注射用右雷佐生與不同輸液溶媒配伍的穩(wěn)定性考察

張亞坤，劉 劍，貢 瑩，陳 瑋，張志清

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050000)

蒽環(huán)類抗癌藥物屬于廣譜抗癌藥，嚴(yán)重且不可逆心臟毒性的不良反應(yīng)使其臨床應(yīng)用受到限制[1]。作為目前唯一獲批的此類抗癌藥物的心臟毒性保護(hù)劑，右雷佐生(dexrazoxane)被國(guó)內(nèi)外多家指南推薦用于蒽環(huán)類藥物心臟毒性的防治[2]。2013版蒽環(huán)類化療藥物心臟毒性防治指南中明確表示，每次給予蒽環(huán)類藥物前均應(yīng)在30 min內(nèi)給予右雷佐生。右雷佐生是雷佐生的右旋體[3]。研究表明，右雷佐生對(duì)改善含蒽環(huán)類藥物治療的患者心臟功能具有積極作用[4-6]。相對(duì)單用蒽環(huán)類藥物，聯(lián)用右雷佐生更具有成本效果優(yōu)勢(shì)[7]。臨床上，右雷佐生應(yīng)與其自帶專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉注射液)配合使用。專用溶媒的包裝容器為25 mL安瓿，瓶體大，瓶頭短小，在實(shí)際臨床工作中，存在不使用專用溶媒或用一支專用溶媒溶解兩支藥物的情況[8]。未使用專用溶媒溶解的右雷佐生穩(wěn)定性如何未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。鑒于此，參考有關(guān)文獻(xiàn)[9-12]，本試驗(yàn)從各組配伍液的外觀、pH值、不溶性微粒數(shù)、相對(duì)百分含量變化等方面考察使用不同溶媒溶解后對(duì)右雷佐生穩(wěn)定性的影響，旨在為臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與試劑

Waters Acquity UPLC系統(tǒng)(包括四元梯度泵、恒溫自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測(cè)器等，美國(guó)Waters公司)；電子分析天平(CPA225D，德國(guó)Sartorius)；微粒分析儀(GWF-8JA，天津天河醫(yī)療儀器有限公司)；微處理pH計(jì)(DP24，HANNA儀器)。右雷佐生對(duì)照品(遼陽(yáng)眾諾化學(xué)工業(yè)有限公司，含量99.48%，批號(hào) 20170401)；注射用右雷佐生(江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，規(guī)格250 mg/支，批號(hào) E1711092)；0.9%氯化鈉注射液(石家莊市第四制藥有限公司，批號(hào) 1712263801)；5%葡萄糖注射液(石家莊市第四制藥有限公司，批號(hào) 1801123803)；磷酸二氫鉀(分析純，天津市永大化學(xué)試劑公司有限公司，批號(hào) YD20170303)，甲醇(色譜純，美國(guó)Fisher，批號(hào)178338)，水為二次蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相：0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇(90∶10)；流速：0.4 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：209 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

2.2含量測(cè)定

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取右雷佐生對(duì)照品21 mg于100 mL量瓶中，用水溶解并定容，得214.8 mg/L的對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 室溫條件下，參照藥品說(shuō)明書(shū)，模擬臨床常用給藥劑量，將注射用右雷佐生分別用專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉溶液)或無(wú)菌水溶解后，再分別用5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液稀釋，混勻，得質(zhì)量濃度為1 g/L的供試品溶液。

2.2.3專屬性考察 取5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉注射液)和右雷佐生對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，右雷佐生保留時(shí)間為1.11 min，右雷佐生峰形良好，分離完全，理論踏板數(shù)在正常范圍內(nèi)(圖1)。

圖1 UPLC色譜圖

2.2.4線性關(guān)系 精密吸取對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，10 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，得系列濃度的右雷佐生溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。以右雷佐生濃度x為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=19 615x+5 137.8(r=0.999 9，n=6)。結(jié)果表明，右雷佐生質(zhì)量濃度在4.30～42.96 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59，21.48，30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定3 d，記錄峰面積，考察精密度。結(jié)果顯示，各濃度溶液的日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)分別為0.91%、0.95%、0.94%，日間RSD分別為1.36%、1.04%、1.31%，表明精密度良好。

2.2.6重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59、21.48、30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，各濃度溶液的RSD分別為0.75%、0.65%、0.94%，表明重復(fù)性良好。

2.2.7回收率試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59、21.48、30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算濃度，所得濃度與實(shí)際濃度之比為回收率。結(jié)果顯示各濃度溶液的回收率分別為101.4%，100%，99.5%，RSD分別為1.11%、0.65%、0.96%，表明回收率良好。

2.3右雷佐生與不同載體溶媒配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.3.1外觀變化 按“2.2.2”中供試品溶液的制備方法制備溶液(n=3)，依次標(biāo)記為NZ，GZ，NF，GF(N：溶媒為0.9%氯化鈉注射液，G：溶媒為5%葡萄糖注射液，Z：專用溶媒溶解，F(xiàn)：非專用溶媒溶解)，在25 ℃下放置，并于0，2，4，6，8，12，24 h用目測(cè)法觀察配伍溶液的外觀變化，各組配伍溶液均為透明溶液，肉眼未觀察到絮狀物、渾濁或沉淀產(chǎn)生，24 h內(nèi)顏色沒(méi)有改變。

2.3.2pH值變化 取“2.3.1”項(xiàng)下各配伍溶液，于0，2，4，6，8，12，24 h用pH計(jì)測(cè)定其pH值。結(jié)果顯示RSD值依次為0.76%、0.78%、0.54%、1.14%，結(jié)果變化趨勢(shì)見(jiàn)圖2。

圖2 注射用右雷佐生配伍后溶液pH值變化(n=3)

2.3.3相對(duì)百分含量變化 在“2.3.1”操作基礎(chǔ)上，各組供試品溶液于0，2，4，6，8，12，24 h采用“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析測(cè)定。將0時(shí)的右雷佐生質(zhì)量濃度計(jì)為100%，計(jì)算出其余各時(shí)間點(diǎn)的藥物相對(duì)百分含量。結(jié)果顯示，前6 h內(nèi)專用溶媒組右雷佐生的相對(duì)百分含量為100.00%～96.33%，RSD<2%，非專用溶媒組右雷佐生的相對(duì)百分含量為100.00%～87.80%，RSD<2%。6 h以后各配伍液的相對(duì)百分含量為100.00%～74.28%，RSD>6%，表明在前6 h內(nèi)，使用專用溶媒溶解的配伍液含量無(wú)明顯變化(≥95%初始濃度)，而非專用溶媒組含量發(fā)生明顯變化(<95%初始濃度)；6 h以后，各配伍液的含量顯著下降。結(jié)果變化趨勢(shì)見(jiàn)圖3。

圖3 注射用右雷佐生配伍后含量變化(n=3)

2.3.4不溶性微粒數(shù)變化 在“2.3.1”操作基礎(chǔ)上，于0，2，4，6，8，12，24 h以微粒分析儀測(cè)定供試品溶液中粒徑≥10 μm以及≥25 μm的微粒數(shù)。結(jié)果顯示，使用專用溶媒溶解的配伍液，其不溶性微粒數(shù)均在規(guī)定范圍內(nèi)。非專用溶媒組，右雷佐生擴(kuò)容至5%葡萄糖注射液中，粒徑≥10 μm的不溶性微粒數(shù)超出了規(guī)定值。專用溶媒組和非專用溶媒組配伍液粒徑≥25 μm的不溶性微粒數(shù)均在規(guī)定值范圍內(nèi)。結(jié)果變化見(jiàn)圖4，5。

圖4 注射用右雷佐生配伍后≥10 μm微粒數(shù)變化(n=3)

圖5 注射用右雷佐生配伍后≥25 μm微粒數(shù)變化(n=3)

3 討 論

3.1含量測(cè)定方法的建立 右雷佐生屬于雙氧代二嗪類化合物，本試驗(yàn)采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，該色譜柱可耐受高比例水，適合分析水溶性物質(zhì)。參考右雷佐生含量HPLC方法[13-14]，本實(shí)驗(yàn)使用超高效液相色譜儀，調(diào)整流動(dòng)相為0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇(90:10，V/V)；流速0.4 mL/min，進(jìn)樣量2 μL。在上述色譜條件下，右雷佐生保留時(shí)間為1.11 min，樣品分析時(shí)長(zhǎng)為3 min，基線平穩(wěn)，不受其他物質(zhì)干擾，分離度良好，理論踏板數(shù)在正常范圍內(nèi)。故該方法可用于右雷佐生含量的快速測(cè)定。

3.2專用/非專用溶媒溶解后不同配伍液的穩(wěn)定性 靜脈輸液的pH值應(yīng)接近體液的酸堿度，一般控制在4～9范圍內(nèi)。pH值在此范圍外的溶液，會(huì)造成血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷導(dǎo)致疼痛，并誘發(fā)血栓性靜脈炎和血小板聚集，且靜脈炎的嚴(yán)重程度與輸液的pH直接相關(guān)，pH值越低，靜脈炎會(huì)越嚴(yán)重[15]。本研究結(jié)果顯示，使用非專用溶媒組溶解的右雷佐生配伍液pH值為3.1左右；使用專用溶媒溶解的右雷佐生配伍液的pH值保持在4.7左右，可以在一定程度上減輕輸液時(shí)對(duì)患者的刺激性和潛在危害。專用溶媒為0.167 mol/L乳酸鈉注射液,可起到調(diào)節(jié)配伍液pH值的作用。

藥物含量降低會(huì)導(dǎo)致藥物療效降低，影響藥物治療的有效性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用專用溶媒溶解的右雷佐生溶液的藥物含量下降緩慢，且在配制6 h內(nèi)無(wú)明顯變化，而非專用溶媒組含量下降較快；各組配伍液藥物含量在配制6 h后均發(fā)生明顯下降(以含量是否≥95%初始濃度為判定依據(jù)[16])。

靜脈輸液不溶性微粒是指不溶于輸液且肉眼不可見(jiàn)的非代謝性顆粒雜質(zhì)(粒徑<50 μm)，進(jìn)入人體將對(duì)微循環(huán)有不同程度的影響。研究發(fā)現(xiàn)，不溶性微粒能夠引起熱源反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、肉芽腫及血管栓塞，嚴(yán)重的甚至能引起癌癥[17]。據(jù)2015版《中國(guó)藥典》，除另有規(guī)定外，裝量>100 mL的靜脈注射液，粒徑≥10 μm的不溶性微粒數(shù)不得超過(guò)25粒/mL，≥25 μm的不溶性微粒數(shù)不得超過(guò)3粒/mL。上述試驗(yàn)結(jié)果顯示，使用專用溶媒溶解后稀釋的配伍液，以及使用非專用溶媒+氯化鈉注射液稀釋的配伍液不溶性微粒數(shù)均符合規(guī)定，而使用非專用溶媒+葡萄糖注射液的配伍液粒徑≥10 μm的微粒數(shù)超出規(guī)定值。初步認(rèn)為這與右雷佐生在5%葡萄糖注射液中溶解性較差，加專用溶媒可改善其溶解性能有關(guān)。

綜上所述，使用專用溶媒溶解的注射用右雷佐生溶液在6 h內(nèi)的含量、不溶性微粒數(shù)和pH值均在正常范圍內(nèi)，穩(wěn)定性優(yōu)于非專用溶媒組。建議，為保證藥物治療的安全性和有效性，臨床在使用注射用右雷佐生時(shí)，應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求配制使用該藥并在溶解后6 h內(nèi)輸注完畢。