白刺14-3-3基因家族的鑒定及表達分析

易 丹， 王 博， 段慧榮， 李 毅*， 王麗蓉

(1.甘肅農業大學林學院， 甘肅 蘭州 730070； 2.青海民族大學， 青海 西寧 810000； 3.中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所， 甘肅 蘭州 730050)

1967年，Moore和Perez等從牛腦組織中分離鑒定出一種可溶異源二聚體蛋白，根據遷移率命名為14-3-3蛋白[1]。該蛋白是一個結構高度保守的多功能蛋白家族[2]，普遍存在于真核生物中，并且是能夠識別蛋白質磷酸化的家族之一[3]。目前為止，14-3-3基因家族在擬南芥(Arabidopsisthaliana)、水稻(Oryzasativa)、玉米(Zeamays)中被廣泛研究并發現其在植物的生長發育、信號傳導、抵御脅迫等方面發揮著重要作用[4]。14-3-3蛋白是蛋白質之間相互作用的紐帶，它可以和信號蛋白直接作用，從而影響這些配體分子在亞細胞中的定位，14-3-3蛋白與H+-ATPase酶結合，可以增強其活性，還可以通過與激素信號途徑中的關鍵分子相互作用，發揮其調節功能，以此來響應非生物脅迫[5]。由于該家族蛋白通常在植物中可形成同源二聚體或異源二聚體，并且是組成G-box蛋白復合體的一部分，因此又被稱為G-box factor 14-3-3 homologs(GF14)或G-box regulatory factor or general regulatory factor(GRF)[6-7]。

隨著模式植物和多種作物基因組測序的完成，目前已經從擬南芥[8]、蠶豆(Viciafaba)[9]、水稻[10]、煙草(Nicotianatabacum)[11]、大麥(Hordeumvulgare)[12]、大豆(Glycinemax)[13]、番茄(Solanumlycopersicum)[14]、棉花(Gossypiumspp)[15]中分別鑒定出15，4，8，17，5，18，12，25個14-3-3基因家族成員，且這些基因在不同的組織器官、激素及逆境脅迫下呈現出不同的表達規律，這些研究結果對進一步深入探究14-3-3基因家族的功能具有重要意義。

白刺(Nitrariatangutorum)為蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺屬(Nitraria)的超旱生灌木，主要分布于我國陜西北部、內蒙古西部、寧夏、甘肅河西、青海地區。白刺極耐鹽堿和干旱，并且根系發達，有很強的防風固沙能力，是西北荒漠區優良的生態樹種[16]。同時它還兼有營養、藥用、飼用等價值，具有很高的經濟開發潛力。前人在白刺的營養、藥用成分、生理生態學等方面進行了諸多研究[17-23]，并取得一定成果。在分子生物學方面也有少量的研究報道，且主要集中在相關抗逆基因的克隆及表達分析等方面[24-26]。而有關白刺14-3-3基因家族鑒定及分析的研究尚未見報道。為此，本研究基于白刺轉錄組數據，對白刺14-3-3基因家族成員進行鑒定，并對其理化性質、亞細胞定位、保守結構域、系統進化關系及其基因在不同濃度鹽、干旱處理下的組織器官表達進行分析，以期為揭示白刺14-3-3基因家族的功能奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

2019年8月23號于青海省諾木洪農場采集新鮮白刺果實，并經過處理獲得干凈的白刺種子。培養基質為黃河河沙(清洗、高溫消毒后)。2019年10月9日將種子種入花盆(花盆口徑：7 cm×7 cm，底徑：5 cm×5 cm)，置于培養間培養，培養條件為：白天光照12 h，夜晚光照6 h，白天溫度26℃，夜晚溫度22℃，相對濕度60%。每3 d向花盆底部托盤中灌入蒸餾水至盆內沙子完全浸濕。隨機選取生長良好且長勢一致的白刺幼苗進行脅迫處理。

1.2 方法

1.2.1不同脅迫處理 2019年12月24日將植株移至1/2 Hoagland(霍格蘭)溶液中，培養條件同上，水中全天充氧。適應培養3 d后，將材料移至處理溶液中：設定低濃度聚乙二醇(Polyethylene glycol，PEG)(10%)、高濃度PEG(30%)兩個濃度，對白刺幼苗進行干旱脅迫處理，并設立對照組(正常培養條件，無處理)，在處理后2，12，24 h取樣。另外設定低濃度NaCl(200 mM)和高濃度NaCl(450 mM)兩個濃度，對白刺幼苗進行鹽脅迫處理，并設立對照組(正常培養條件，無處理)，在處理后2，12，24，48 h取樣。每處理每時間點9株苗，每3株作為一個生物學重復，分別取根、莖、葉后迅速放入液氮中，后放入-80℃冰箱保存待用。

1.2.2白刺14-3-3基因家族鑒定 在本地數據庫中，我們利用注釋庫篩選的方法[27]得到了28條14-3-3基因家族相關序列，除去重復序列后，利用DNAMAN(v6.0)獲取氨基酸序列后放入Pfam(http://pfam.xfam.org/)在線軟件和NCBI的CDD(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd)數據庫中進行保守結構域分析，通過與兩個數據庫的比對，把不含有14-3-3蛋白保守結構域的序列剔除，最終得到的序列推測為白刺14-3-3蛋白序列，并利用白刺轉錄組數據庫中的CDS庫、NCBI的Blast(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=tblastn&PAGE_TYPE=BlastSearch &BLAST_SPEC=&LINK_LOC=blasttab& LAST_PAGE=blastp)和ORF Finder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)在線軟件共同預測白刺14-3-3蛋白序列CDS的完整性，對CDS不完整的序列不進行蛋白理化性質分析。

1.2.3蛋白理化性質分析 利用ExPASy在線網站的ProtParam(https://web.expasy.org/protparam/)分析已經鑒定出來的白刺14-3-3蛋白的(具有完整CDS)氨基酸數目、分子量、等電點和平均親水性。通過CELLO(http://cello.life.nctu.edu.tw/)在線軟件對該家族基因進行亞細胞定位預測。利用SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)和SWISS-MODEL(https://swissmodel.expasy.org/interactive)在線軟件分別預測蛋白的二級與三級結構。

1.2.4多序列比對及保守結構域的分析 利用GeneDoc軟件繪制白刺14-3-3蛋白多序列比對圖并標注高度保守的結構區域。通過在線軟件MEME(http://meme-suite.org/tools/meme)進行motif預測分析，經驗證基序最多值設置為7，其余為默認值。通過TBtools工具對導出的MEME文本結果完成保守基序圖的繪制與分析。

1.2.5進化樹的構建 首先利用ClustalW(http://www.clustal.org/)軟件將擬南芥和白刺14-3-3蛋白序列進行多序列比對，再利用Mega 7.0軟件的鄰接(Neighbor-joining)法，構建兩種進化樹，一種由擬南芥和白刺14-3-3家族成員共同構成，另外一種由白刺14-3-3家族成員單獨構成，設置bootstrap值為1 000，其他參數默認，進一步利用在線軟件iTOL(https://itol.embl.de/)美化進化樹，依據進化樹分枝分組。

1.2.6熒光定量PCR 總RNA用RNAprep Pure Plant Kit RNAprep Pure植物總RNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司，貨號：DP432，產地：北京)按照試劑盒說明在低溫無菌條件下提取RNA。用PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)反轉錄試劑盒(TaKaRa北京寶生物公司，貨號：RR047A，產地：北京)反轉錄成cDNA，反應體系為(20 μL)：Master Mix 10 μL，5 x PrimeScript Buffer 2 (for Real Time) 4 μL，PrimeScript RT Enzyme Mix I 1 μL，RT Primer Mix 1 μL，RNase Free dH2O 4 μL，整個過程置于冰上操作。反轉錄程序為：37℃ 15 min，85℃ 5 s，4℃保存。

qRT-PCR用TB Green Premix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)試劑盒(TaKaRa北京寶生物公司，貨號：RR820A，產地：北京)。使用Thermo熒光定量PCR儀(美國，型號：Step One Plus)檢測cDNA樣品的CT值。首先將cDNA稀釋10倍備用，qRT-PCR反應體系(20 μL)：TB Green Premix Ex TaqⅡ(Tli RNaseH Plus) (2X) 10 μL，cDNA模板2.5 μL，正反向引物(10 μmol·L-1)各0.8 μL，ddH2O 5.5 μL，ROX 0.4 μL。qRT-PCR反應程序：95℃預變性2 min，95℃變性10 s，60℃復性30 s，72℃延伸20 s，40個循環之后采集熒光。設置3個技術重復。引物根據鑒定獲得的核苷酸序列，在家族成員非重疊區域，利用Primer在線軟件(http://www.primer3plus.com/cgi-bin/dev/primer3 plus.cgi)設計。內參基因采用EF1α基因。特異性引物序列如表1所示。反應結束后分析各基因的溶解曲線及CT值。挑選正常條件、PEG 30% 2 h和NaCl 450 mM 24 h的白刺幼苗對這10個成員做qRT-PCR分析預試驗，對表達量相對較高的成員進行后續試驗分析。使用公式2-ΔΔCT計算基因的相對表達量[28]。

表1 熒光定量PCR引物序列Table 1 The primers used in qPCR

1.2.7數據分析 利用SPSS 21.0進行統計學分析，采用單因素方差(one-way ANOVA)的統計方法對白刺在不同處理下14-3-3基因的相對表達量進行顯著性差異分析(P<0.05)，利用Origin 9.0繪制柱形圖并注明各組間的差異顯著性。

2 結果與分析

2.1 白刺14-3-3基因家族的鑒定

從轉錄組數據庫中共得到了28條14-3-3基因家族的轉錄組序列，剔除重復冗余的序列，進一步利用Pfam和CDD結構域預測軟件初步篩選出10條含有14-3-3蛋白保守結構域的序列。命名規則如下：此基因家族統稱為“GRF”家族，取白刺拉丁學名的縮寫(Nt)作為前綴，編號參考白刺和擬南芥14-3-3成員的同源關系，同源性分析通過NCBI的Blastp數據庫檢索比對來完成。根據與擬南芥的同源性比對，將10條候選序列按“NtGRF+編號”進行命名。同源性高的命名為NtGRF+編號(編號與擬南芥對應)，與擬南芥同源性較高但與其它成員有差別的命名為NtGRF+編號+like(表2、表3)，對白刺14-3-3成員CDS的預測結果顯示，除NtGRF12不含有完整的CDS，其他成員均含有完整的CDS(表2)。

表2 白刺14-3-3基因家族基本信息Table 2 Basic information of 14-3-3 gene family in N. tangutorum

表3 白刺14-3-3基因家族成員理化性質Table 3 The physic-chemical characters of 14-3-3 gene family in N. tangutorum

2.2 理化性質

從表3中可知，9個白刺14-3-3基因所對應的編碼氨基酸的數目為212 ～ 297個，編碼蛋白理論分子量范圍是24.06 ～ 33.51 kDa，蛋白理論等電點為4.73～6.14，平均大小為5.17，呈酸性。蛋白的不穩定系數除NtGRF9小于40，為穩定蛋白，其余均大于40，為不穩定蛋白。蛋白的平均親水系數小于零，證明這9個蛋白均為親水性蛋白，亞細胞定位預測顯示這9個成員除NtGRF11like定位于質膜，其他成員均定位在細胞質。

白刺14-3-3蛋白二級結構預測結果顯示(表4)，9個蛋白的組成均有α螺旋、β轉角、無規卷曲和延伸鏈，α螺旋最多，β轉角最少。SWISS-MODEL結果顯示該家族蛋白的三級結構高度保守，主要由α螺旋構成(圖1)。

2.3 14-3-3基因家族多序列比對及保守基序分析

對10個白刺14-3-3蛋白序列進行多重序列比對，結果顯示它們的一致性是63.78%，中間區域的位置高度相似，且包含14-3-3基因家族的保守結構域(L G L A L N F S V F Y Y E I)，部分序列絕對保守(圖2中紅色方框)，N-端和C-端變異程度大。

對白刺14-3-3蛋白的保守基序進行分析，將預測的最大值設置為20，發現只出現了7個不同的motif，再返回上一步將最大預測值設置為7，以此保證motif的完整性(圖3)。如圖4(A)所示，被分析的成員中共包含7個保守基序，不同的成員所含基序的數量和種類存在一定的差異，但相同分枝上的成員有相似的基序組合。10個成員皆包含motif1，motif2，motif5和motif6，僅NtGRF3和NtGRF3 like-3包含motif7，除NtGRF2like-2和NtGRF 3like-3以外，其余成員均含有motif4，motif1，motif2，motif5，motif6在這個10個成員中均出現10次，motif3出現9次，motif4出現8次，motif7出現2次。出現頻率較高的motif往往在該基因中具有重要的作用[29]。

表4 白刺14-3-3蛋白的二級結構預測Table 4 Prediction of the secondary structure of N. tangutorum 14-3-3 protein

圖1 白刺14-3-3蛋白的三級結構預測Fig.1 Prediction of the tertiary structure of N. tangutorum 14-3-3 protein

圖2 白刺14-3-3蛋白多序列比對Fig.2 Multiple sequences alignment of N. tangutorum 14-3-3 protein

圖3 白刺14-3-3蛋白保守基序Fig.3 Conserved motifs of N. tangutorum 14-3-3 protein

圖4 白刺14-3-3蛋白系統進化關系(A)及保守基序分析(B)Fig.4 Phylogenetic relationship of protein 14-3-3 in N. tangutorum (A) and conserved motif analysis (B)

2.4 14-3-3基因家族進化樹分析

圖4(A)是由白刺14-3-3蛋白序列建立的系統發育樹，從圖中可以看出白刺14-3-3家族成員的進化關系：最早分化出來的是NtGRF11，NtGRF 11like，NtGRF9和NtGRF9like，之后是NtGRF12，NtGRF3和NtGRF3like-3，最后是NtGRF 2like，NtGRF2以及NtGRF2like-2。用15條擬南芥14-3-3蛋白序列(AtGRF1-AtGRF15)與10條白刺14-3-3蛋白序列構建系統發育樹(圖5)。由圖4可知，NtGRF2like，NtGRF2和NtGRF2like-2與擬南芥中AtGRF2，AtGRF6，AtGRF8親緣關系較近；NtGRF3和NtGRF3like-3與擬南芥AtGRF3的親緣關系最近；是AtGRF5和AtGRF7，NtGRF12獨成一枝與AtGRF12親緣關系較近；NtGRF9和NtGRF9like與AtGRF9親緣關系最近；NtGRF11和NtGRF11like與AtGRF11關系近。這與我們之前在命名時與NCBI的Blastp數據庫的比對結果一致。

圖5 白刺、擬南芥14-3-3蛋白系統進化關系Fig.5 The evolutionary relationship of 14-3-3 protein system of N. tangutorum and Arabidopsis thaliana

2.5 白刺14-3-3基因家族成員在脅迫處理中的表達分析

為解析白刺14-3-3基因家族成員對逆境的響應模式，利用qRT-PCR檢測其在干旱脅迫(PEG)和鹽脅迫(NaCl)處理下的表達量。根據前期試驗結果，選取表達量相對較高的基因GRF3，GRF3like-3，GRF2like用于后續表達模式分析。

如圖6所示，在不同濃度PEG處理下，GRF3，GRF3like-3，GRF2like在各時間段均有表達，其中，GRF3在低濃度PEG(10%)處理下表達量下調，在處理后期表達量有回升，在高濃度PEG(30%)處理下，2 h表達量明顯上調且達到最高，是對照組(CK)的5.9倍，隨后表達量下調；GRF3like-3在低濃度PEG 24 h和高濃度PEG 24 h表達量分別達到最高，是對照組的1.7倍和1.67倍，在這兩個濃度下表達量都呈現先下調后上調的趨勢；GRF2like在低濃度PEG 24 h的表達量最高，是對照組的1.67倍，在高濃度PEG 2 h表達量上調達到最高，是對照組的1.9倍，隨后下調。這3個基因在低濃度PEG的處理下，表達量都出現先下調后上調的趨勢，在高濃度PEG下表達量沒有固定的趨勢。說明GRF3，GRF3like-3，GRF2like參與白刺的干旱脅迫應答，且具有各自不同的調節功能。

圖6 不同濃度PEG處理下白刺14-3-3基因家族3個代表基因的表達量Fig.6 The expression of three representative genes of N. tangutorum 14-3-3 gene family under different concentrations of PEG treatments注：A-B,不同濃度PEG處理下GRF3的表達量；C-D,不同濃度PEG處理下GRF3like-3的表達量；E-F,不同濃度PEG處理下GRF2like的表達量。不同處理之間不同小寫字母表示差異性顯著(P<0.05)。下同Note：A-B,Expression of GRF3 under different concentrations of PEG treatment；C-D,Expression of GRF3like-3 under different concentrations of PEG treatment；E-F,Expression of GRF2like under different concentrations of PEG treatment.Bars marked with different lowercase letters showed significant difference at the 0.05 level.The same as below

如圖7所示，在NaCl不同濃度處理下，GRF3，GRF3like-3，GRF2like在各時間段均有表達。其中，GRF3在低濃度NaCl(200 mM)處理下，整體表達呈現先減少后增加的趨勢，48 h的表達量最高與對照組無顯著差異，在高濃度NaCl(450 mM)48 h表達量上調到最高，是對照組(CK)的12倍；GRF3like-3在低濃度NaCl 2 h表達量明顯上調且達到最高，是對照組的12.9倍，在這之后表達量下調，在高濃度NaCl 12 h表達量最高，是對照組的19倍，在此之后下調；GRF2like在低濃度NaCl 12 h表達量最高是對照組的5.1倍，在高濃度NaCl 12 h表達量明顯上調，到24 h表達量達到最大值，是對照組的15.5倍，隨后持續下降。說明GRF3，GRF3like-3，GRF2like同樣參與白刺的鹽脅迫應答，且具有各自不同的調節功能。

圖7 不同濃度NaCl處理下白刺14-3-3基因家族3個代表基因的表達量Fig 7 The expression of three representative genes of N. tangutorum 14-3-3 gene family under different concentrations of NaCl注：A-B,不同濃度NaCl處理下GRF3的表達量；C-D,不同濃度NaCl處理下GRF3like-3的表達量；E-F,不同濃度NaCl處理下GRF2like的表達量Note：A-B,Expression of GRF3 under different concentrations of NaCl；C-D,Expression of GRF3like-3 under different concentrations of NaCl；E-F,Expression of GRF2like under different concentrations of NaCl

2.6 白刺14-3-3基因家族成員的組織器官特異性表達分析

如圖8所示，GRF3，GRF3like-3，GRF2like在根、莖、葉中均有表達，但不同處理條件下表達存在差異。其中，GRF3在正常條件和PEG處理下，根中的表達量最高，葉中的最低，在NaCl處理下，根中的表達量和莖中的基本一致，葉中的最低；GRF3like-3在正常條件和PEG處理下，葉中的表達量最高，莖中的表達量最低，在NaCl處理下，根中的表達量最高，葉中的最低；GRF2like在正常條件下，根中的表達量最高，莖中的表達量最低，在PEG和NaCl處理下都表現出根中的表達量最高，葉中的表達量最低。說明該家族基因在組織器官中存在表達差異，并且能對干旱脅迫和鹽脅迫做出響應。

圖8 不同處理下白刺14-3-3基因家族3個代表基因組織器官的表達量Fig 8 Expression levels of three representative genes of N. tangutorum 14-3-3 gene family in tissues and organs under different treatments注：A,正常條件下GRF3在不同組織器官中的表達量；B,PEG處理下GRF3在不同組織器官中的表達量；C,NaCl處理下GRF3在不同組織器官中中的表達量；D,正常條件下GRF3like-3在不同組織器官中的表達量；E,PEG處理下GRF3like-3在不同組織器官中的表達量；F,NaCl處理下GRF3like-3在不同組織器官中的表達量；G,正常條件下GRF2like在不同組織器官中的表達量；H,PEG處理下GRF2like在不同組織器官中的表達量；I,NaCl處理下GRF2like在不同組織器官中的表達量Note：A,Expression of GRF3 in different tissues and organs under normal conditions；B,Expression of GRF3 in different tissues and organs under PEG treatment；C,Expression of GRF3 in different tissues and organs under NaCl treatment；D,Expression of GRF3like-3 in different tissues and organs under normal conditions；E,Expression of GRF3like-3 in different tissues and organs under PEG treatment；F,Expression of GRF3like-3 in different tissues and organs under NaCl treatment；G,Expression of GRF2like in different tissues and organs under normal conditions；H,Expression of GRF2like in different tissues and organs under PEG treatment；I,Expression of GRF2like in different tissues and organs under NaCl treatment

3 討論與結論

蛋白磷酸化作為一個重要的信號傳導機制，它存在于所有真核生物中，參與細胞分裂、分化、凋亡等多個基礎環節。14-3-3蛋白是一類基礎性蛋白，它主要通過調控激酶轉導的信號響應與轉錄因子對植物進行細胞信號轉導調控[3]。本研究中，基于轉錄組數據，初步篩選出10個白刺14-3-3基因家族成員，通過亞細胞定位預測發現白刺14-3-3蛋白主要分布在細胞質上，與在擬南芥中的規律相同[30]，說明14-3-3蛋白的功能在不同植物中是保守的。

多序列對比與保守基序分析表明，白刺14-3-3蛋白N-端和C-端區域具有較高的變異性，其余部分均保守，這與擬南芥中的研究一致[31]。motif1，motif2，motif5，motif6在白刺14-3-3家族中高度保守，N-端和C-端的motif3，motif4和motif7產生了變異，motif1包含該家族的保守結構域。這種中心區域高度保守，N-端和C-端的變化使14-3-3蛋白形成很多異構體。N-端會影響14-3-3蛋白與不同的膜結合，C-端直接參與和靶蛋白的相互作用，每一個異構體的N-端和C-端幾乎是獨一無二的，這是造成不同的異構體功能特異性的基礎[11]。有研究表明，N-端和C-端不同的motif是14-3-3蛋白發揮其不同功能時的核心結構[32]，本研究中白刺14-3-3蛋白的N-端與C-端有不同的motif，推測該蛋白能與眾多靶蛋白相結合而發揮重要作用。

系統進化樹顯示白刺和擬南芥14-3-3家族成員分為Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ4組，分別包含了6，2，2和0個白刺14-3-3蛋白，表明白刺14-3-3家族成員之間存在廣泛的多樣性。第Ⅰ組中白刺14-3-3家族成員比Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ組大大增加，說明第Ⅰ組的成員在進化過程中較為激烈，發生了基因加倍的情況，使得成員數目增加。基因加倍為白刺提供了更高的進化潛能[33]。在Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ組中，均有白刺和擬南芥14-3-3家族成員，推測白刺和擬南芥可能具有相似的進化軌跡。并且同源性較高的基因可能具有相似的功能。

表達模式分析可以在一定程度上預測基因的分子功能和涉及的生命過程，本研究在PEG模擬干旱脅迫的處理下，GRF3，GRF3like-3，GRF2like參與干旱脅迫響應，除GRF3在低濃度處理下較對照組表達量沒有上調，其他處理下3個基因的表達量均出現上調，這與水稻14-3-3基因家族中GF14b，GF14c，GF14e，GF14f的研究一致[30]。在NaCl高、低濃度處理下這3個基因的表達量均出現上調，這與番茄14-3-3家族中的TFT1，TFT4，TFT7和TFT10的結論一致[30]。與此同時這3個基因對低濃度PEG脅迫的響應模式相似，表達量都是先下調后上調，均在脅迫后期響應更明顯，而對高濃度PEG有不同的響應模式，并且在高濃度NaCl處理下都在脅迫中后期響應更明顯，但在低濃度NaCl處理下有不同的響應模式，這可能跟不同基因在脅迫中承擔的功能不同有關。14-3-3家族成員在不同物種中的表達存在器官特異性，擬南芥中15個14-3-3基因只有GRF1和GRF2在所有的器官中都有表達，多數14-3-3基因的表達具有明顯的組織器官特異性，如GRF14僅在生殖器官中表達[34]。本研究中的3個基因除GRF3like-3在正常條件和PEG處理下葉片中的表達量最高，在NaCl處理下根中的表達量最高以外，剩余2個基因均在正常條件、PEG和NaCl的處理下根中的表達量最高。綜合上述結果來看，14-3-3基因家族在白刺不同組織器官中表現出明顯不同的表達規律，并可響應外界的干旱和鹽脅迫。由此推測，14-3-3基因家族可能在白刺的脅迫防御方面發揮重要功能。

本研究基于白刺轉錄組數據，初步篩選出10個14-3-3家族成員，通過生物信息學分析，預測了其基因家族的理化性質、亞細胞定位、保守結構域及系統進化關系。同時，通過分析白刺14-3-3家族成員在不同濃度鹽、干旱處理下的組織器官表達特性，初步證明了14-3-3基因家族參與白刺抗旱耐鹽脅迫防御反應過程，該結果為進一步深入探究揭示白刺14-3-3基因家族的功能奠定基礎。