HPLC法同時測定愛康九亨口服液中葛根素和橙皮苷的含量

彭乃煥

（百色市食品藥品檢驗所，廣西百色533000）

1 引言

愛康九亨口服液是以甘草、葛根、生姜、砂仁、白豆蔻、陳皮、赤小豆、丁香、蔗糖、蜂蜜、水為主要原料制成的保健食品，對化學性肝損傷有輔助保護功能。該保健食品的標志性成分為甘草酸，質量標準未建立葛根中葛根素和陳皮中橙皮苷的測定方法。本文采用HPLC法同時測定其中的葛根素和橙皮苷，為提高該保健食品的質量標準提供參考。

2 材料與方法

2.1 儀器、試劑與材料

高效液相色譜儀（美國Waters公司，e2695+2998），XS205DU型電子分析天平（感量為0.01mg，瑞士METTER TOLEDO公司），明澈-D24UV型純水機（美國Millipore公司），SB-5200DTD超聲波提取器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；甲醇（色譜純，默克公司）；水為超純水；標準品葛根素和橙皮苷均購于中國食品藥品檢定研究院；愛康九亨口服液（天津和治藥業集團有限公司生產）。

2.2 實驗方法

2.2.1 標準品儲備溶液的制備

精密稱取葛根素20.43mg，置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作為葛根素標準儲備液。精密稱取橙皮苷9.78mg，置10mL容量瓶中，加入二甲基甲酰胺2mL溶解，再加甲醇定容至刻度，作為橙皮苷標準儲備液。

2.2.2 混合標準溶液的制備

精密量取葛根素標準儲備液10 mL，橙皮苷標準儲備液2 mL，置20 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，搖勻，作為混合標準溶液（含葛根素0.4878mg·mL-1,橙皮苷0.094mg·mL-1）。

2.2.3 標準曲線溶液的制備

分別精密吸取混合標準溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL，分別置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 樣品前處理

精密量取本品1 mL，置10 mL容量瓶中，加適量甲醇，超聲處理（功率300w，頻率50kHz）3min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取濾液作為供試液。

2.2.5 液相色譜條件

色譜柱：Waters SunFire C18（250mm×4.6mm,5μm）；柱溫：30℃；流速：1.0mL·min-1；進樣量：10μL；檢測波長：283nm；流動相：A相為甲醇，B相為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫：0~5min A相23%；5~20min A相梯度變化到28%；20~21min A相梯度變化到40%；21~40minA相維持40%。混合標準溶液、供試品溶液及陰性溶液色譜圖見圖1。

圖1 A：供試品； B：陰性樣品； C：混合對照品

3 結果與分析

3.1 線性關系與檢出限、定量限

取配制好的標準曲線溶液，分別進樣10μL，按“2.2.5”色譜條件下測定峰面積。以峰面積Y為縱坐標，以標準曲線溶液濃度X為橫坐標進行線性回歸，各組分的回歸方程及相關系數見表1。可見該方法在實驗范圍內線性關系良好。以信噪比為3計算檢出限，信噪比為10計算定量限，測得每1mL樣品中葛根素、橙皮苷檢出限分別為0.013mg、0.0074mg， 定 量 限 分 別 為0.04mg、0.024mg。

3.2 精密度

取標準曲線溶液(濃度水平3)，連續進樣6次，結果測得葛根素和橙皮苷濃度的平均值為49.06μg·mL-1，9.427μg·mL-1；RSD分別為0.48%，0.65%。

表1 各組分線性關系測定結果

3.3 重復性試驗

取樣品，平行試驗6份，結果每1 mL含葛根素和橙皮苷分別為1.077mg和0.238mg；RSD分別為0.92%，0.64%。表明本方法重現性良好。

3.4 干擾試驗

按處方自制缺葛根和陳皮的陰性樣品，照“2.2.4”制成陰性樣品溶液。按“2.2.5”色譜條件進樣，結果陰性樣品溶液在葛根素和橙皮苷相同保留時間附近無雜質峰干擾。

3.5 方法回收率

精密量取樣品（批號為200101）0.50mL，共9份，每3份分別精密加入混合標準溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL，依法測定，結果葛根素平均回收率為96.22%，RSD為1.0%；橙皮苷平均回收率為98.01%，RSD為1.9%。

3.6 樣品測定

取3批樣品，每批樣品平行測定2份，結果葛根素的含量為：1.75 mg·mL-1、1.63 mg·mL-1、1.96 mg·mL-1； 橙 皮 苷 的 含 量 為 ：0.236 mg·mL-1、0.258mg·mL-1、0.232 mg·mL-1。

4 討論

4.1 流動相的選擇

由于該口服液藥物組成較多，實驗中發現在葛根素和橙皮苷主峰附近均干擾峰存在，通過參考文獻[1~5]分別考察乙腈－0.1%磷酸溶液，甲醇－0.1%磷酸溶液，甲醇－水等三種流動相組成對葛根素和橙皮苷的洗脫效果，結果以甲醇－0.1%磷酸溶液為流動相時，兩個主峰峰形好，與其他干擾峰的分離度均>3。

4.2 波長的選擇

葛根素最佳測定波長為250nm，橙皮苷最佳測定波長為283nm，該保健食品中葛根素的含量約高于比橙皮苷6倍，綜合考量兩成分的含量與響應值，選擇283nm為檢測波長。