贛南地區耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌血清分型、耐藥機制及毒力的研究

戴 玥，萬臘根，賴蔚文，劉 洋

(1.南昌大學第一附屬醫院，江西 南昌 330000；2.贛州市于都縣人民醫院，江西 贛州 342300)

克雷伯菌是一種革蘭陰性細菌，可引起多種類型的感染，包括肺炎，血液感染，傷口或手術部位感染和腦膜炎[1]。肺炎克雷伯菌可通過呼吸道和血液進行傳播，傳播速度快，致死率高。為深入探討贛南地區耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌血清分型、耐藥機制及毒力，本研究于2016年1月～2018年12月選取贛南地區六家醫院的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌血清樣品80例，對樣品進行PCR檢測，確定血清莢膜分型，確定毒力基因，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：收集2016年1月～2018年12月贛南地區六家醫院的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌血清80例，采用PCR法確定血清莢膜分型，進而進行多位點序列分析和脈沖場凝膠電泳分析，采用PCR法確定毒力基因[2-3]。本次研究經過我院醫學倫理委員會同意。

1.2方法：①肺炎克雷伯菌血清分型研究：通過PCR檢測CR-KP菌株的莢膜血清分型，總結血清分型，確定哪種分型出現最多；②通過病例的回顧性分析，探究感染碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌的患者患病體征；③進行血清抗性實驗和抗中性粒細胞吞噬實驗，研究贛南地區耐藥菌株之間是否存在耐藥基因的傳播[4]；④通過多位點序列分析探究贛南地區耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力因子的基因序列。

1.3統計學分析：采用SPSS17.0軟件，毒力分數呈偏態分布，采用秩和檢驗，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1贛南地區耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌血清分型：贛南地區耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌最常見的血清分型最廣泛的是K1型，16例占20%；K2 12例，約占15%；K57 11例，約占13.75%；K54 8例，約占10%；K3 5例，約占6.25%；K20 3例，約占3.75%；其他25例，約占31.25%。

2.2感染碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌的患者患病體征：高黏液菌株鑒定 80株肺炎克雷伯菌拉絲試驗結果顯示僅 1 株陰性，陽性率達 98.75%，見表1。

2.3血清抗性實驗結果：80株分離菌株涂板法中,血清敏感的菌株為34株，中等敏感的菌株為28株,血清抗性菌株為16株。

2.4抗中性粒細胞吞噬實驗結果：0 min、10 min、15 min、20 min吞噬指數分別為0/1/2/2，尤其可見耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對中性粒細胞抗性較強。

2.5贛南地區耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力因子：K1血清型以rmpA、wcaG、aerobactin、kfu 和allS 5種毒力基因同時攜帶為主； 在K2、K20和K57血清型中rmpA + aerobactin是主要的毒力基因；K5型菌株主要攜帶rmpA+aerobactin + kfu；株K54型菌株主要攜帶rmpA + aerobactin+wcaG，詳見表2。

表1 感染碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌的患者患病體征

表2 耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力基因

3 討論

肺炎克雷伯菌是通常引起醫院感染的高致病性病原體，耐碳青霉烯KP難以用普通抗生素殺死，治療過程較長，死亡率高，其主要毒力因子與其血清莢膜相關，研究表明血清型K1和K2致病率最高，K7和K21致病率最低[2]。rmpA、camG是肺炎克雷伯菌最重要的毒力因子，其在抗吞噬作用，抑制早期炎性反應，抗微生物肽抗性和抑制DC細胞成熟中起重要作用。 另外的肺炎克雷伯氏菌毒力因子可能與菌毛，外膜蛋白以及鐵元素獲取有關。為深入探討贛南地區肺炎克雷伯菌分型及毒力情況展開本次研究。結果表明，贛南地區耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌最常見的血清分型最廣泛的是K1型，約占20%，高黏液菌株鑒定 80株肺炎克雷伯菌拉絲試驗結果顯示僅 1 株陰性，陽性率達 98.75%，80株分離菌株涂板法中,血清敏感的菌株為34株，中等敏感的菌株為28株,血清抗性菌株為16株，耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對中性粒細胞抗性較強，K1血清型以rmpA、wca G、aerobactin、kfu 和all S 5種毒力基因同時攜帶為主； 在K2、K20和K57血清型中rmp A + aerobactin是主要的毒力基因；K5型菌株主要攜帶rmp A+aerobactin + kfu；株K54型菌株主要攜帶rmpA + aerobactin+wca G。

綜上所述，贛南地區出現最高為K1型，耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌之間已經存在一定的毒力基因遺傳現象。