正交實驗法優選醋南五味子的工藝研究

種 振，高 波，羅 川，胡 雨

(1 安徽華潤金蟾藥業股份有限公司，安徽 淮北 235000；2 華潤三九醫藥股份有限公司，廣東 深圳 518000)

南五味子為木蘭科植物華中五味子的干燥成熟果實。加工方法為采摘，曬干，除去果梗和雜質[1]。其主要化學成分有木脂素及揮發油等[2]。臨床上多用于久嗽虛喘，夢遺滑精，自汗盜汗，津傷口渴，心悸失眠[1]。其中，五味子酯甲是五味子木脂素的主要成分之一，具有較強的抗氧化活性[3-4]。南五味子醋炙以后，溫補功效增強，常采用加入米醋拌勻潤透后蒸制加工而成[5]。《中華人民共和國藥典》2015版對南五味子醋制加工炮制工藝收載比較籠統，概括性較強，沒有確切的執行參數。目前，關于醋南五味子工藝研究的文獻[6-7]，沒有對南五味子醋制加工后成品的性狀評價。而本研究以南五味子醋制成品的性狀和五味子酯甲為雙指標，采用正交實驗設計，優選南五味子醋制加工工藝，以期為南五味子醋制加工的產量化及規模化生產提供技術支持[8]。

1 儀器和試劑

1.1 儀 器

高效液相Ultimate 3000色譜系統，包括自動進樣器、色譜柱溫箱、紫外檢測器、色譜管理系統；C18色譜柱、超聲清洗儀、中藥粉碎機、XP26型百萬分之一電子天平。

1.2 試 劑

五味子酯甲對照品、色譜乙腈、水為娃哈哈純凈水、南五味子飲片(批號：18042511)；本研究用的南五味子飲片購自亳州市某飲片廠，經鑒定是：木蘭科植物華中五味子的干燥成熟果實[1,8]。

2 方 法

2.1 指標性成分含量測定

2.1.1 色譜條件及系統適用性

C18色譜柱，流動相：四氫呋喃-水(38:62)，檢測波長：254 nm；流速為 1.0 mL/min，柱溫：25 ℃。理論板數按五味子酯甲峰計算應≥3000，色譜峰對稱性良好[1,8]。見圖1。

圖1 南五味子HPLCFig.1 HPLC of vinegar prepared South Wuweizi

2.1.2 對照品溶液的制備

取對照品五味子酯甲適量，參照《中國藥典》(2015版)南五味子藥材標準含量測定項對照品溶液的制備方法制備對照品溶液，即得[1,8]。

2.1.3 供試品溶液的制備

參照《中國藥典》(2015版)南五味子藥材標準含量測定項供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，即可[1,9]。

2.2 正交實驗

2.2.1 醋南五味子炮制工藝的正交實驗設計

基于南五味子醋制加工文獻檢索綜述[5-10]及單因素實驗考察，采用L9(34) 正交實驗，考察醋的用量(A)、蒸制加工時間(B)、悶潤透心時間(C) 等因素，以南五味子醋制品性狀和及南五味子有效成分五味子酯甲為雙評價指標，優選南五味子醋制加工的炮制工藝。因素水平見表1。

表1 正交實驗因素水平表Table 1 Table of factors and levels of orthogonal test

2.2.2 飲片性狀的評分標準

《安徽省中藥飲片炮制規范》(2005版)及《中華人民共和國藥典》(2015版)關于南五味子醋制加工品的性狀收載為：南五味子醋制品表面棕黑色，油潤。微有醋香氣[1,11-12]。本實驗按照正交實驗加工制備南五味子醋制品，參照藥典及炮制規范對南五味子醋制品進行性狀評分，南五味子醋制加工品具體性狀及評分詳見表2[8]。

2.2.3 綜合評分標準

為了更客觀地評價南五味子醋制品的質量，本研究以南五味子醋制品外觀性狀和五味子酯甲為評價指標，用綜合評分法來評定實驗[12-13]。五味子酯甲是《中華人民共和國藥典》(2015版)規定的指標性成分，故擬定該指標權重系數為0.7；飲片外觀性狀是中藥飲片的傳統質量評價指標，是評價飲片質量優劣的關鍵性因素之一[13-14]，故將其作為評價指標，并擬定其權重系數為0.3。綜合的評分=飲片的性狀評分+五味子酯甲含量評分[8,12-13]。實驗結果及直觀分析結果見表2，方差分析結果見表3。

表2 南五味子醋制工藝的正交實驗結果(n=3)Table 2 The results of orthogonal test of vinegar prepared South Wuweizi(n=3)

由直觀分析的結果可知，各個因素對南五味子醋制加工工藝的影響順序為 B>C>A。由方差分析可知蒸制加工時間(B因素)對南五味子醋制加工工藝有顯著性影響[7]，醋的用量及悶潤透心時間(A及C 因素)則對南五味子醋制加工工藝無顯著性影響。故綜合分析可知南五味子醋制的最佳炮制工藝為 A1B1C2，即取凈南五味子適量，加入南五味子量20%的米醋拌勻，悶潤1 h至透心，放入蒸藥鍋中蒸制加工7 h，取出，在60 ℃條件下干燥[7-8]。

表3 綜合評分方差分析Table 3 Variance analysis of comprehensive score

2.3 驗證性實驗

取凈南五味子樣品適量，依照優化出的最佳工藝平行制備3 份樣品，觀察南五味子醋制品性狀及測定成品中五味子酯甲含量，具體實驗結果見表4。

表4 驗證結果Table 4 The results of verification test

結果表明，采用該優選工藝炮制的樣品性狀及五味子酯甲含量均較穩定，表明該加工工藝較穩定。即南五味子醋制最佳工藝為：取凈南五味子適量，加入南五味子量20%的米醋拌勻，悶潤1 h至透心，放入蒸藥鍋中蒸制加工7 h，取出，在60 ℃條件下干燥[8]。

3 討 論

南五味子醋制加工品蒸至外表面呈棕黑色，稍有光澤，油潤，微有醋香氣時，成品質量較優，這也與南五味子醋制加工成品傳統外觀性狀及現行版藥典描述相一致[8]。表明外觀性狀是中藥飲片的關鍵評價指標之一，是傳統意義上飲片內在化學成分及化學成分集群不能替代的評價標準[14]。

南五味子醋制加工文獻[5-7]優選的工藝各不相同，本文以多指標代替單一指標來考察醋南五味子的炮制工藝，其結果更具科學性和客觀性。本實驗以外觀性狀及五味子酯甲為綜合評價指標，采用正交實驗法優選出的醋南五味子的加工炮制工藝穩定，重現性良好，可為醋南五味子的工業化生產提供一定的數據支持。將來，還應把化學成分與藥效學結合一起優選加工炮制工藝，以期所優選工藝更客觀實用。