HLA-DRB1單核苷酸多態性與重度子癇前期 遺傳易感性的關系

[摘要]目的 探討人類白細胞抗原（HLA）Ⅱ類基因DRB1 rs3135388、rs2213586及rs2308765位點單核苷酸多態性與孕產婦重度子癇前期遺傳易感性的關系。方法 選取重度子癇前期產婦60例（子癇組）、正常足月妊娠產婦100例（對照組）作為研究對象。收集兩組研究對象的外周血，提取DNA經聚合酶鏈式反應（PCR）擴增后，對HLA-DRB1基因rs3135388、rs2213586及rs2308765位點進行直接測序，并進行基因型及等位基因頻率分析。結果 未發現HLA-DRB1基因rs2308765位點的單核苷酸多態性。兩組rs3135388和rs2213586位點的基因型及等位基因頻率分布比較，差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 HLA-DRB1基因rs3135388、rs2213586及rs2308765位點的單核苷酸多態性可能與重度子癇前期的遺傳易感性無相關性。

[關鍵詞]先兆子癇;HLA-DRB1鏈;多態性，單核苷酸;疾病遺傳易感性

[中圖分類號]R714.244

[文獻標志碼]A

[文章編號]2096-5532（2021）02-0246-04

[ABSTRACT]Objective To investigate the association of the single nucleotide polymorphisms rs3135388， rs2213586， and rs2308765 in the HLA-DRB1 gene with the genetic susceptibility to severe preeclampsia （PE） in pregnant and parturient women. Methods A total of 60 parturients with severe PE were enrolled as PE group and 100 parturients with full-term pregnancy were enrolled as control group. Peripheral blood was collected from the two groups， and after DNA was extracted and amplified by PCR， direct sequencing was performed for rs3135388， rs2213586， and rs2308765 of the HLA-DRB1 gene to analyze genotype and allele frequencies. "Results No single nucleotide polymorphism was found at rs2308765 of the HLA-DRB1 gene. There were no signi-ficant differences in genotype and allele frequencies at rs3135388 and rs2213586 of the HLA-DRB1 gene between the two groups （Pgt;0.05）. "Conclusion Single nucleotide polymorphisms rs3135388， rs2213586， and rs2308765 in the HLA-DRB1 gene may not be associated with the genetic susceptibility to severe PE.

[KEY WORDS]pre-eclampsia; HLA-DRB1 chains; polymorphism， single nucleotide; genetic predisposition to disease

子癇前期（PE）是指妊娠20周后首次出現的以高血壓、蛋白尿為主要表現的臨床綜合征[1]，近年來PE發病率呈現不斷上升趨勢，由于其可伴發嚴重并發癥，如心力衰竭、HELLP綜合征等，成為導致孕產婦不良預后的重要原因。研究表明，胚胎在子宮內附著、存活須憑借母-胎間的免疫耐受平衡[2]，攜帶父方來源的胎兒基因與母體的基因沖突使得滋養細胞侵入障礙、胎盤淺著床從而導致PE的發生[3]。人類白細胞抗原（HLA）可在妊娠過程中抑制子宮內膜自然殺傷細胞的活性，進而維持母胎之間免疫平衡。HLA-DR抗原是HLA基因系統中的重要抗原之一，決定其特異性的主要編碼基因DRB1座位具有高度多態性。目前研究認為，HLA-DRB1基因相關位點單核苷酸多態性（SNP）與多種疾病的發生密切相關[4-6]。其中HLA-DRB1 rs3135388位點位于5′非翻譯區，有研究證實其SNP與多發性硬化癥有明確的相關性[7-8];rs2308765位點的SNP可導致錯義突變（由半胱氨酸突變為苯丙氨酸），與腦血管疾病相關[9];rs2213586位點目前仍處于研究階段，其功能未知。然而，這3個位點的SNP與重度PE是否具有相關性目前尚無報道。本文研究通過對產婦HLA-DRB1基因的3個位點rs3135388、rs2308765及rs2213586進行基因型及等位基因頻率分析，探討HLA-DRB1基因SNP與重度PE的相關性，以期為重度PE的診斷及治療提供遺傳學依據。現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2016年6月—2017年8月，選取在青島大學附屬醫院分娩的重度PE產婦60例（子癇組），年齡20～46歲，平均（33.67±5.42）歲。重度PE診斷參照相關文獻標準[10]，滿足下列任何一種情況即可診斷：①收縮壓≥21.28～23.94 kPa，或舒張壓≥14.63 kPa;②24 h尿蛋白gt;5.0 g或隨機尿蛋白以上;③中樞神經系統功能障礙，精神狀態改變和嚴重頭痛（頻發，常規鎮痛藥不緩解）;④腦血管意外;⑤視力模糊，眼底點狀出血，極少數病人發生皮質性盲;⑥肝細胞功能障礙，肝細胞損傷，血清轉氨酶至少升高2倍;⑦上腹部或右上象限痛等肝包膜腫脹癥狀，肝被膜下出血或肝破裂;⑧少尿，24 h尿量lt;500 mL，肺水腫、心力衰竭;⑨血小板lt;100×109/L;⑩凝血功能障礙;B11微血管病性溶血（血清乳酸脫氫酶升高）;B12胎兒生長受限、羊水過少、胎盤早剝。選取同期正常妊娠的產婦100例作為對照組，年齡22～44歲，平均（30.74±4.60）歲。兩組研究對象既往均無原發性高血壓、內分泌疾病、心力衰竭、急慢性腎炎以及癌癥等病史。本文研究經醫院倫理委員會審核批準。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床資料采集 根據知情同意原則收集研究對象的臨床資料，包括產婦孕產次、血壓及新生兒胎齡、體質量、生后1 min Apgar評分等。1.2.2 HLA-DRB1相關SNP位點測序 采集研究對象外周血，應用Promega DNA純化試劑盒提取基因組DNA，PCR擴增目的片段，引物由美國Applied Biosystems（ABI， New York， USA）生物公司設計并合成，引物序列見表1。對目的片段進行直接測序，測序結果由BioEdit Sequence Alignment Editor讀出，不能讀取結果或結果模棱兩可時進行反向測序[11]，分析基因型及等位基因頻率。

1.3 統計學分析

應用SPSS 20.0軟件進行統計學分析。應用擬合優度χ2檢驗進行Hardy-Weinberg遺傳平衡分析，評估對照組是否具有代表性。計量資料結果以x2±s表示，數據間比較采用獨立樣本t檢驗;計數資料比較采用Person卡方檢驗，風險度用比值比（OR）及95%可信區間（95%CI）表示。以Plt;0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組臨床資料比較

子癇組產婦年齡、收縮壓和舒張壓均高于對照組，子癇組新生兒胎齡、出生體質量及1 min Apgar評分均低于對照組，差異有顯著性（t=-22.12～34.78，Plt;0.05）。子癇組產婦的生產次數（產次）、懷孕次數（孕次）與對照組相比，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。見表2。

2.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗

對照組HLA-DRB1基因rs3135388位點（χ2=0.066，P=0.798）、rs2308765位點（χ2=0.000，P=1.000）及rs2213586位點（χ2=1.355，P=0.244）的基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，即Pgt;0.05，認為群體遵循遺傳規律，所得數據具有良好的群體代表性。

2.3 兩組HLA-DRB1 rs3135388、rs2308765以及rs2213586位點基因型和等位基因頻率分布比較

本研究兩組均未發現rs2308765位點的SNP。子癇組與對照組HLA-DRB1 rs3135388基因型差異無統計學意義（χ2 =1.678，P=0.432），兩種等位基因頻率差異無統計學意義（χ2 =0.688，P=0.407，OR=0.590，95%CI=0.167～2.081）。子癇組與對照組HLA-DRB1 rs2213586位點基因型差異無統計學意義（χ2 =5.600，P=0.061），兩種等位基因頻率差異無統計學意義（χ2 =0.687，P=0.407，OR=1.310，95%CI=0.691～2.484）。見表3、4。

3 討 論

PE是一種妊娠期的特發性疾病，而重度PE常可引發心力衰竭、肺水腫、HELLP綜合征等，進而導致孕產婦的不良預后;同時由于孕期胎盤功能不良，母體與胎兒物質交換障礙，可致胎兒生長受限、早產、低出生體質量及生后窒息低氧等[12-13]。有研究發現，PE孕婦與正常對照組HLA-DRB1的表達存在明顯差異[14]，該基因的多態性與重度PE的發生存在緊密聯系[15]。

PE屬于妊娠高血壓疾病，流行病學研究發現，高血壓具有明顯的家族聚集傾向，病人一級近親屬發生高血壓的風險較對照組增加約5倍[16]，提示遺傳因素在疾病的發病過程中也發揮重要作用[17]。此外，已有研究顯示，PE可以看作母體對胎兒的同種移植物的免疫排斥反應，而母體與胎兒間免疫失衡導致的胎盤功能不良與PE的發生發展密切相關[18-20]。HLA是器官移植期間導致移植排斥反應發生的重要組織相容性抗原，在人體免疫應答期間發揮著重要的作用。妊娠過程中，HLA在介導母兒免疫耐受中起著重要作用，可以防止母體對胎兒的免疫攻擊，而且還能與特定受體結合后促進血管生長因子的分泌，促進胎盤血管的正常滋生以及胚胎組織向子宮內膜的安全著床[21]。HLA-DR抗原是HLA基因系統中最重要的抗原之一，決定其特異性的主要編碼基因DRB1座位具有高度多態性，目前多項研究證實該區域的基因多態性與PE的發生密切相關。HAYWARD等[22]和吳乾渝等[23]研究發現，PE病人HLA-DRB1*06和HLA-DRB1*07及其新生兒HLA-DRB1*07出現的頻率顯著高于正常對照組。劉國成等[15]通過病例對照研究發現，HLA-DRB1*03基因的多態性與妊娠期高血壓具有相關性。

本研究采用PCR直接測序法檢測HLA-DRB1單個核苷酸變異對PE發病的影響。結果顯示，子癇組和對照組均未發現rs2308765位點的SNP，而兩組rs3135388及rs2213586位點基因型分布和等位基因頻率差異均無統計學意義，表明這兩個位點多態性可能與PE遺傳易感性不相關。分析其原因，可能與本研究樣本量偏小以及等位基因與基因頻率的連鎖不平衡有關。此外，妊娠期高血壓作為環境與遺傳因素共同起作用的疾病，其發病可能與多種基因聯合作用相關。因此，本研究尚不能認為HLA-DRB1 rs2308765、rs3135388、rs2213586位點SNP與重度PE有相關性。進一步擴大樣本量、檢測其他相關基因，進行單倍型分析和多位點聯合分析，或將為下一步研究的重點。

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（本文編輯 黃建鄉）