布魯氏菌病實驗室診斷技術探討

姜 萍，張雪梅，焦明

（濟南市動物疫病預防與控制中心，山東 濟南 250109）

布魯氏菌病，簡稱布病，是由布魯氏菌引起的一種人畜共患傳染病，在世界范圍內流行，多種動物和人易感染，臨床上表現為不孕、懷孕母畜流產，公畜睪丸炎、附睪炎及關節炎，在我國屬于二類動物疫病。布魯氏菌病感染傳播的速度快、范圍廣，一旦不能及時發現確診，造成防控不及時就會給養殖戶和人畜健康造成嚴重威脅，因此，準確掌握布魯氏菌病的診斷方法對畜牧業養殖具有重要意義，布魯氏菌病的診斷方法有很多，下面就實驗室常用的診斷方法進行探討。

1 虎紅平板凝集試驗（RBPT）

RBPT是一種傳統的布魯氏菌病檢測方法，該方法操作簡便，成本低，靈敏度高，但由于RBPT是以布魯氏菌細胞壁脂多糖上的O鏈抗原作為診斷位點，而多種細菌(如大腸桿菌0157、沙門氏菌、小腸結腸炎耶爾森菌09等)在O鏈抗原結構上和布魯氏菌高度類似，因此容易發生交叉凝集反應，導致假陽性結果的出現，故該方法一般作為初選試驗，用于高危群體篩查和流行病學研究。

2 試管凝集試驗（SAT）

SAT原理是血清中IgG抗體和IgM抗體與布魯氏菌抗原的凝集反應，與虎紅平板凝集試驗相比，靈敏度和特異性高，可以半定量測出抗體水平。該方法常量法需要在試管中進行倍比稀釋，操作步驟繁瑣，樣品較多時工作量大，且反應時間長，時效性低，不適合現場疫情的快速診斷。隨著實驗儀器設備的不斷發展與更新，近年來研究者將SAT試驗改進為微量法(MSAT)，李翠[]等通過試驗證明微量法與傳統的試管凝集試驗相比具有許多優點，用移液器和96孔板代替吸管和試管，操作更為簡便、精確，節省樣品和試劑，且實驗結果的判定減少了人為誤差，結果更為可靠。

3 補體結合試驗（CFT）

補體結合試驗原理是布魯氏菌相關抗原與不完全抗體和非凝集抗體的結合反應，該方法的常量法是血清學檢測的經典方法，具有較高的特異性和靈敏度，適用于慢性布魯氏菌病和復發病例的診斷，對牛、羊、綿羊附睪炎的臨床診斷具有較高的應用價值。但該方法需要的溶血素制備困難，藥品用量大，操作步驟繁瑣，不適合大批量樣品的檢測。微量法用96孔板代替試管，可同時稀釋多個樣品，既節省試劑，又提高效率。

4 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)

ELISA是一種準確性和特異性較高的檢測方法，1976年Cavleson把這項技術運用到檢測牛布病抗體中，2004年ELISA法被定為國際貿易中牛種和豬種布魯氏菌檢測的指定試驗。ELISA分為間接法（i-ELISA）和競爭法（c-ELISA），兩種方法各有優勢，其中間接法敏感性高，競爭法特異性好。該方法適用于布魯氏菌病的篩選和確定試驗，效果優于傳統凝集試驗，ELISA試劑盒的準確性和特異性也是近幾年研究和研發的熱點。

5 聚合酶鏈式反應（PCR）

PCR是一種比較先進的診斷方法，高效的基因診斷技術已成為當前布魯氏菌病分子生物學檢測和病原學分型的重要手段。該方法優點是快速、靈敏、準確，并且可以事先對樣品進行滅活處理,從而降低布魯氏菌感染和擴散的風險。但PCR對試驗環境和儀器設備要求較高，試劑盒價格貴，試驗成本高，不適于在基層推廣以及現場快速檢測。

6 小結

目前實驗室常用的檢測方法各有利弊，在實際應用中需要根據實際情況和需求采用最合適的診斷方案，也可兩種以上方法結合使用，從而做出準確的判斷。隨著技術的發展進步，布魯氏菌病診斷方法的特異性、靈敏性都在不斷提高，但開發更為快速、簡便、準確的檢測方法仍然是學者們不斷探索的課題。