鈣感受器STIM1在小鼠主動脈平滑肌收縮反應(yīng)中的作用研究

周夢園，張 利，曾 鵬，秦曉玥，鄭丹琳，李穗敏，鄺素娟，楊慧，饒芳，鄧春玉,3,4

[1.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)醫(yī)學(xué)研究部臨床藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510080；3.華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510006;4.廣東省心血管病研究所心血管內(nèi)科，廣東 廣州 510080]

血管平滑肌收縮和舒張功能異常是多種心血管疾病的重要病理變化，如：高血壓、糖尿病以及動脈粥樣硬化等。Ca2+是平滑肌細(xì)胞內(nèi)的重要的第二信使，在平滑肌收縮和舒張中扮演著重要角色，其發(fā)生調(diào)節(jié)紊亂可導(dǎo)致平滑肌舒縮功能異常[1]。正常血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的調(diào)節(jié)依賴兩種方式：① 細(xì)胞內(nèi)外Ca2+的交換；② 細(xì)胞內(nèi)鈣庫的調(diào)節(jié)。通常，在細(xì)胞膜控制細(xì)胞內(nèi)外Ca2+交換主要有3種通道：① 電壓操縱性鈣通道，如：L-型鈣通道；② 鈣庫操縱性鈣通道(Store-operated calcium channels，SOCC)；③ 受體操縱的鈣通道。其中，近年確定了SOCC分子基礎(chǔ)為: STIM1(stromal interacting molecules)和Orai1蛋白。STIM1是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫耗竭誘導(dǎo)外鈣內(nèi)流的感受器，能夠感受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)Ca2+濃度變化；Orai1是形成SOCC通道孔的跨膜蛋白。其激活機(jī)制為：當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫耗竭后，STIM1感受信號，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上進(jìn)行重新分配，聚集并遷移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜和細(xì)胞膜結(jié)合點(diǎn)上，募集細(xì)胞膜上的Orai1，將信號傳遞給Orai1，Orai1發(fā)生構(gòu)象變化，形成功能性鈣庫排空激活的鈣通道，介導(dǎo)細(xì)胞外鈣內(nèi)流[2]。隨后在兩個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)室同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，STIM1還同時(shí)直接抑制L-型鈣通道電流[3-4]。

SOCC最早是在不可興奮性細(xì)胞上，如：免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板等[5-6]，主要參與“興奮-轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)”過程，激活多種轉(zhuǎn)錄因子，包括：血清反應(yīng)因子、活化T細(xì)胞核因子和環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白。近年越來越多的研究表明，在興奮性細(xì)胞上如：神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等，也存在SOCC[7-8]。然而，在血管平滑肌上，SOCC的器官分布和功能表達(dá)等，是否參與平滑肌細(xì)胞收縮過程，即“興奮-收縮偶聯(lián)”，都有待進(jìn)一步闡明。因此，本研究借助平滑肌特異性STIM1敲除小鼠，探索STIM1介導(dǎo)的SOC在主動脈平滑肌收縮功能調(diào)控中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物C57BL/6(sm-STIM1-WT)和平滑肌STIM1敲除(sm-STIM1-KO)8周齡雄性小鼠，SPF級，各20只，購于江蘇集萃藥康生物科技有限公司，許可證號：SCXK(蘇)2018-0008，在華南理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心喂養(yǎng)至20周備用。本研究所有動物實(shí)驗(yàn)已通過廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)的動物實(shí)驗(yàn)倫理審查(No.GDRE201208a)。

1.2 試劑與儀器苯腎上腺素(phenylephrine，Phe，039K1453) 、5-羥色胺 (serotonin，5-HT，091M5163V) 、U46619(血栓素TXA2類似物)、二甲基亞砜(DMSO，015K0151)、硝苯地平(57H1139)、乙酰膽堿(Ach，115K0706)、毒胡蘿卜素 (thapsigargin，TG，049M4032V)、咖啡因(caffeine，71K1877)、EGTA(111K5411)均購于Sigma公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。610M 型多通道血管張力測定儀(DMT公司，丹麥)；Power Lab 8/30生物信號采集處理系統(tǒng)(AD公司，澳大利亞)；XTL250型體式顯微鏡；DK-8D型電熱恒溫水槽(上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠)；蛋白電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(北京市六一儀器廠)；抗GAPDH鼠多克隆抗體(Proteintech公司)；抗STIM1兔多克隆抗體(Proteintech公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)溶液Krebs Henseleit(K-H)溶液(mmol·L-1)：NaCl 119、NaHCO325、MgCl2·6H2O 1、KCl 4.7、KH2PO41.2、CaCl22.5、D-glucose 11.1；高鉀K-H溶液(mmol·L-1)：KCl 60、NaCl 63.7、NaHCO325、MgCl2·6H2O 1、KH2PO41.2、CaCl22.5、D-glucose 11.1。無鈣 K-H溶液(mmol·L-1)：NaCl 119、NaHCO325、MgCl2·6H2O 1、KCl 4.7、KH2PO41.2、D-glucose 11.1、EGTA 0.05。實(shí)驗(yàn)所用溶液配好后均通混合氣(95% O2+5% CO2)充分飽和。

1.4 平滑肌STIM1敲除鼠的制備采用Cre-lox重組技術(shù)制備平滑肌特異性STIM1敲除小鼠，利用平滑肌特異性SM22α-CreKI+小鼠與STIMfl/fl小鼠雜交，導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞中的STIM1的外顯子2特異性完全缺失，構(gòu)建sm-STIM1-KO小鼠。SM-22α-CreKI+/-/STIMWT(sm-STIM-WT) 作為對照組。觀察sm-STIM1-WT和sm-STIM1-KO小鼠外觀形態(tài)變化。提取小鼠主動脈組織蛋白，Western blot技術(shù)檢測STIM1表達(dá)變化，驗(yàn)證STIM1敲除鼠制備成功。

1.5 小鼠離體主動脈環(huán)制備血管環(huán)制備方法同以前發(fā)表文獻(xiàn)處理[9-10]。采用頸椎脫臼方法處死小鼠，迅速取出主動脈，并置于4 ℃ K-H溶液中。在體式顯微鏡下去除多余的脂肪和結(jié)締組織，并剪成2.0 mm的血管環(huán)，機(jī)械法去除內(nèi)皮。顯微鏡下將血管環(huán)直接固定于血管張力測定儀浴槽內(nèi)的兩個(gè)鉗夾上，平衡30 min，調(diào)節(jié)基礎(chǔ)張力至3 mN，每隔15 min 換液1次，并使張力維持在3 mN，平衡60 min后開始加入藥物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算機(jī)程序控制下完成記錄。浴槽內(nèi)的溶液在實(shí)驗(yàn)過程中溫度一直保持穩(wěn)定在(37±0.5)℃，且持續(xù)通入95% O2和5% CO2混合氣體。

1.6 實(shí)驗(yàn)藥物對離體小鼠主動脈血管環(huán)張力變化的影響血管功能性及內(nèi)皮完整性檢測同以前發(fā)表文獻(xiàn)處理[9-10]。對于血管功能性檢測合格且去內(nèi)皮完全的血管，平衡完成后，用1 μmol·L-1Phe誘導(dǎo)血管收縮，達(dá)到收縮平衡后，用無鈣K-H溶液洗脫4次，隨后用2 μmol·L-1毒胡蘿卜素(TG，肌漿網(wǎng)鈣泵抑制劑)和1 μmol·L-1硝苯地平(Nifedipine, L-型鈣通道阻斷劑)孵育30 min，加入2.5 mmol·L-1CaCl2，觀察sm-STIM1-WT和sm-STIM1-KO小鼠主動脈血管收縮反應(yīng)性差異。

采用累積濃度給藥方法，觀察Phe(0.001-10 μmol·L-1)、5-HT(0.001-10 μmol·L-1)和U46619 (0.000 1-1 μmol·L-1)誘導(dǎo)的兩組小鼠主動脈環(huán)收縮反應(yīng)差別。當(dāng)收縮反應(yīng)達(dá)到最大值，用K-H液洗脫4次，并給予1 μmol·L-1硝苯地平孵育30 min，重復(fù)以上Phe和5-HT累積濃度給藥，觀察硝苯地平對兩組血管收縮的影響；隨后用無鈣K-H液洗脫4次，給予1 μmol·L-1硝苯地平孵育30 min，重復(fù)Phe和5-HT累積濃度給藥，進(jìn)一步觀察在硝苯地平孵育下，無鈣K-H液中兩組血管收縮的變化。

用高鉀溶液刺激血管，待達(dá)到最大收縮反應(yīng)不再變化后，加入1 μmol·L-1硝苯地平孵育30 min。加入1 μmol·L-1Phe，收縮穩(wěn)定后用高鉀洗脫4次，再加入30 μmol·L-1SKF96365孵育30 min，再次加入1 μmol·L-1Phe刺激血管，比較Phe誘導(dǎo)sm-STIM1-WT和sm-STIM1-KO小鼠主動脈血管環(huán)收縮差異。血管平衡完成后，直接向浴槽中依次加入5 mmol·L-1、10 mmol·L-1和20 mmol·L-1無鈣K-H溶液配制的咖啡因，統(tǒng)計(jì)咖啡因誘導(dǎo)的血管收縮峰值、達(dá)峰時(shí)間和下降的時(shí)間常數(shù)(τ)。

2 結(jié)果

2.1 平滑肌STIM1敲除鼠制備成功sm-STIM1-KO和sm-STIM1-WT小鼠，以及C57BL/6小鼠之間的外觀形態(tài)無明顯差異。Western blot結(jié)果顯示，sm-STIM1-KO小鼠主動脈STIM1蛋白的表達(dá)水平基本消失，提示平滑肌STIM1敲除鼠制備成功，見Fig 1。

2.2 sm-STIM1-KO小鼠主動脈SOC鈣通道介導(dǎo)的血管收縮變化Phe引起sm-STIM1-KO和sm-STIM1-WT小鼠血管收縮，用無鈣K-H洗脫，硝苯地平和 TG孵育30 min后，在sm-STIM1-KO小鼠中發(fā)現(xiàn)CaCl2引起的血管收縮消失。提示STIM1參與小鼠主動脈SOCC介導(dǎo)的血管收縮，見Fig 2。

2.3 sm-STIM1-KO小鼠主動脈對血管收縮劑Phe、5-HT和U46619的反應(yīng)性變化Phe誘導(dǎo)小鼠主動脈呈濃度依賴性收縮；和野生型小鼠相比，sm-STIM1-KO小鼠對Phe的收縮反應(yīng)沒有變化，收縮量效曲線pD2和Emax均沒有明顯差異。經(jīng)L-型鈣通道阻滯劑硝苯地平孵育后，兩組小鼠血管收縮均被抑制，且sm-STIM1-KO小鼠血管收縮顯著低于野生型小鼠(Emax：32.23±3.69vs3.38±2.48；pD2：6.95±0.16vs7.05±0.40，n=4-11；P<0.01)。在硝苯地平孵育的無鈣K-H溶液中，sm-STIM1-KO小鼠幾乎未引起血管收縮(Emax：19.90±5.64vs1.34±0.37；pD2：7.04±0.49vs6.12±0.42，n=6-11；P<0.01)，提示肌漿網(wǎng)鈣釋放介導(dǎo)的血管收縮受損，見Fig 3。

Fig 1 Generation of smooth muscle-targeted STIM1-KO miceA:Scheme of cre-lox technology of smooth muscle-targeted STIM1-knockout. B:Appearance of sm-STIM1-WT mice,sm-STIM1-KO mice,and C57/B6 at 20 weeks of age. C:The protein expression levels of STIM1 in aorta tissues from SM-STIM1-WT and SM-STIM1-KO mice.

5-HT引起小鼠主動脈呈濃度依賴性收縮；sm-STIM1-KO小鼠對5-HT的反應(yīng)較野生型小鼠沒有顯著性變化；硝苯地平孵育后，血管收縮明顯降低，且sm-STIM1-KO小鼠血管收縮低于野生型小鼠(Emax：63.95±13.05vs13.75±9.16；pD2：6.59±0.08vs6.76±0.75，n=4-8；P<0.01)；在硝苯地平孵育的無鈣K-H溶液中，sm-STIM1-KO小鼠血管收縮低于野生型小鼠(Emax：29.31± 7.96vs6.00±3.49；pD2：6.64±0.15vs6.56±0.27，n=6-11；P<0.01)，見Fig 4。

Fig 2 Alteration in vasoconstriction of sm-STIM1-KO mouse aortic rings mediated by SOCCA:Representative traces showing vasoconstriction of mouse aortic rings mediated by SOCC. B:A summary graph of Ca2+-induced contraction mediated by SOCC. Results are expressed as sm-STIM1-KO:n=4; **P<0.01 vs sm-STIM1-KO group.

Fig 3 Response of aorta to Phe in sm-STIM1-KO miceA,C:Representative traces of Phe-induced concentration-dependent contraction in aortic rings in the presence or absence of nifedipine (1 μmol·L-1). B,D:Concentration-response curves were constructed. Results are expressed as sm-STIM1-KO:n=4-14; **P<0.01 vs sm-STIM1-WT+nifedipine group,##P<0.01 vs sm-STIM1-WT+nifedipine+Ca2+-free K-H group.

U46619引起小鼠主動脈呈濃度依賴性收縮；sm-STIM1-KO小鼠和野生型小鼠對U46619的反應(yīng)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在有鈣和無鈣的K-H溶液中，經(jīng)硝苯地平孵育后，兩組血管收縮均被抑制，sm-STIM1-KO小鼠血管收縮低于野生型小鼠(在有鈣的K-H溶液中，Emax：149.60±13.31vs54.02±4.97；pD2：7.95±0.07vs7.36±0.27，n=10-12；P<0.01。在無鈣K-H溶液中，Emax：84.18±21.39vs38.63±14.05；pD2：7.49±0.15vs7.18±0.50，n=10-12；P<0.01)，見Fig 5。

2.4 STIM1參與非L-型鈣通道介導(dǎo)主動脈收縮反應(yīng)性變化高鉀溶液引起小鼠主動脈持續(xù)收縮；硝苯地平完全阻斷了高鉀溶液引起的血管收縮，加入血管收縮劑Phe，sm-STIM1-WT小鼠主動脈持續(xù)收縮，而sm-STIM1-KO小鼠迅速收縮(快相)隨后下降至平穩(wěn)收縮(慢相)。統(tǒng)計(jì)兩相血管收縮值發(fā)現(xiàn)，sm-STIM1-KO快相收縮峰值降低但差異無有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，慢相收縮低于sm-STIM1-WT小鼠(31.60±3.42vs3.38±1.86，n=5-8；P<0.01)。兩組血管收縮均被SOCC非特異性抑制劑SKF96365抑制，見Fig 6。

Fig 4 Response of aorta to 5-HT in sm-STIM1-KO miceA,C:Representative traces of 5-HT-induced concentration-dependent contraction in aortic rings in the presence or absence of nifedipine (1 μmol·L-1). B,D:Concentration-response curves were constructed. Results are expressed as sm-STIM1-KO:n=4-12; **P<0.01 vs sm-STIM1-WT+nifedipine group,##P<0.01 vs sm-STIM1-WT+nifedipine+Ca2+-free K-H group.

Fig 5 Response of aorta to U46619 in sm-STIM1-KO miceA,C:Representative traces of U46619-induced concentration-dependent contraction in aortic rings in the presence or absence of nifedipine (1 μmol·L-1). B,D:Concentration-response curves were constructed. Results are expressed as x±s,sm-STIM1-WT:n=9-12; sm-STIM1-KO:n=10-14; **P<0.01 vs sm-STIM1-WT+nifedipine group,##P<0.01 vs sm-STIM1-WT+nifedipine+Ca2+-free K-H group.

Fig 6 STIM1 involved in non-L-type calcium channel-mediated vasoconstrictionA:Representative trace of vasoconstriction in mouse aorta with different Ca2+ channel blockers treatment. B:A summary graph of the maximal response to Phe (fast phase) in a 60 mmol·L-1 KCl,nifedipine (1 μmol·L-1) solution. C:A summary graph of slow phase of constant vasoconstriction in a 60 mmol·L-1 KCl,nifedipine (1 μmol·L-1) solution. Results are expressed as sm-STIM1-KO:n=8; **P<0.01 vs sm-STIM1-WT.

Fig 7 Response of aorta to caffeine in sm-STIM1-KO miceA:Representative trace of vasoconstriction induced by caffeine of different concentrations in mouse aorta. B:A summary graph of caffeine-evoked contraction. C:A summary graph of time reaching Emax of vasoconstriction. D:τ of vasoconstriction in sm-STIM1-WT and sm-STIM1-KO mice. Results are expressed as sm-STIM1-KO:n=9; *P<0.05 vs sm-STIM1-WT.

2.5 sm-STIM1-KO小鼠主動脈對咖啡因的反應(yīng)性變化咖啡因引起血管迅速收縮，隨著咖啡因濃度增加，其誘導(dǎo)的收縮增加，最大收縮值統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，各濃度咖啡因誘導(dǎo)的最大收縮值在sm-STIM1-WT和sm-STIM1-KO小鼠主動脈反應(yīng)中沒有差異；但兩組達(dá)峰時(shí)間結(jié)果顯示，10 mmol·L-1和20 mmol·L-1咖啡因誘導(dǎo)的血管收縮達(dá)峰時(shí)間在sm-STIM1-KO小鼠主動脈中均快于sm-STIM1-WT小鼠。同時(shí)，sm-STIM1-KO小鼠主動脈收縮下降速度也明顯快于sm-STIM1-WT小鼠，見Fig 7。

3 討論

本研究我們成功地建立平滑肌特異性STIM1敲除小鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)STIM1敲除小鼠鈣庫操縱性鈣通道介導(dǎo)的收縮完全消失，但是，不同收縮劑(Phe、5-HT和U46619)誘導(dǎo)STIM1敲除小鼠主動脈平滑肌總的收縮無明顯變化，進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)STIM1敲除對非電壓依賴性鈣通道和肌漿網(wǎng)鈣釋放誘導(dǎo)的收縮有明顯抑制作用。

Ca2+是平滑肌細(xì)胞內(nèi)的重要的第二信使，在平滑肌收縮中扮演著重要角色。血管收縮主要受細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化影響，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加時(shí)，Ca2+與鈣調(diào)蛋白結(jié)合，激活肌球蛋白輕鏈激酶，使肌球蛋白輕鏈磷酸化引起平滑肌收縮。Phe、5-HT和U46619通過分別結(jié)合平滑肌細(xì)胞膜上的α1受體、5-HT2A受體和TXA2受體，偶聯(lián)G蛋白信號通路引起血管收縮。一方面直接激活L-型鈣通道開放，引起細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流；另一方面激活磷脂C (PLC)，使磷脂酰肌醇二膦酸( PIP2)水解為三磷酸肌醇(IP3) 和二脂酰甘油( DAG)。DAG可激活蛋白激酶C( PKC)，增加血管平滑肌對鈣離子敏感性；IP3則與肌漿網(wǎng)膜上IP3受體結(jié)合，誘導(dǎo)肌漿網(wǎng)內(nèi)Ca2+釋放，引起血管收縮，當(dāng)肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣庫耗竭，SOCC通道打開，細(xì)胞外Ca2+流入[12]。目前研究證據(jù)表明，在血管平滑肌細(xì)胞中存在SOCC，也已確定Orai1和STIM1是其兩個(gè)關(guān)鍵的組成成分。較多的證據(jù)表明[13-14]，在高血壓和血管損傷再狹窄中發(fā)現(xiàn)STIM1和Orai1表達(dá)明顯上調(diào)，SOCC鈣信號增強(qiáng)，Calcineurin(CaN)/ NFAT通路活化，在參與平滑肌細(xì)胞增殖和遷移等功能中發(fā)揮著重要作用。但是，SOCC在平滑肌細(xì)胞是否參與收縮功能，在不同的器官和疾病模型上仍存在爭議。

Yang等[15]研究發(fā)現(xiàn)，老年大鼠腸系膜小動脈SOCC介導(dǎo)的收縮增強(qiáng)，SOCC相關(guān)蛋白表達(dá)增加，其介導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞鈣內(nèi)流明顯增強(qiáng)，主動脈上SOCC的表達(dá)變化則相反。Giachini等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在自發(fā)性高血壓大鼠主動脈血管平滑肌上 STIM1 蛋白表達(dá)明顯增加，TG誘導(dǎo)的SOCC介導(dǎo)的收縮反應(yīng)也明顯增加；當(dāng)用 STIM1 蛋白抗體阻斷后，其收縮反應(yīng)恢復(fù)正常，提示SOCC介導(dǎo)的鈣內(nèi)流增加，參與誘發(fā)高血壓血管收縮高反應(yīng)。另外研究顯示，在冠狀動脈SOCC介導(dǎo)的血管收縮并不明顯[16]。本研究我們建立平滑肌特異性敲除STIM1小鼠模型，通過蛋白檢測，證明平滑肌特異性STIM1敲除成功，同時(shí)也提示，STIM1介導(dǎo)SOCC參與主動脈收縮反應(yīng)，與之前的研究一致。同時(shí)，在平滑肌特異性敲除STIM1小鼠主動脈上，發(fā)現(xiàn)Phe、5-HT和U46619誘導(dǎo)的收縮量效曲線pEC50和Emax均沒有明顯變化；但是在L-型鈣通道阻斷劑Nifedipine存在情況下，非電壓依賴性鈣通道介導(dǎo)的收縮明顯減少；其次，在無鈣條件下，激動劑誘導(dǎo)的收縮也是明顯降低的。

為進(jìn)一步探究鈣調(diào)控在平滑肌特異性STIM1敲除主動脈血管收縮變化中的機(jī)制，用高鉀溶液(60 mmol·L-1KCl)刺激血管，引起血管收縮，提示L-型鈣通道參與血管收縮。高鉀溶液使細(xì)胞膜去極化，進(jìn)而激活與膜電位有關(guān)的L-型鈣通道，引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加；我們進(jìn)一步探討了平滑肌特異性STIM1敲除對非L-型鈣通道介導(dǎo)的主動脈收縮的變化。在高鉀溶液引起血管最大收縮后，加入硝苯地平完全阻斷了高鉀溶液引起的血管收縮，隨后加入Phe仍可引起血管收縮，此時(shí)血管收縮主要由非L-型鈣通道介導(dǎo)，Phe引起的血管收縮明顯降低，對快相的收縮沒有明顯影響，但是，對持續(xù)相有明顯的抑制作用，進(jìn)一步提示SOCC參與血管收縮。

最后，探討了平滑肌特異性STIM1敲除對小鼠主動脈肌漿網(wǎng)鈣釋放的影響。咖啡因誘導(dǎo)平滑肌收縮主要由細(xì)胞肌漿網(wǎng)內(nèi)釋放的Ca2+介導(dǎo)，結(jié)果表明其收縮幅度變化不明顯，但上升速度和下降的速度均加快，提示，STIM1敲除后平滑肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣釋放和回收功能均受到影響，導(dǎo)致鈣調(diào)控異常。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過對離體平滑肌特異性STIM1敲除小鼠主動脈張力的測定，發(fā)現(xiàn)L-型鈣通道、肌漿網(wǎng)鈣釋放和SOCC均參與小鼠主動脈平滑肌收縮，STIM1參與SOCC和肌漿網(wǎng)鈣釋放介導(dǎo)的血管收縮，這一發(fā)現(xiàn)為血管病變的治療提供新的靶點(diǎn)。另外，可能主動脈存在代償機(jī)制，當(dāng)STIM1介導(dǎo)的SOCC依賴性收縮較少時(shí)，L-型鈣通道依賴的收縮信號通路進(jìn)行代償，維持血管穩(wěn)態(tài)和功能。但本實(shí)驗(yàn)僅對離體小鼠主動脈血管收縮張力進(jìn)行了分析，下一步將在細(xì)胞和分子水平上，以及其它器官血管和疾病模型上，進(jìn)一步探討STIM1參與平滑肌細(xì)胞鈣調(diào)控的病理生理機(jī)制。