電針足三里對腹瀉型腸易激綜合征大鼠內臟敏感性及腹瀉情況的影響

陳苑平 陳 柯 許金森 鄭淑霞*

1.福建中醫藥大學，福建 福州 350108；2.福建省中醫藥科學院，福建 福州 350003

腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome，IBS)是常見的消化系疾病，表現為腹痛或腹部不適，且伴隨排便情況改變的功能性腸病，多為慢性、間歇性發作。IBS的發病率逐年增高，在IBS的亞型中又以腹瀉型(IBS-D)最為常見，約占IBS發病率的3/4，因IBS-D容易反復發作，給患者生活及心理造成一定的影響[1]。研究認為，IBS的發病機制與胃腸道動力異常以及內臟高敏感性存在聯系[2]。研究調查表明，目前西藥對該疾病的治療存在一定的局限性，而針灸對該病的治療則有一定的優勢[3]。本實驗通過電針大鼠足三里，觀察電針足三里對IBS-D模型大鼠的內臟敏感性以及大鼠腹瀉情況的影響，初步探討電針足三里對于IBS-D的療效及其效應機制。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 健康的雄性SD大鼠30只，體重(200～230)g，動物許可證號: SCXK(滬)2018-0006(上海西普爾-必凱實驗動物有限公司)，實驗前先適應性飼養于福建中醫藥科學院動物房(普通級)7 d，控制室內溫度為 23～26 ℃，相對濕度為50%～70%。在本次實驗過程中，按照《實驗動物管理條例》等相關文件標準進行飼養與處置。

1.2 試劑 番瀉葉生藥(亳州市華鑫中藥飲片科技有限公司)，液體石蠟(運加牌，黑龍江省運加醫療科技有限公司)，0.9%氯化鈉注射液(江西科倫藥業有限公司)，8FR導尿管(事達牌，湛江市事達實業有限公司)，2 mL注射器(康友牌，江蘇康友醫用器械有限公司)。

1.3 儀器 電子秤(福建福日電子股份有限公司)，R407小動物呼吸麻醉系統(瑞沃德生命科技有限公司)，異氟烷(瑞沃德生命科技有限公司)，200 mm×80 mm×80 mm自制亞克力盒，自制大鼠固定器，SDZ-Ⅱ型電針儀(蘇州醫療用品廠有限公司)，0.25 mm×13 mm無菌針灸針(蘇州東邦醫療器械有限公司)。

2 實驗方法

2.1 分組與造模 實驗開始前先將30只大鼠隨機分成空白組、模型組及電針組，空白組大鼠正常喂養，余下兩組則需進行2w的IBS-D造模處理。參照Williams等[4]的方法進行改進，采用慢性束縛應激聯合番瀉葉灌胃的方法建立IBS-D大鼠模型，并參照趙妍等[5]的方法制備0.3 g/mL的番瀉葉煎劑。造模的具體操作：造模時先給予番瀉葉煎劑(0.3 g/mL)，并按照10 mL/kg的給藥劑量灌胃。灌服番瀉葉煎劑后，將大鼠裝進自制的固定器中，限制其無法進行自如活動，持續時長為1 h，每日1次，持續2周。

2.2 干預方法 電針組在造模成功后對大鼠的足三里穴進行電針干預，參照實驗針灸研究會制定的《實驗動物針灸穴位圖譜》，選取大鼠的足三里穴，其位置在大鼠的膝關節后外側。操作時先觸及大鼠的腓骨小頭，再往下約5 mm即為該穴，再選用規格為0.25 mm×13 mm的毫針直刺，深度約為5 mm，并接上電針儀。具體方法：首先將大鼠固定在自制固定器內，使其不亂跑亂動，定穴后直刺，進針后不做手法刺激，連接SDZ-II電針儀進行干預，選用波形為疏密波，頻率調至2 Hz，強度約為1～2 mA，以大鼠下肢出現輕微抖動且不嘶叫為度，留針20 min，每日1次，持續7 d。

2.3 觀察指標

2.3.1 一般情況 觀察大鼠在實驗過程中的精神狀態、活動情況、毛發光澤度以及體重增長等情況。

2.3.2 腹瀉情況 在大鼠造模前后以及干預后，對所有大鼠進行腹瀉指數的測算。腹瀉指數測定時在鼠籠內墊上濾紙，定時觀察大鼠排便情況，如有稀便污跡沾染濾紙則需更換濾紙，并及時記錄濾紙的污跡面積。持續觀察5 h后，統計大鼠排稀便的數量及腹瀉情況，再根據公式計算每只大鼠的腹瀉指數。

公式[6]：腹瀉指數=稀便率(每只大鼠的稀便數/總便數)×稀便級(每只大鼠的稀便級數總和/稀便數)。

稀便級數分級[7]：以稀便污染濾紙形成污跡面積的大小定級, 分為4級：1級為污染直徑<1 cm，2級污染直徑1.0～1.9 cm，3級污染直徑2～3 cm，4級污染直徑>3 cm。測量操作：先統計每個大鼠排便的總數，再統計大鼠排稀便的總數，并逐一測定每堆稀便的級數，然后參照公式算出腹瀉率、稀便級以及腹瀉指數。測量污染直徑時，如果糞便形狀大致為圓形，則可以直接量直徑；若糞便形狀為橢圓形或較不規則時，則測量其最長距離和近似圓的直徑，并將二者相加除以2。

2.3.3 內臟敏感性評價 在造模前、造模后及干預后，先將大鼠禁食12 h，將所有大鼠逐個放入小動物呼吸麻醉誘導盒內，使其吸入異氟烷麻醉。待其麻醉后將帶有球囊的8FR導尿管插入大鼠肛門內，導尿管插入深度為4.5 cm，隨后用膠帶將其纏在大鼠尾巴上固定。將大鼠放入規格為200 mm×80 mm×80 mm的透明固定盒中，并將含有溫生理鹽水的2 mL注射器接入導尿管尾部，待大鼠完全清醒后盡快檢測大鼠的內臟敏感性。測量結直腸擴張(CRD)時，緩慢向球囊內注溫生理鹽水，使球囊內的壓力逐漸增高，記錄大鼠出現腹壁收縮反應及腹部、臀部抬高并抬離地面時的容量閾值，需重復3次該操作，并取平均值。

3 結果

3.1 各組大鼠一般情況比較 空白組在全程實驗中大鼠精神良好、活動自如、毛色潤澤，大便正常未見有腹瀉的情況。模型組及電針組的大鼠在進行造模后逐漸出現精神狀態差、活動減少、蜷縮、易激惹、毛發干枯無澤、肛周有稀便污跡附著。電針組在電針干預后精神狀態、活動情況以及毛色得到一定程度的好轉。如圖1所示，在造模期結束后，與空白組相比較，模型組及電針組體重增長幅度較小，且差異具有統計學意義(P<0.01)。干預期結束后，電針組大鼠體重增長情況得到一定改善，且與模型組比較差異具有統計學意義(P<0.01)。

3.2 內臟敏感性評價 大鼠CRD容量閾值比較，如圖2所示，模型組大鼠的腹部收縮、腹部抬起及臀部抬起的容量閾值，與空白組相比均顯著降低，且差異具有統計學意義(P<0.01)。電針組大鼠的腹部收縮、腹部抬起及臀部抬起的容量閾值與模型組相比，在電針干預后得到了提高(P<0.05)。

3.3 腹瀉情況 空白組在實驗期間未出現腹瀉情況，則只對模型組及電針組大鼠的腹瀉指數進行比較。如圖3所示，模型組及電針組在造模后檢測發現均出現了腹瀉(P>0.05)，但是在干預之后電針組大鼠的腹瀉情況得到了好轉，且與模型組對比具有差異(P<0.01)。

4 分析與討論

中醫角度來看，可根據IBS-D的主要臨床表現，將其劃入“泄瀉”“腹痛”范疇，其病位在腸，與脾胃密切相關。目前，IBS的發病機制尚未有定論，但是隨著現代醫學科學技術的發展，近年來IBS發病機制被研究者們不斷深入挖掘。現代醫學認為IBS的發病機制可能主要與機體的內臟高敏感性、腸動力異常等聯系密切[8]。Bouin等[9]研究發現，患有IBS的人群的腸道疼痛閾值普遍低于正常人群，此后內臟高敏感性逐漸成為研究IBS的發病機制的一個新的切入點。降低內臟高敏感性，可以改善IBS患者的癥狀。

實驗結果顯示，電針足三里穴能夠改善IBS-D大鼠的易激惹、倦怠、體重增長緩慢的情況，并且有效緩解IBS-D大鼠的腹瀉情況。目前，CRD閾值是評價IBS-D大鼠模型內臟敏感性的方法之一，即通過對大鼠結腸刺激所產生的反應。與空白組相比，模型組大鼠的CRD閾值偏低，說明模型組存在內臟高敏感，電針組在干預之后，其內臟敏感程度也得到了一定的改善。

針灸是治療IBS的常用補充療法和替代療法之一，針灸的干預方式對機體的調節具有整體性，并且對IBS的改善機制可能涉及道多環節、多層次。研究[10-11]表明，采用包括電針、艾灸等在內的針灸方式治療IBS-D，均可改善內臟高敏感性、胃腸道炎癥，并且能調節胃腸蠕動。此外，有研究[12]發現，電針治療IBS-D的療效甚至略優于藥物，且電針副作用少，所以在臨床上越來越受到患者們的認可。

《四總穴歌》有云：“肚腹三里留”，足三里是臨床針灸治療胃腸疾病的常用穴，其具有和胃健脾、補中益氣、通調腑氣等功能。《針灸大成》也提到：“泄瀉肚腹諸般疾，三里、內庭功無比”。《靈樞·五亂》言：“氣在于腸胃者，取之足太陰、陽明；不下者，取之三里”，說明該穴不僅可以固護后天正氣以調胃腸，又能調暢氣機以和肝脾[13]。

梳理總結近10年針灸臨床治療IBS-D選穴規律，通過計算、歸納出腧穴、歸經及選穴部位的頻次，發現在IBS-D的針灸治療中足三里穴出現的頻次居于前列[14]。臨床經驗證明，在足三里穴位上施以針刺或艾灸等干預，可以改善IBS-D患者的腹痛、腹瀉等不適癥狀，足三里治療IBS-D的療效確切，且未見有不良反應[15-16]。雖然足三里在治療IBS-D的臨床療效得到了認可，但是其起效的作用機制卻未有確切闡述。有研究[17]認為，在足三里穴在上施以電針可以調節相關蛋白的表達、降低結腸黏膜組織中的炎性因子含量，從而減輕IBS-D大鼠的腸道炎性損傷，達到治療疾病的作用；還有的研究[13]發現，電針足三里可以下調與胃腸動力相關的結腸波形蛋白的表達，從而糾正IBS-D大鼠的胃腸功能。

綜上所述，電針足三里穴能夠改善IBS-D大鼠的易激惹、倦怠、體重增長緩慢的情況，改善大鼠的腹瀉情況，降低內臟高敏感性。電針足三里治療IBS-D的療效確切，但是其可能存在的作用機制仍然需要本課題組進一步去探索。