無針注射器接種犬瘟熱疫苗免疫效果評價

翟曉虎 ， 曹 斌 ， 賀衛華 ， 祝正高 ， 張春莉

(1.江蘇農牧科技職業學院 , 江蘇 泰州 225300 ； 2. 江蘇珀可醫療科技有限公司 , 江蘇 泰州 225300)

犬瘟熱(Canine distemper，CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus, CDV)感染引起的急性、高度接觸性傳染病[1]。CDV可以感染犬科、貓科、浣熊科以及非靈長類等動物[2-3]。CDV主要侵害動物的消化系統、呼吸系統和神經系統[4]，幼齡動物易感，幼犬感染后死亡率較高[5-6]。動物接種疫苗是控制該傳染病的最有效途徑，主要接種的疫苗有滅活苗和弱毒苗，以弱毒苗為主[7]。

目前，動物醫院注射疫苗的方式仍以普通帶針頭注射器為主，而有些犬、貓對疼痛比較敏感，注射后經常會出現一些副作用。無針注射可以降低因注射疼痛而出現的并發癥，得到臨床獸醫的認可。無針注射是指進行藥物注射時利用機械裝置產生的推力瞬間將藥液穿過皮膚表皮細胞，像水花均勻分布在皮下或皮內的注射方法[8]。如今人醫有關無針注射技術的報道主要集中在胰島素的注射和瘢痕組織藥物注射治療[9-10]。其用于疫苗接種方面可表現為注射效率高、避免交叉感染、抗原分散高和降低動物疼痛感等優點。周海龍等[11]對豬瘟活疫苗無針注射的免疫效果進行了評價，而有關犬無針注射疫苗免疫效果評價的文獻并未查到。本試驗采用無針注射接種犬瘟熱疫苗，觀察注射時疼痛反應、副作用并評估免疫效果。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 年齡為42～45日齡健康拉布拉多犬和金毛巡回獵犬，均斷奶且未注射任何疫苗,來自江蘇農牧科技職業學院寵物繁育中心。

1.2 試驗材料 衛佳伍疫苗(含犬瘟熱抗原Snyder hill株)，購自泰州欣牧寵物用品有限公司(批號：300628A)；犬瘟熱病毒抗體(CDV Ab)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒，購自上海聯碩生物科技有限公司(貨號：AE93755Ca，批號：201911)；有針注射器；無針注射器(型號：POK-P-I)，由江蘇珀可醫療科技有限公司提供。

1.3 試驗方法 將30只42～45日齡幼犬隨機分成3組，每組10只；第1組采用有針注射器注射1頭份衛佳伍疫苗，第2組使用無針注射器注射1頭份衛佳伍疫苗，第3組使用無針注射器注射1/2頭份衛佳伍疫苗。第2組、第3組無針注射接種時CO2氣體壓力為1.5 MPa。首免后14 d和28 d，再用同樣的接種劑量和接種途徑進行二免和三免。

1.4 比較2種注射方法接種疫苗后對動物的影響 采用有針注射器和無針注射器接種疫苗后，分別于接種后10 min、30 min、1 h、6 h和12 h觀察疫苗接種部位有無出現紅、腫、熱、痛等炎癥反應；觀察注射后幼犬疼痛反應、有無藥液滲出；觀察疫苗注射后1 d、3 d和5 d幼犬的食欲、精神狀態，比較無針注射器和有針注射器接種疫苗后對幼犬的影響。

1.5 CDV抗體檢測 衛佳伍疫苗首免后14 d、二免后14 d、三免后14 d頸靜脈采血，分離血清，按照犬瘟熱病毒抗體(CDV Ab)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒操作步驟進行檢測，在450 nm波長處測定OD值，將OD值帶入標準品制作的直線回歸方程，計算每只犬產生的CDV抗體濃度。

1.6 統計分析 用SPSS軟件統計每組犬在免疫后同一時間節點產生抗體濃度，結果以平均值±標準差表示，分析各組之間的差異，確定無針注射器對犬瘟熱疫苗免疫效果的影響。

2 結果

2.1 不同接種方法接種衛佳伍疫苗后對犬的影響 2種注射方法接種疫苗后均未出現食欲減退、精神萎靡、藥液滲出等現象。結果顯示(表1)，有針注射接種疫苗后1只犬接種部位皮膚出現輕微炎癥反應，12 h后消失；有針注射接種疫苗時，針刺入皮膚到藥液注射完畢，8只犬出現掙扎和呻吟等疼痛反應，而無針注射接種疫苗時，只在接種瞬間因設備內部擊發裝置撞擊時產生的聲響，犬會出現立耳等集中注意力表現，并無疼痛反應。

表1 不同接種方法接種疫苗對犬的影響Table 1 Effects of different vaccination methods on dogs

2.2 各組CDV抗體濃度比較 分別于首免后14 d、 二免后 14 d和三免后14 d采血分離血清，檢測血液里CDV抗體濃度，根據上海聯碩生物科技有限公司犬瘟熱病毒抗體(CDV Ab)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒說明書，當測得抗體濃度大于12 ng/L 時，判斷該樣本抗體呈陽性，具有保護作用。結果顯示(圖1)，采用有針注射方法接種1頭份疫苗和無針注射方法接種1頭份、1/2頭份疫苗，首免、二免和三免后14 d所測的抗體濃度均能達到保護水平。首免后14 d、二免后14 d和三免后14 d所測抗體水平，無針注射方法略高于有針注射。二免后14 d 后體內產生的抗體水平大于首免后14 d，說明第2次加強免疫可繼續提高抗體水平，但是三免后14 d，3種注射方法抗體水平均呈現下降趨勢，但仍可達到保護水平。

圖1 免疫后CDV抗體濃度檢測Fig.1 Detection of CDV antibody concentration after immunization注：小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母相同或無標記表示差異不顯著(P>0.05)Note: Different lowercase letter superscripts show significant difference (P<0.05)，same letter or no letter superscript show no significant difference (P>0.05)

3 討論

3.1 無針注射接種疫苗的有效性 2種注射方法接種衛佳伍疫苗后，首免后14 d的CDV濃度均達到最低有效濃度，具有保護作用，說明犬采用無針注射接種疫苗是有效的；本試驗首免后14 d、二免后14 d和三免后14 d對比2種注射方法抗體生成濃度，無針注射組抗體水平略高；無針接種1/2頭份疫苗和有針注射1頭份疫苗相比，相同階段無針注射1/2頭份疫苗產生的抗體水平略高，這可能是因為無針注射藥液進入體內瞬間分散，這種分散的抗原有利于與免疫細胞的接觸，生成相對較多的抗體。周海龍等[11]也曾報道，無針注射1/2頭份豬瘟活疫苗和使用有針注射器注射1頭份疫苗產生抗體相當。本試驗檢測三免后14 d的CDV抗體濃度低于首免后14 d、二免后14 d。其原因是按照該疫苗免疫程序接種，二免后抗體水平已經很高，第3次免疫中和了部分抗體，導致血清抗體濃度下降，但仍大于12 ng/L，具有保護作用。

3.2 無針注射的安全性 本試驗采用的2種接種疫苗方法，無針注射后沒有出現食欲不振、精神萎靡及注射部位炎癥反應等副作用，而且明顯降低犬疼痛感，說明采用無針注射器接種疫苗是安全的。朱文勇等[12]在無針皮內免疫接種Sabin IPV疫苗的安全性及免疫原性研究中也評估了無針接種sIPV疫苗是安全的。

綜上所述，采用無針注射器給犬接種疫苗是安全的、有效的，而且最大的優點是降低了動物注射時的疼痛感，進而減小了獸醫人員給犬接種疫苗時被犬咬傷的風險，可代替普通注射器進行疫苗接種。