柚皮苷對破骨細胞凋亡的影響△

李風波，孫曉雷，馬劍雄，馬信龍

（天津市天津醫院骨科，天津300211）

隨著社會老齡化進展，骨質疏松已經成為常見的老年疾病，人群數量逐漸上升［1］。正常人骨重塑靠破骨細胞發揮骨吸收功能，以及成骨細胞發揮骨形成，兩者之間相互平衡、相互制約［2］。骨質疏松癥病人骨重塑過程中骨吸收大于骨形成，從而造成骨量丟失［3］。目前治療骨質疏松的藥物多數有較大副作用［4］，因此，研究者越來越看重天然藥物的開發。國內外研究報道柚皮苷藥理作用廣泛，能夠促進成骨細胞的分化、增殖［5～7］。但尚未有報道柚皮苷對破骨細胞凋亡及其機制的研究。因此，本研究探討了柚皮苷對破骨細胞凋亡的作用，進一步揭示該藥物的作用機制。

1 資料與方法

1.1 薄骨片的制備

牛股骨干粗切獲取皮質骨，進一步采用鋸片沿股骨縱軸切成厚度約為100 μm骨片，對骨片采用細砂紙進行打磨平滑，裁剪骨薄片（大小約為0.5 cm×0.5 cm），75%酒精浸泡30 min消毒后，采用無菌D-hank's液清洗三遍，置于培養基中4℃備用，取出晾干薄骨片表面液體后使用。

1.2 破骨細胞誘導

將由中國協和醫科大學基礎醫學細胞中心提供的RAW264.7細胞株，分別接種于6孔板中預置的無菌玻片或上述方法制備的薄骨片之上，接種密度2×104/cm2，2 h待細胞貼壁后，更換成高糖DMEM破骨細胞誘導培養基，內含10% FBS和100 ng/ml RANKL，37℃、5% CO2的培養箱中進行誘導培養，2天換一次破骨細胞誘導培養液。

1.3 柚皮苷處理

配制含柚皮苷 0 μg/ml（空白對照）、2 μg/ml、20 μg/ml和200 μg/ml的DMEM培養液。于破骨細胞誘導培養5 d后，更換為上述不同柚皮苷含量的DMEM培養液，在37℃、5% CO2的培養箱繼續培養3 d。……