2019年福清市規模羊場羊傳染性鼻腫瘤橫斷面調查

毛坤明

(福建省福清市畜牧獸醫中心 ， 福建 福清 350300)

羊傳染性鼻腫瘤(Enzootic nasal tumor,ENT)是由羊傳染性鼻腫瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus, ENTV)引起的一種慢性、進行性、接觸性傳染病。羊傳染性鼻腫瘤潛伏期長，一年四季均可發生，無有效阻斷措施和治療措施，病死率一般為 30%～50%，有的高達 80%～100%[1-2]。該病主要以半歲以上的青年羊及成年羊發病為主，通過其分泌物感染其他羊。因尚無有效方法進行病毒分離體外培養，因此國際上對該病的研究較少，我國在20世紀90年代到21世紀初略有報道，本省幾乎沒有這方面的基礎數據。近年來，該病在本省各養羊相對較密集地區均有不同程度發生，且呈現感染上升、危害加大趨勢，初步了解，重點地區場群流行率可達20%～30%，病死率高，導致較多養羊場倒閉，危害嚴重。基于此，在福清市規模化羊場開展了該病流行率測量的橫斷面研究，為科學防控該病提供第一手數據。

1 材料與方法

1.1 目標群 福清市內存欄量50頭以上的規模羊場。

1.2 抽樣策略 按照兩階段抽樣策略，第1階段按估計流行率計算場群抽樣數：預期流行率為50%，可接受誤差8%，置信水平95%；第2階段按估計流行率計算場內個體抽樣數：設定預期個體流行率為5%，可接受誤差4%，置信水平95%。對抽取的個體，采集鼻腔分泌物(棉簽拭子)，于保存液(Hank’s緩沖液，含丙三醇100～150 mL/L)中保存。

1.3 病例定義 羊傳染性鼻腫瘤陽性個體：經實驗室PCR檢測為病原學陽性的羊只；羊傳染性鼻腫瘤陽性場群：檢測出1只及1只以上個體陽性羊只的羊場。

1.4 檢測方法 使用RT-PCR方法進行檢測[3]，雖無權威數據以評價該方法的敏感性和特異性，但參照RT-PCR的技術特點，經咨詢專家，該方法的敏感性(Se)和特異性(Sp)應不低于90%。為減少工作量，實際檢測過程中5合1檢測。將5個樣品作為1個群體考慮，經計算，合樣檢測會顯著降低個體診斷敏感性和特異性。

1.5 問卷調查 設計針對養殖場/戶的結構性問卷，內容包括羊場的生產管理、地理信息、歷史疫情、傳播相關風險因素等。田間調查和問卷填寫由經培訓的獸醫人員統一進行。

1.6 數據處理和分析方法 應用Excel進行數據匯總，應用Epi Info(Version 7.2.2.6)和SPSS(Version 22)進行數據統計分析。其中表觀流行率(Apparent prevalence，AP)為檢測的陽性數占所有檢測數的比值，真實流行率(True prevalence，TP)根據公式TP=(AP+Sp-1)/(Se+Sp-1)計算，真實流行率的95%置信區間(Confidence interval，CI)根據公式CI=P±Z×[p×(1-p)/n]-1計算，其中P是真實流行率，Z為標準正態分布概率p=0.05所對應的值，n為抽樣數量。

2 結果

2.1 樣本量 排查福清市存欄量50頭以上的規模羊場，并于抽樣前2周電話確定抽樣框共129家，其中最小存欄50頭，最大存欄500頭左右。最終隨機抽樣70個場群，涉及20個鄉鎮，包含山區、平原、沿海等不同地形地貌，共采集3 526份樣品(其中部分羊場因行情不好，且受羊鼻腫瘤病影響，于采樣前縮減了存欄，見表1)。

表1 采樣情況及檢測結果匯總Table 1 Summary of sampling and test results

2.2 個體流行率 該病病程初期表現為鼻腔流出少量稀薄的漿液性鼻液，隨后出現呼吸困難和持續性的鼻漏，進一步發展為腫瘤，侵及眼窩、擠壓眼球、視力減退和喪失，食欲減退、消瘦，易繼發細菌感染而死亡。5合1檢測樣本706份，陽性樣本108份(圖1)，個體表觀流行率15.3%。根據個體診斷試驗的敏感性和特異性，計算個體真實流行率為6.6%(95%CI:4.8%～8.5%)。

圖1 羊傳染性鼻腫瘤部分病例PCR擴增Fig.1 Amplification of partial cases of ENT by PCR從左到右：DNA marker 2 000； 空白對照; 陽性擴增產物From left to right: DNA marker 2 000； Blank control; Positive amplification products

2.3 群體流行率 70個場群中檢出符合病例定義的陽性場群25個，場群表觀流行率35.7%，場群真實流行率為35.7%(95%CI：24.4%～47.0%，群體敏感性和特異性均按100%計算)。

2.4 空間分布 因隨機抽樣且抽樣場點數不足，全市24個鄉鎮中，4個未涉及，抽樣的20個鄉鎮中，14個鄉鎮發現該病陽性場點，另6個未發現陽性場點的鄉鎮也不能排除無陽性場點存在(表2)。從空間分布看，相對陰性場點，25個陽性場點的分布并無非常明顯的特征，半數以上離交通主干道較近。

表2 抽樣場群和陽性場群的空間分布Table 2 Spatial distribution of sampling herds and positive herds

2.5 風險因素分析 抽樣檢測時設計調查問卷，除了解養殖基本信息外，從動物防疫角度加入了一些可能的風險因素。經Epi Info分析，近3年是否引種(OR=10.3，95%CI:3.3～32，P<0.05)、是否交叉放牧(OR=6.9，95%CI:2.3～20.5，P<0.05)和3 km內是否有別的羊場(OR=5.4，95%CI:1.13～26，P<0.05)為可能的風險因素(表3)。因福建省特有的飲食習慣，以山羊消費為主，與北方活羊和羊肉差價懸殊，造成引種頻繁，引種成為該病傳播的最大風險因素。

表3 風險因素2×2分析Table 3 2× 2 analysis of risk factors

2.6 風險因素回歸分析 應用SPSS對3個可能的風險因素進行分析，見表4。在相關性分析中，“3 km內有羊場”“交叉放牧”“引種”的相關系數分別為0.281(P=0.02)、0.457(P<0.05)和0.527(P<0.05)，均具有顯著相關性。單因素回歸分析中，“周圍3 km有羊場”“交叉放牧”“引種”分別為P=0.01、P<0.05和P<0.05。將這3個參數納入邏輯回歸模型，公式為：

p為養殖場發生羊鼻腫瘤的概率，X1為“引種”，X2為“交叉放牧”，X3為“周圍3 km有羊場”。Hosmer-Lemeshow 擬合優度檢驗卡方值χ2=15.680(df=4，P=0.003)。針對建立的Logistic回歸模型繪制了ROC曲線，曲線下方面積為0.841(95%CI：0.718～0.963)(圖2)。模型擬合不理想(P<0.05)，預示找到的3個風險因素雖然對羊鼻腫瘤病的發生具有較強相關性，但建立的二元邏輯回歸模型還不足以高效預測羊鼻腫瘤病的感染。

表4 風險因素Logistical回歸分析Table 4 Logistical regression analysis of risk factors

圖2 風險因素Logistical回歸方程ROC曲線Fig.2 ROC curve for logistical regression analysis of risk factors

3 討論

近年來，該病在福建省內呈現逐漸增多的趨勢，場群表觀流行率35.7%，場群真實流行率為35.7%(95%CI：24.4%～47.0%)，發病品種均為山羊，品種間無差異(OR=0.5，P=0.07)，3月齡至4歲均可發病，其中以1～2歲居多。羊群多呈零星發病，個體表觀流行率15.3%，個體真實流行率為6.6%(95%CI：4.8%～8.5%)，致死率達100%。在羊群里具有明顯的傳染性，但傳播速度較慢，病程大多數持續1～4個月，個別的長達1年。該病的主要風險因素為引種(OR=10.3，95%CI：3.3～32)、交叉放牧(OR=6.9，95%CI：2.3～20.5)和周圍3 km有羊場(OR=5.4，95%CI:1.13～26)。建議該病的防控主要從引種和交叉放牧方面進行控制。

調查時，風險因素設置的比較少，可能有的風險因素被忽略或遺漏。計算個體流行率時使用的是合樣檢測結果，可能和真實個體流行率有出入。因該病種為慢性傳染病，調查顯示的暴露因素和發病之間的相關性存在不確定性，這可能是邏輯回歸曲線擬合效果不佳的原因之一。