常率為6.34%、3.96%,兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),相關(guān)系數(shù)r＞0,說明pH值與清潔度異常在HPV感染中發(fā)揮促進(jìn)作用,兩者具有相關(guān)性。

3.3 陰道毛滴蟲、白假絲酵母菌與HPV感染的相關(guān)性

Ruei-Yu[9]發(fā)現(xiàn)滴蟲病與宮頸病變具有相關(guān)性（AOR 2.656,95%CI=1.411～5.353,P=0.003）。而孟齡婷[10]認(rèn)為VVC與HPV感染無關(guān)。該研究滴蟲與白假絲酵母菌在HPV感染陽性組中的感染率為5.50%與9.03%,與HPV陰性對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05),由于樣本量有限,需要進(jìn)一步觀察研究。

3.4 沙眼衣原體、淋球菌與HPV感染的相關(guān)性

研究表明[11]血清沙眼衣原體抗體與CIN風(fēng)險(xiǎn)增加顯著相關(guān)(OR=7.3,95%CI:1.5～35.2）,萬彬等[12]發(fā)現(xiàn)HPV和淋球菌合并感染會(huì)提高發(fā)生HSIL(RR=4.970,95%CI:2.174～11.358,P＜0.01)的風(fēng)險(xiǎn)。該研究中衣原體在HPV陽性組中感染率為8.47%,顯著高于HPV陰性對照組(4.32%)（P＜0.05)。而淋球菌在HPV陽性組中感染率為7.92%,在HPV陰性對照組中感染率為6.42%,兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),在該研究中沙眼衣原體會(huì)增加HPV感染的風(fēng)險(xiǎn),而淋球菌與HPV感染無相關(guān)性。

3.5 唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶、過氧化氫酶與HPV感染的相關(guān)性

朱若熙等[13]發(fā)現(xiàn)唾液酸苷酶陽性與H2O2陽性是CIN發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素,該實(shí)驗(yàn)中唾液酸苷酶在HPV陽性組感染率顯著高于HPV陰性對照組（11.3%、7.63%),兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r＞0,P＜0.05),H2O2在HPV陽性組中感染率為9.13%,與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,說明唾液酸苷酶和H2O2在HPV感染中起協(xié)同促進(jìn)作用。

張曉芳等[14]發(fā)現(xiàn),白細(xì)胞酯酶陽性可以促進(jìn)HPV感染,兩者具有相關(guān)性（r=0.64,P＜0.01),該次實(shí)驗(yàn)在HPV陽性組中,白細(xì)胞酯酶陽性率達(dá)14.22%,在對照組中異常率為4.81%,兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.160,P＜0.05),說明白細(xì)胞酯酶在HPV感染及宮頸病變中起著促進(jìn)作用。

綜上所述,陰道微生態(tài)環(huán)境失衡不僅會(huì)導(dǎo)致HPV感染率增加,也會(huì)提高宮頸癌變的風(fēng)險(xiǎn)。因此,臨床中通過對陰道微生態(tài)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控,進(jìn)而規(guī)范治療陰道中存在的各類疾病,通過這種簡單的干預(yù)手段,對降低HPV感染的風(fēng)險(xiǎn)提供重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。