體外受精-胚胎移植中男方少弱精子癥與胚胎質量及妊娠結局的相關研究*

蘇夢馳 王華偉 饒 猛 龍艷喜 徐玉庭 唐 莉

昆明醫科大學第一附屬醫院生殖遺傳科（云南昆明 650000）

據WHO統計，目前全世界約有10～15%的育齡夫婦患有不孕不育癥[1]。夫婦同居未采取任何避孕措施1年以上未孕稱為不孕不育癥，其中由于男方因素造成女方不孕稱為男性不育癥。目前，男方因素已經占到夫妻不孕不育的50%[2]。精子質量是體現男性不育癥的最直觀項目。男性不育癥檢查中，常以精液常規分析作為主要參考指標。主要包含精液量、精子濃度、精子活力、液化時間、精液pH值、精子形態學分析等。其中精子濃度下降為少精子癥，精子活力降低為弱精子癥。研究表明，少精子癥和弱精子癥嚴重影響男性的生育以及體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）成功率[3,4,5]。本研究選取在本生殖中心進行IVF助孕的693對夫婦共計693個取卵周期和2893枚胚胎的臨床資料和實驗室資料作為研究對象，研究少精子癥、弱精子癥對胚胎質量及體外受精-胚胎移植者妊娠結局的影響。

資料與方法

一、研究對象

收集2016年至2019年在本生殖中心行體外受精-胚胎移植助孕的693對不孕癥夫婦，共計693個取卵周期，2893枚胚胎的臨床及實驗室數據，以男方精液檢查及女方IVF相關檢查均正常的不孕不育夫婦患者為對照。根據精子質量分為兩組，凡是精子濃度或活力有一項異常的歸入少弱精子癥組，均正常者歸入正常組。納入標準：①男方精液為手淫取精，新鮮精液，容量≥2.0mL，pH正常，液化時間正常，禁欲天數為2～7天；②均為IVF助孕；③女方卵巢功能正常，造成不孕的因素為：輸卵管梗阻、子宮畸形、子宮內膜異位癥、子宮腺肌癥、男性因素（少精子癥、弱精子癥、畸形精子癥）。排除標準：①男方為無精子癥；②ICSI助孕；③女方患有卵巢功能不良、卵巢功能早衰及其他影響卵子質量的疾病；④女方患有糖尿病、高血壓等基礎性疾病；⑤男方采用凍融精子；⑥夫婦任何一方接觸有毒有害物質；⑦女方取卵時獲卵無成熟卵子。

二、研究方法

（一）卵巢刺激

使用的卵巢刺激方案有黃體期長方案、卵泡期長方案、拮抗劑方案、微刺激方案、自然周期方案。

（二）精液采集

男方精液均為手淫取精，新鮮精液，容量≥2.0mL，pH正常，液化時間正常，禁欲天數為2～7天。

（三）分組

按照第5版《WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊》，以精液的密度、前向運動精子指標分成兩組，凡是有一項異常為異常組，均正常為正常組，設置正常組為對照組。

（四）受精、胚胎質量評估

IVF后16～18小時觀察受精情況，觀察到雙原核和兩個極體則判斷為正常受精。在體外繼續培養48小時，于取卵后第3天進行卵裂期胚胎評分，胚胎細胞數目達到8～9個，卵裂球大小均勻、無多核現象，碎片＜10%，評分II級以上，或達第5天的胚胎評分3BB以上者為優質胚胎。

（五）胚胎移植

僅選用新鮮周期移植的數據納入比較。新鮮周期移植：取卵后第3天選擇優質卵裂期胚胎移植或第5天選擇優質囊胚移植。

（六）妊娠確定

移植術后2周查血β-hCG陽性者為著床成功，再2周后查B超見孕囊者為臨床妊娠。B超下所見總孕囊數/移植胚胎總數×100%為胚胎種植率。臨床妊娠周期數/胚胎移植周期數×100%為臨床妊娠率。

三、統計學方法

采用SPSS 25.0統計軟件處理數據。計數資料以均數±標準差（）表示，行兩獨立樣本t檢驗，計量資料以率（%）表示，行卡方檢驗和Fisher確切概率法進行統計，以P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

一、一般資料

本研究共納入693例IVF周期，其中正常組607例，少弱精子癥組86例。

正常組男方平均年齡為（36.17±5.86）歲，少弱精子癥組男方平均年齡為（36.55±5.65）歲，兩組年齡差異無統計學意義（P＞0.05）。正常組女方平均年齡為（34.25±5.14）歲，少弱精子癥組女方平均年齡為（34.40±5.55）歲，兩組年齡差異無統計學意義（P＞0.05）。正常組獲卵總數平均數為（9.80±6.82），少弱精子癥組獲卵總數平均數為（9.37±6.63，兩組無統計學差異（P＞0.05）。見表1。

正常組與少弱精子癥組在禁欲天數、液化時間、精液量均無統計學差異（P＞0.05）。正常組精子密度平均數為（45.18±19.05）百萬/mL，少弱精子癥組平均數為（27.21±17.61）百萬/mL，差異具有統計學意義（P＜0.05）。正常組前向運動精子平均數為（50.28±10.89）%，少弱精子癥組前向運動精子平均數為（32.71±13.40）%，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 基礎資料比較（）

表1 基礎資料比較（）

表2 精液基礎資料比較（）

表2 精液基礎資料比較（）

二、受精、胚胎情況

正常組使用卵子總數為5921，正常受精率為70.19%，少弱精子癥組使用卵子數為791，正常受精率為68.27%，正常組正常與少弱精子癥組受精率與無統計學差異（P＜0.05），見表3。

表3 使用卵子數、正常受精數、正常受精率比較

正常組優質胚胎率為79.96%，少弱精子癥組優質胚胎率為79.61%，差異無統計學意義（P＞0.05）。正常組囊胚形成率為51.77%，少弱精子癥組囊胚形成率為58.56%，差異有統計學意義（P＜0.05），見表4。

表4 優質胚胎率與囊胚形成率比較[（），%]

表4 優質胚胎率與囊胚形成率比較[（），%]

三、妊娠結局

正常組移植胚胎數為390，胚胎著床數為94，少弱精子癥組移植胚胎數為38，胚胎著床數為11，正常組胚胎著床率為24.10%，少弱精子癥組胚胎著床率為28.95%，差異無統計學意義（P＞0.05）；正常組臨床妊娠率為35.02%，少弱精子癥組臨床妊娠率為30.43%，差異無統計學意義（P＞0.05），見表5。

表5 正常組與少弱精子癥組妊娠結局的比較

討論

文獻顯示，近來全球男性精子質量正在逐年下降[6]，數據表明，我國大部分地區男性精子質量也在逐漸下降[7，8，9]。影響男性精子質量的因素很多，常見病因有遺傳因素和先天性異常，如染色體或基因異常、生殖器官先天性異常、內分泌因素、年齡因素、代謝異常和免疫因素、生殖系統感染、環境及理化因素等等[6，10，11，12，13]。

目前，關于影響精液質量的因素研究越來越多。有研究發現，男性精液質量亦隨著年齡增加而逐年下降，其精子活力在40歲以后下降明顯[14]。Luque,Em等研究了體重指數（BMI）和人類精子質量的關系，發現體重不足（BMI＜20）和病態肥胖（BMI≥40）的男性人群精子濃度、精子總量和前向運動精子顯著低于正常體重（BMI 20～24.9）、超重（BMI 25～29.9）和肥胖（BMI 30～39.9）的男性人群，且病態肥胖人群患少精子癥和畸形精子癥的風險較其他人群增加[15]。Sharma，R等發現吸煙影響精子數量和精子活力，中重度吸煙者的精子質量下降尤為明顯[16]。一項在小鼠體外受精模型的研究發現，醫源性輸精管損傷也可能有損于精子的產生，導致不育[17]。

關于精液與胚胎質量的關系也逐漸受到關注。有研究發現正常精子形態率與優質囊胚形成率呈正相關[18]。還有研究表明不育男性精液質量及體外受精結局與男性體脂率相關，體脂率過高或過低均會影響精液質量、受精率及優質胚胎率[19]。動物研究在雄性小鼠模型中證實長期高脂飲食將降低雄鼠精子質量和生育能力[20]。精子DNA碎片指數升高也將導致精子前向活動力降低，從而降低優質胚胎率、囊胚形成率，影響妊娠結局[21]。有臨床研究表明精索靜脈曲張通過增加男性不育患者的精子DNA碎片率而改變精子的活力和形態，從而降低體外受精率和卵裂率，影響受精結局[22]。

本研究顯示，在IVF助孕中男性少弱精子癥組的囊胚形成率高于正常精液組，然而，在正常受精率、優質胚胎率、胚胎種植率和臨床妊娠率上，男性正常精液組與少弱精子癥組無統計學差異。本研究中，樣本均來自于IVF夫婦，研究結果也許存在偏倚。且目前監測胚胎質量的方法為根據形態學判斷，研究結果或有偏差。在遠期研究中，進行前瞻性研究結果將更加準確。需要更多的臨床研究來發現男性少弱精子癥與妊娠結局的相關關系。

綜上，在IVF助孕中，男性精子的質量對胚胎質量和妊娠結局的影響并不明顯。隨著不孕不育癥發病率的升高，關于其影響因素的研究逐漸增多，其中以女性不孕癥的研究更為多見。而關于男性生育力、適育年齡的分析，目前卻研究甚少。因此，關于男性因素影響胚胎質量及妊娠結局的研究應當受到重視，制定男性生育年齡標準也十分重要。