三陰性乳腺癌組織中Ki-67表達(dá)與微血管密度關(guān)系

李亮

(駐馬店市中心醫(yī)院 病理科，河南 駐馬店 463000)

近年來，我國乳腺癌發(fā)病率呈上升趨勢[1]，三陰性乳腺癌是乳腺癌的一種特殊亞型。隨著醫(yī)療技術(shù)的提升，乳腺癌的治療技術(shù)取得很大進(jìn)展，但該病易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，其治療仍是臨床急需解決的重點問題。劉焱等[2]研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤需新生血管為其生長增殖提供足夠氧及營養(yǎng)物質(zhì)，因此新生血管在腫瘤細(xì)胞生長增殖過程中起到非常重要的作用。Ki-67 是一種具有蛋白酶性質(zhì)的堿性蛋白質(zhì)，能夠很好反映細(xì)胞的增殖活性[3]。目前，關(guān)于Ki-67 表達(dá)與微血管密度關(guān)系的研究較少見，臨床仍需進(jìn)一步證實。故本文回顧性分析2018年1月至2019年6月期間駐馬店市中心醫(yī)院收治的102 例三陰性乳腺癌患者的臨床資料，探究三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達(dá)與微血管密度的相關(guān)性，旨在為臨床抗血管生成等輔助治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年1月至2019年6月期間本院收治的102 例三陰性乳腺癌患者的臨床資料。所有患者均為女性，年齡29 ～68 歲，平均年齡(47.60±9.04)歲，腫瘤直徑(3.11±0.97) cm，腫瘤分期(TNM)：Ⅰ期10 例，Ⅱ期39 例，Ⅲ期44 例，Ⅳ期9 例。本研究通過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)后執(zhí)行。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合乳腺癌相關(guān)臨床表現(xiàn)，并經(jīng)病理檢查確診為三陰性乳腺癌；②均無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；③未進(jìn)行抗腫瘤治療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腫瘤者；②伴有免疫缺陷、傳染性疾病者；③哺乳期或妊娠期婦女；④心、肝、肺等重要臟器功能不全者；⑤依從性差者。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化染色

所有患者的腫瘤標(biāo)本在免疫組化染色前進(jìn)行10% 福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋、4 μm 連續(xù)切片處理。每批免疫組化染色均設(shè)置陽性、陰性對照，陽性對照采用已知的Ki-67 陽性切片( 深圳華瑞同康生物技術(shù)有限公司)；陰性對照采用磷酸緩沖鹽溶液(PBS，0.01 mol/L，PH7.4) 替代一抗。將切片后的4 μm 腫瘤標(biāo)本置于載玻片上，于60℃恒溫箱中放置2 h，再于37℃恒溫箱中進(jìn)行固片。切片脫蠟水化：首先，使用二甲苯清洗切片兩次，每次10 min；其次，使用100%乙醇清洗切片兩次，每次5 min；然后，使用梯度乙醇(95%、80%) 各沖洗5 min；最后，清水沖洗、蒸餾水清洗3 min。抗原熱修復(fù)：將脫蠟水化后的切片置于壓力鍋中，使抗原修復(fù)液包裹切片，開始噴氣時再計時加熱3 min，而后停止加熱；使用冷水降至室溫后取出切片，使用蒸餾水和PBS各沖洗三次，每次2 min；將過氧化物酶滴加在切片上，于37℃條件下孵育10 min；使用PBS 沖洗三次，每次2 min；在切片組織表面滴加3,3- 二氨基聯(lián)苯顯色，顯微鏡觀察，適時終止顯色反應(yīng)；用蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，封片。

1.2.2 結(jié)果判定

根據(jù)Weidner 計數(shù)法[4]算出微血管密度，在低倍鏡下觀察整個切片，選出三個熱區(qū)(微血管密度最高區(qū))，在高倍鏡下對微血管數(shù)目進(jìn)行計數(shù)，取三個熱區(qū)微血管數(shù)平均值作為微血管密度。Ki-67 在細(xì)胞核中陽性表達(dá)，內(nèi)皮細(xì)胞著色棕黃色為陽性，Ki-67 表達(dá)程度用陽性細(xì)胞比例表示，陽性細(xì)胞超過腫瘤細(xì)胞總數(shù)的10%為陽性，低于10% 為陰性。所有病理切片均由同一組病理科醫(yī)師進(jìn)行閱片。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以±s表示正態(tài)分布的計量資料，并行t檢驗；以例表示計數(shù)資料，并行χ2檢驗或Fisher’s 精確檢驗，Ki-67 表達(dá)與微血管密度關(guān)系采用pearson 相關(guān)分析。P＜0.05 為差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Ki-67 表達(dá)結(jié)果與病理因素關(guān)系

102 例三陰性乳腺癌組織切片中，66 例Ki-67 表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率為64.71%；Ki-67 在Ⅲ～Ⅳ期表達(dá)程度高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，在直徑＞2 cm 腫瘤表達(dá)程度高于直徑≤2 cm 腫瘤(P＜0.05)。見表1。

表1 Ki-67表達(dá)結(jié)果與病理因素關(guān)系

2.2 微血管密度與病理因素關(guān)系

Ⅲ～Ⅳ期腫瘤微血管密度高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，直徑＞2 cm 的腫瘤微血管密度高于直徑≤2 cm 腫瘤(P＜0.05)。見表2。

表2 微血管密度與病理因素關(guān)系（±s ）

表2 微血管密度與病理因素關(guān)系（±s ）

n 微血管密度 t P 因素 年齡0.353 0.725＞50 歲 70 163.24±15.63≤50 歲 32 162.07±15.38腫瘤分期6.433 ＜0.001Ⅰ～Ⅱ期 49 160.82±15.60Ⅲ～Ⅳ期 53 181.07±16.14腫瘤直徑2.907 0.005＞2 cm 57 169.26±14.88≤2 cm 45 160.61±14.98

2.3 三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達(dá)與微血管密度相關(guān)性分析

pearson 相關(guān)分析顯示，三陰性乳腺癌組織中Ki-67表達(dá)與微血管密度呈正相關(guān)(r=0.563，P＜0.001)。

3 討 論

乳腺癌在是臨床較常見的女性惡性疾病，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中排名第二[5]。三陰性乳腺癌是乳腺癌的一種特殊亞型，檢查結(jié)果顯示人表皮生長因子受體(HER-2)、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR) 均為陰性[6]。Ki-67 是一種具有蛋白酶性質(zhì)的核抗原基因，多表達(dá)于增殖細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，在惡性腫瘤中的表達(dá)遠(yuǎn)高于正常組織，因其能夠很好地反映腫瘤增殖活性，成為臨床檢測腫瘤增殖活性的常用指標(biāo)[7-8]。豐富的脈管系統(tǒng)是腫瘤發(fā)生、浸潤及轉(zhuǎn)移的必要條件，沒有新生血管提供足夠營養(yǎng)物質(zhì)，腫瘤僅能生長到1 ～2 cm[9]。微血管密度可直接反映腫瘤組織中新生微血管活躍程度，故微血管密度是評價預(yù)后的一項重要指標(biāo)[10]。

本研究結(jié)果顯示，Ki-67 陽性表達(dá)率為64.71%，Ki-67 在Ⅲ～Ⅳ期表達(dá)程度高于Ⅰ～Ⅱ期，在直徑＞2 cm 腫瘤表達(dá)程度高于直徑≤2 cm 腫瘤；Ⅲ～Ⅳ期腫瘤微血管密度高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，直徑＞2 cm的腫瘤微血管密度高于直徑≤2 cm 腫瘤，提示Ki-67、微血管密度與腫瘤直徑和臨床分期相關(guān)。三陰性乳腺癌病情越嚴(yán)重，Ki-67 表達(dá)程度越高，微血管密度越大。原因可能為腫瘤增長刺激微血管密度增高，以滿足癌組織的營養(yǎng)運(yùn)輸[11]。臨床可根據(jù)Ki-67 及微血管密度診斷和篩選高危患者，為抗血管生成等輔助治療提供依據(jù)，及早制定理治療方案。三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達(dá)與微血管密度呈正相關(guān)，表明隨著腫瘤細(xì)胞增殖活性的增加，腫瘤血管生成數(shù)量也相應(yīng)增加，提示腫瘤細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)，血管越豐富，腫瘤惡化越嚴(yán)重，與文顯梅等[12]人研究結(jié)果相符。

綜上所述，三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達(dá)與微血管密度呈正相關(guān)，可將其作為輔助判斷三陰性乳腺癌浸潤程度及惡性程度的生物學(xué)指標(biāo)，具有一定臨床價值。