脂多糖誘導的ATDC5細胞中MicroRNA表達△

李 建，江 攀，李大鵬，趙國陽

（江蘇大學附屬醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江212000）

骨關節(jié)炎（osteoarthritis,OA）是一種以關節(jié)炎癥和關節(jié)軟骨進行性退變?yōu)樘卣鞯某Ｒ娐躁P節(jié)疾病，其主要表現(xiàn)為關節(jié)疼痛、僵硬、活動受限，嚴重者甚至出現(xiàn)關節(jié)畸形，嚴重影響患者生活質(zhì)量［1，2］。其病理變化主要涉及細胞外基質(zhì)的分解或分解與合成的失衡，以及炎癥細胞因子誘導軟骨細胞破壞和凋亡［3，4］。研究表明，OA中炎癥因子表達的變化與軟骨細胞凋亡之間存在密切聯(lián)系［5］。

眾多研究已證實，脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革蘭氏陰性菌細胞壁的一種化合物，其通過增強炎癥因子的表達，如 IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等，來引起機體的炎癥反應，而且在體內(nèi)和體外均可以發(fā)揮作用［6］。ATDC5作為小鼠源性軟骨細胞，已被廣泛用于軟骨細胞體外實驗模型中［7］。MicroRNA（miRNA）是一類具有高度保守性的內(nèi)源性非蛋白編碼的小分子RNA，大小約19-25nt，通過與靶基因的mRNA分子的3’端非編碼區(qū)結合，抑制靶基因翻譯的進程［8］。研究表明，miRNA在OA中有重要作用，可以通過不同的信號通路參與調(diào)節(jié)炎癥因子導致軟骨細胞基質(zhì)降解的過程，而且miRNA能夠調(diào)控軟骨的代謝和修復過程［9］。

在OA的研究中，LPS處理后的ATDC5細胞作為細胞損傷模型已廣泛應用［10，11］。研究細胞損傷模型中miRNA的表達差異，可以推測其在OA中所起的作用，為進一步研究治療OA的新靶點提供方向。

1 資料與方法

1.1 實驗材料

小鼠源性ATDC5軟骨細胞系，胎牛血清、DMEM/F12培養(yǎng)基（美國BI公司），胰蛋白酶（美國Gibco公司），脂多糖（武漢塞維爾公司），總蛋白提取試劑盒（上海康成公司），兔抗……