乳腺癌患者TOP2A基因變異的臨床病理意義分析

（沈陽二四二醫(yī)院病理科，遼寧 沈陽 110000）

乳腺癌是臨床常見病、多發(fā)病。近幾年，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升的勢態(tài)，其在很大程度上對民眾的生活質量造成了嚴重影響[1-2]。在對乳腺癌患者開展化療過程中，通常需要應用蒽環(huán)類藥品。但現(xiàn)如今尚缺少關于蒽環(huán)類藥品劑量強度有效靶標。拓撲異構酶2A（TOP2A）屬于核基質主要成分。其在核內能夠體現(xiàn)出相關效用[3]。該物質參與了DNA轉錄、復制、修復和重組過程，是蒽環(huán)類藥品有效的作用靶點。本文全面探究乳腺癌患者拓撲異構酶2A基因變異臨床病理意義，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年12月至2019年12月本院所收治的218例浸潤性乳腺導管癌患者為研究對象。受試者年齡26～71歲，平均年齡（45.32±2.62）歲。患者在接受手術治療以前，沒有進行過分子靶向治療或者放化療。病理樣本在離體后30 min通過濃度為10%的甲醛溶液完成固定、脫水、石蠟包埋、切片與HE染色。邀請2位高資歷病理科醫(yī)師閱片并診斷，確定受試者為浸潤性乳腺癌。

1.2 方法

1.2.1 試劑以及探針 本實驗所利用的免疫組化檢測為福州邁新生物技術開發(fā)有限公司生產的HER-2/neu、Ki-67、PR、ER。熒光原位雜交檢測試劑盒為廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司生產的HER2/neu/TOP2A/CSP17多色檢測試劑盒。

1.2.2 實驗方法 ①FISH：將玻片利用常規(guī)方式脫蠟復水，于100 ℃環(huán)境下水浴處理，時間為20 min。后進行蛋白酶消化，時間為10 min，85 ℃變性，37 ℃雜交過夜，開展DAPI染核和封片，發(fā)生熒光反應，應用顯微鏡觀察反應結果。②IHC法：取用玻片，利用常規(guī)方法實施脫蠟復水，有效修復抗原。一抗孵育4 ℃過夜、二抗孵育30 min，室溫。經DAB染色，實施蘇木精復染，脫水，透明封片，于顯微鏡下觀測結果。

1.3 具體判讀標準 針對于TOP2A具體判定標準，利用本實驗所使用的試劑盒推薦標準完成。癌瘤細胞計數(shù)共計30個，統(tǒng)計出Ratio值。TOP2A擴增標準為：①拓撲異構酶2A信號點為簇狀或者點簇狀。②TOP2A/CSP17比例在2.0以上。TOP2A缺失標準為：TOP2A/CSP17比例在8.0以下。針對于HER-2中的FISH以及IHC測定利用我國乳腺癌HER2檢測指南中的判讀標準完成該項工作。IHC、PR、ER判讀標準結合乳腺癌雌激素孕激素受體免疫組織化學檢測指南中的相關條目完成。分子分型分為Luminal A型以及Luminal B型、基底細胞型與HER-2過度表達型，細則為：Luminal A型：Ki67在14%以下、HER2-、ER+和（或）PR+。Luminal B型：其分為兩類，其一、ER+或/和PR+，Ki67在14%以上；其二、HER2+、ER+或/和PR+。HER-2過度表達型：Ki67呈高度表達、HER2+、PR-、ER-。基底細胞型：HER2-，PR-、ER。

1.4 統(tǒng)計學方法 本實驗利用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對本研究產生的所有數(shù)據(jù)進行分析，對數(shù)據(jù)內的計量資料開展Spearman相關性分析，計數(shù)資料實施χ2檢驗分析，若P＜0.05，證實相關數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計學差異。

2 結果

2.1 乳腺癌患者TOP2A變異和HER2基因相關性 TOP2A基因擴張共計52例、缺失10例、總變異例數(shù)為62例。TOP2A以及HER2基因擴增共計52例，在此其中共計10例TOP2A基因缺失但HER2基因擴張；有46例受試者TOP2A基因不存在異常表達，但存在HER2基因擴張。和TOP2A基因變異率相比，HER2基因變異率明顯更高，HER2基因變異率和TOP2A基因變異率存在顯著相關性（r=0.698，P＜0.05），HER2蛋白變異和TOP2A基因變異存在相關性（r=0.3998，P＜0.05）。見表1。

2.2 TOP2A基因變異和臨床病理特點關聯(lián)性 TOP2A基因變異和患者腫瘤直徑、年齡無明顯相關性，P＞0.05，而與組織學分級情況、淋巴結數(shù)量存在明顯相關性，P＜0.05。見表2。

表1 乳腺癌患者TOP2A變異和HER2基因相關性

表2 TOP2A基因變異和臨床病理特點關聯(lián)性

2.3 TOP2A基因于各個乳腺癌分子分型內變異情況 本組內，分子分型為Luminal A型共計30例、TOP2A基因擴增0例、缺失2例、正常28例。分子分型為Luminal B型共計130例、TOP2A基因擴增34例、缺失2例、正常94例。HR2過度表達型共計46例，TOP2A基因擴增18例、缺失6例、正常22例。基底細胞型共計12例，其中TOP2A基因擴張以及缺失均為0例，正常12例。TOP2A基因于Luminal B型以及HER2過表達型呈現(xiàn)為高表達，其在Luminal A型以及基底細胞型為低表達。乳腺癌患者臨床分子分型和TOP2A基因變異情況無相關性（r=-0.189，P＞0.05）。

3 討論

諸多文獻表明，TOP2A蛋白屬于蒽環(huán)類化療藥物直接作用靶點。TOP2A參與了轉錄、細胞復制、有絲分裂和基因重組等過程，TOP2A和乳腺癌患者化療敏感度與預后存在顯著關聯(lián)性[4]。利用IHC法測定乳腺癌受試者病變組織內TOP2A蛋白表達有著良好的公允性。有文獻表明，TOP2A蛋白與乳腺癌組織內表達率在1%～90%，中位表達率大約為30%。有學者依照10%的截斷值測定TOP2A陽性表達率范圍為50%～80%[5]。人體的HER基因和TOP2A基因均在17號染色體中。上述二者位置相鄰[6]。有研究表明，在HER2陽性乳腺癌患者群體中，有89%～90%的患者存在TOP2A基因缺失或者擴增現(xiàn)象，但在HER2正常群體中則少有TOP2A基因變異情況。因此可以認為：上述兩類基因屬于協(xié)同變異，到HER2基因完成擴增以后，染色體發(fā)生重排，進而使TOP2A基因缺失或者擴張。于HER2基因正常乳腺癌患者中也會存在TOP2A變異現(xiàn)象[7]。有調查表明[8]，HER2基因正常群體中，TOP2A缺失以及擴張概率分別達到了3.7%以及6.6%。而在HER2基因擴增樣本內，TOP2A基因缺失以及擴增則達到了24.0%以及26.5%。由此可見，TOP2A基因變異于HER2擴增標本內更容易出現(xiàn)TOP2A表達。拓撲異構酶2A為基因轉錄、復制所需要的關鍵物質。發(fā)生TOP2A基因變異的乳腺癌患者往往預后不佳，生存期較短。這一點重點體現(xiàn)在TOP2A基因缺失患者群體之中，其預后往往更差[9]。

本實驗經過對218例乳腺癌受試者實施HER2蛋白、TOP2A基因、HER2蛋白、分子分型和組織分型等臨床病理特點開展分析，結果表明：TOP2A變異率為28.4%。該項報道和國內文獻相似。該基因的擴張和HER2基因擴張與其自身蛋白表達存在極大關聯(lián)性。其一般發(fā)生于HER2基因擴張的受試者之中。本組內僅有2例TOP2A基因缺失受試者同時出現(xiàn)了HER2基因沒有擴張的情況。另外值得說明的是，TOP2A基因變異和癌瘤組織分級以及轉移淋巴結也存在關聯(lián)性。TOP2AR基因變異和乳腺癌疾病分子分型無關聯(lián)性[10-14]。本實驗研究表明，與基底細胞形態(tài)以及Luminal A型內TOP2A基因變異率較低，而在HER2過表達型以及Luminal B型變異率則較高。TOP2A基因變異一般集中于分化不佳的癌瘤受試者之中。這也在根本上代表了TOP2A基因變異和乳腺癌患者預后不良存在關聯(lián)性。其屬于預測患者疾病預后情況的公允化指標。

針對于乳腺癌患者來講，為其開展新輔助化療已然成為了臨床常用方法。但值得注意的是，上述指標是否能夠預測化療效率還沒有形成一致的觀點。相關研究證實：對于發(fā)生TOP2A基因擴增的患者在接受化療時具有良好的總生存率和無病生存率，而對于TOP2A基因缺失的機制和相關臨床意義尚未被深入性研究，這也是日后臨床進一步研究的方向，以期為日后臨床實施個體化治療以及提升臨床治療成效提供理論依據(jù)。