35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油高效液相色譜法分析

徐勇存 金鑫雷 楊明君 范偉贈 張平

(浙江天豐生物科學(xué)有限公司檢測中心，浙江 金華 321000)

35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油是由氯氟吡氧乙酸異辛酯原藥、氰氟草酯原藥、異噁草松原藥及乳化劑溶解在適宜的溶劑中配制而成的,是水稻田選擇性莖葉處理三元復(fù)配除草劑,可用于防除千金子、稗草、馬唐、牛筋草、狗尾草、雙穗雀稗、空心蓮子草等雜草。目前包含此3 種有效成分復(fù)配混劑的檢測方法未見公開報(bào)道。本文列舉的氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松檢測方法可將氯氟吡氧乙酸異辛酯、氰氟草酯、異噁草松及其雜質(zhì)快速的分離、檢測。有利于幫助企業(yè)組織生產(chǎn),并進(jìn)行科學(xué)全面的質(zhì)量管理,維護(hù)公司產(chǎn)品的信譽(yù)和用戶的利益。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀LC1260:配有二極管陣列檢測器(美國Agilent 公司)；色譜柱:Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm (i.d.) 1.8μm (美國Agilent 公司)；電子天平:BP211D (德國賽多利斯公司)；超聲波清洗器:KQ-400B (昆山市超聲儀器有限公司)；超純水機(jī):Milli-Q (美國Millipore 公司)。

1.2 試劑

甲醇:色譜純(美國TEDIA 天地試劑公司)；磷酸:分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣、氰氟草酯標(biāo)樣、異噁草松標(biāo)樣:采購自國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(沈陽),其質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為98.8%、98.7%、97.6%；35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油樣品(6.0%氯氟吡氧乙酸異辛酯加20.0%氰氟草酯加9.0%異噁草松):浙江天豐生物科學(xué)有限公司。各有效成分結(jié)構(gòu)式見圖1、圖2、圖3。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的制備

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣0.012g、氰氟草酯標(biāo)樣0.040g、異噁草松標(biāo)樣0.018g (精確至0.00002g) 置于100mL 容量瓶中,加甲醇溶解,超聲波浴槽中脫氣10min,取出降至室溫后,定容,搖勻,經(jīng)微孔濾膜過濾,此為標(biāo)樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約0.20g (精確至0.00002g) 置于100mL容量瓶中,加甲醇溶解,超聲波浴槽中脫氣10min,取出降至室溫后,定容,搖勻,經(jīng)微孔濾膜過濾,此為試樣溶液。

1.4 HPLC 分析條件

流動相:Ψ(甲醇+0.05%磷酸水溶液)=72+28(V/V)；流速:1.8mL·min-1；檢測器波長:235nm；柱溫:45℃；進(jìn)樣體積:5μL。

1.5 測定和分析

在上述操作條件下,待儀器基線穩(wěn)定后,連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液,計(jì)算各針有效成分響應(yīng)值的重復(fù)性,待相連兩針各有效成分的峰面積變化小于1.5%時,按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油典型的標(biāo)樣、試樣色譜圖見圖4、圖5,異噁草松保留時間約0.6min、氰氟草酯保留時間約1.7min、氯氟吡氧乙酸異辛酯保留時間約3.6min。

2 結(jié)果和討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱的選擇

選用Agilent Eclipse Plus C18,50mm × 4.6mm(i.d.) 1.8μm；Agilent Eclipse Plus C18,250mm×4.6mm (i.d.) 5μm；Thermo BDS HYPERSIL C18,250mm×4.6mm (i.d.) 5μm 色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),3 根色譜柱都能較好地分離各有效成分及雜質(zhì),但是Agilent Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm(i.d.) 1.8μm 色譜柱各有效成分的保留時間短,出峰快,檢測時間短,故選擇Agilent Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm (i.d.) 1.8μm 色譜柱。

2.1.2 檢測波長的選擇

用二極管陣列檢測器(DAD) 進(jìn)行光譜掃描,結(jié)果在235nm 波長處各有效成分(氯氟吡氧乙酸異辛酯、氰氟草酯、異噁草松) 吸收值較大,各雜質(zhì)在此波長下吸收值很小,故選擇235nm 為檢測波長。

2.1.3 流動相的選擇

選用甲醇-0.05%磷酸水溶液、甲醇-水溶液不同配比濃度時,經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動相選用Ψ(甲醇+0.05%磷酸水溶液)=72+28 (V/V) 時,各有效成分及雜質(zhì)得到很好的分離,峰形對稱。

2.2 方法線性關(guān)系的測定

稱取一定量的氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣、氰氟草酯標(biāo)樣、異噁草松標(biāo)樣 (精確至0.00002g) 置于50mL 容量瓶中,用甲醇溶解,定容。用移液管分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL 至50mL 容量瓶中,加甲醇定容。在同一色譜條件下測定上述5 個濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯(氰氟草酯或異噁草松) 峰面積,以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)作圖,測定其線性回歸方程。結(jié)果見圖6、圖7、圖8。

結(jié)果表明,氯氟吡氧乙酸異辛酯(氰氟草酯或異噁草松) 在此分析條件下具有良好的線性關(guān)系。氯氟吡氧乙酸異辛酯線性回歸方程為y=4503.5x-7.6121,相關(guān)系數(shù)R2=0.9994。氰氟草酯線性回歸方程為y=7633.6x+20.959,相關(guān)系數(shù)R2=0.9997。異噁草松線性回歸方程為y=2760.5x+3.4615,相關(guān)系數(shù)R2=0.9995。

2.3 方法精密度的測定

選取一批合格的35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油樣品,按上述方法平行檢測5次,方法精密度測定結(jié)果見表1。氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.03,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.50%；氰氟草酯標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.06,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.30%；異噁草松標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.04,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.42%。各組分的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于Horwits 公式計(jì)算值,證明此方法精密度較高,符合方法確認(rèn)要求。

2.4 方法準(zhǔn)確度的測定

在已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油試樣中,加入一定量的氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣、氰氟草酯標(biāo)樣、異噁草松標(biāo)樣,按上述方法檢測5 次,測定結(jié)果見表2,結(jié)果表明,氯氟吡氧乙酸異辛酯的平均回收率為99.07%,氰氟草酯的平均回收率為99.38%,異噁草松的平均回收率為99.16%,此方法具有較高的回收率。

表1 方法精密度測定結(jié)果

表2 方法準(zhǔn)確度測定結(jié)果

3 總結(jié)

經(jīng)過以上試驗(yàn)表明,此檢測方法具有線性關(guān)系好、精密度高、回收率高、檢測速度快的特點(diǎn),適用于企業(yè)生產(chǎn)過程中該產(chǎn)品的定性定量檢測。