生物等效性試驗血液乙醇濃度檢測探討

周 娜

（北大醫(yī)療魯中醫(yī)院藥物臨床試驗機構(gòu)辦公室，山東 淄博 255400）

本文將比較不同BAC檢測方法間的優(yōu)缺點，并結(jié)合我院2017年以來在Ⅰ期臨床試驗中心開展的50余項BE試驗呼氣乙醇含量檢測流程，探討如何建立符合GCP要求的BE試驗BAC檢測標準操作流程[1]。

1 BE試驗與BAC檢測

為防止不符合入組條件的受試者進入試驗，BE試驗方案一般明確將篩選前嗜酒（每周飲用超過14個單位的乙醇：1單位=啤酒285 mL，或烈酒25 mL，或葡萄酒100 mL）或試驗期間不能停止飲用任何乙醇制品列為受試者的排除標準。在試驗篩選期，除通過詢問受試者了解其飲酒情況外，BAC檢測便成為客觀評價受試者是否符合試驗入組條件的必要措施[2-3]。此外，在試驗期間，為保證試驗藥物的體內(nèi)代謝不受乙醇干擾，每周期受試者入住Ⅰ期病房前也需要進行BAC檢測。

2 BAC檢測方法

BAC檢測可分為直接檢測和間接檢測2種方法，所謂直接檢測就是抽取被檢測人的血液進行BAC檢測的方法，目前國內(nèi)報道的常用方法包括化學法、酶法和氣相色譜法[4-5]。化學法不需要精密儀器，操作簡單，成本低，在一般實驗室即可開展，但是該法靈敏度較低，準確性易受還原物質(zhì)的影響。酶法可定量檢測乙醇含量，但易受酶的反應(yīng)溫度及保存條件等影響，人體內(nèi)的某些酶或藥物等影響試驗結(jié)果。上述2種檢測方法受靈敏度和準確性低的限制，不宜用于臨床試驗BAC檢測中。氣相色譜法因其靈敏度高（可以檢測出10-6至10-9級的乙醇含量）、選擇性好（能把乙醇分離出來并做定量分析）、分析速度快（一般每個樣品的分析時間在5 min內(nèi)）、易于自動化操作等優(yōu)點，在BE試驗BAC檢測方面被認為是最科學的方法。目前市售的血液乙醇含量專用氣相色譜儀，符合中華人民共和國行業(yè)規(guī)范技術(shù)要求、中華人民共和國司法部司法技術(shù)規(guī)范標準：GA/T842-2009GA/T1073-2013行業(yè)技術(shù)規(guī)范標準，利用乙醇的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內(nèi)標，用頂空氣相色譜-火焰離子化檢測器進行檢測，可直接測出血液乙醇含量。但出于儀器價格、使用率等實際情況考慮，很多開展BE試驗的機構(gòu)無法配備氣相色譜儀，不能進行BAC直接檢測；所謂間接檢測就是采用自動檢測儀器測定乙醇濃度，并按照一定比例換算為BAC的方法。呼氣乙醇檢測（口腔呼出氣體同血液之間有換算關(guān)系）、非抽血式紅外檢測（血液中乙醇分子反射被照上的紅外線）和汗腺檢測（汗液中乙醇含量間接推斷）均屬于間接檢測。其中呼氣乙醇檢測因其操作方便和可快速檢測出乙醇含量的優(yōu)勢，被很多機構(gòu)用于BE試驗中[6]。

3 呼氣乙醇含量檢測儀

乙醇檢測儀是用來檢測人體是否攝入乙醇和攝入乙醇程度的儀器。呼氣式乙醇檢測儀是乙醇測試儀中最常用的一種，它只需呼入被檢測者的氣體即可快速檢測出乙醇含量。它分為濕化學法、氣相色譜法、電化學法、紅外光譜法和半導(dǎo)體傳感器5種工作原理，其中電化學/燃料電池乙醇檢測儀應(yīng)用較多，其原理為呼氣中乙醇被催化劑氧化成氧化碳（或乙醛）和水的過程中釋放出化學能，化學能經(jīng)能量轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換之后成電流通過電伏特表，表的讀值越高，則乙醇濃度越高。我院BE試驗乙醇檢測使用的是已獲得“中華人民共和國制造計量器具許可證”的興喜電子（深圳）有限公司生產(chǎn)的燃料電池型呼氣乙醇含量檢測儀（型號：AT13），該檢測儀已經(jīng)通過“國家道路安全產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心”以及“廣東省計量科學研究院”按GB/T 21254-2007 及JJG657-2006的檢測。為保證該儀器的準確性，每6個月由淄博市計量測試所依據(jù)JJG657-2006《呼出氣體乙醇含量探測器檢定規(guī)程》對其進行檢定，只有檢定合格且在檢定有效期內(nèi)的儀器，才能被用于我院BE試驗中。

4 我院呼氣乙醇含量檢測流程

4.1 測試前準備 ①儀器準備：我院Ⅰ期臨床試驗中心實行項目聯(lián)系人（project contact，PC）負責制，由主要研究者指定專人作為PC，其負責對整個試驗項目的協(xié)調(diào)與安排。根據(jù)PC制訂的試驗流程及項目時間安排，儀器設(shè)備管理人員會提前準備試驗所需儀器設(shè)備。如BE試驗的篩選期和每周期入住Ⅰ期病房前需要進行呼氣乙醇檢測，需要提前準備呼氣乙醇含量檢測儀，并檢查儀器的校準和檢定是否在有效期內(nèi)、儀器運轉(zhuǎn)是否良好、電源儲備和打印紙是否充足等，以保證試驗中所用儀器滿足GCP對臨床試驗的要求。②HIS醫(yī)囑：有些機構(gòu)因為醫(yī)院檢驗科不具備BAC檢測資質(zhì)，呼氣乙醇檢測非由檢驗人員操作，而是由Ⅰ期臨床試驗中心的研究人員在本科室進行測試操作，檢測后將檢測結(jié)果復(fù)印后粘貼于原始文件中，導(dǎo)致非檢驗科檢測項目在實驗室信息系統(tǒng)（laboratory information system，LIS）中無法溯源。這些在試驗科室進行檢查的項目不能溯源，檢查過程無標準操作流程，無室間質(zhì)評證書，檢查人員也難以做到專門的培訓，這些都對試驗數(shù)據(jù)的真實性、規(guī)范性帶來了不利的因素[7]。為滿足GCP對臨床試驗數(shù)據(jù)可溯源的要求，檢測前一天，我院研究醫(yī)師在醫(yī)院信息系統(tǒng)（hospital information system，HIS）中開具呼氣乙醇檢測醫(yī)囑，研究護士進行醫(yī)囑確認后打印醫(yī)囑條碼，交有資質(zhì)的檢驗人員進行呼氣乙醇檢測時使用。

4.2 測試操作 ①時間校準：檢測當天，檢驗人員按Ⅰ期臨床試驗中心要求領(lǐng)取項目所需呼氣乙醇含量檢測儀及其《儀器設(shè)備使用登記表》，開機檢查儀器狀態(tài)，并與GPS時鐘進行時間校準。②受試者身份核對：將醫(yī)囑條碼信息（科室、姓名、性別、年齡等）和受試者信息（身份證、所參加項目的編號等）進行核對，核對無誤后進行呼氣乙醇檢測操作。③測試操作：我院使用的AT13燃料電池型呼氣乙醇含量檢測儀操作簡單，開機狀態(tài)下，直接點擊屏幕“測試”按鈕，進入乙醇測試狀態(tài)，按照屏幕的提示裝好吹管，讓受試者深吸一口氣，然后含住吹嘴吹氣，當達到吹氣壓力后儀器發(fā)出“嗶”一聲，同時屏幕測壓指示條開始滾動、狀態(tài)指示燈常亮；當指示條到達盡頭時，儀器自動抽氣采樣，受試者可停止吹氣，若測試時滾動條未到達盡頭，儀器會顯示“吹氣中斷，請重吹”，同時發(fā)出提示音，受試者應(yīng)重新吹氣，直至測試完成。注意在測試時，兩次測試應(yīng)間隔2 min。如果測試結(jié)果超過80 mg/100 mL(即呼氣乙醇含量超過0.36 mg/L)，下次測試需間隔3 min，以便讓燃料電池充分歸零。④BrAC與BAC自動換算：AT13燃料電池型呼氣乙醇含量檢測儀是由興喜電子（深圳）有限公司生產(chǎn)，該企業(yè)執(zhí)行2011年1月14日國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局、國家標準化管理委員會批準的強制性國家標準《車輛駕駛?cè)藛T血液、呼氣乙醇含量閾值與檢驗》（GB19522-2010），該標準中4.2條明確規(guī)定“血液與呼氣乙醇含量換算：車輛駕駛?cè)藛T呼氣乙醇含量按1∶2 200的比例關(guān)系換算成血液乙醇含量，即呼氣乙醇含量值乘以2 200等于血液乙醇含量值”。該儀器已按照GB19522-2010規(guī)定的系數(shù)設(shè)置好，即通過測定BrAC，以BAC∶BrAC=2 200∶1的比例自動換算為BAC，故儀器打印出的熱敏紙結(jié)果直接顯示為BAC。⑤結(jié)果打印：在儀器顯示BAC數(shù)值后，按“OK”鍵進入輸入相關(guān)信息界面（測試模式選擇“主動”模式），持續(xù)按“OK”鍵直至出現(xiàn)條碼打印界面，點擊“打印”按鈕進行結(jié)果打印。結(jié)果打印后，將該受試者的醫(yī)囑條碼粘貼于熱敏紙結(jié)果“被測試人”下面的空白處，并在“被測試人”處記錄受試者的篩選號或隨機號及姓名縮寫，操作人員在“執(zhí)勤民警警號”處簽名，至此完成一次呼氣乙醇測試。選擇“退出”按鈕，開始下一位受試者的測試。儀器使用時，及時在呼氣乙醇檢測儀的《儀器設(shè)備使用登記表》上登記使用相關(guān)信息（方案編號、使用日期、開始時間、結(jié)束時間、儀器狀態(tài)、操作內(nèi)容和操作人等）。⑥結(jié)果復(fù)印：待所有受試者檢測完畢，檢驗人員核對儀器操作記錄無誤后，將呼氣乙醇含量檢測儀及其《儀器設(shè)備使用登記表》歸還Ⅰ期儀器設(shè)備管理人員，并將呼氣乙醇檢測的熱敏紙結(jié)果復(fù)印2份，1份復(fù)印件留存于Ⅰ期臨床試驗中心的項目原始文件中，另1份復(fù)印件和熱敏紙檢測結(jié)果原件由檢驗人員帶回檢驗科用于完成測試報告。

4.3 測試報告 ①樣本登陸：通過掃描我院HIS二維碼，實現(xiàn)和LIS的有效對接，實現(xiàn)呼氣乙醇檢測項目的可溯源性。檢驗人員在瑞美“NS3001免疫層析判讀記錄儀”報告單元，在相應(yīng)編號位置掃入受試者醫(yī)囑二維碼，并確認樣本一致性。②受試者信息核對：依次核對瑞美報告系統(tǒng)中受試者信息（科室、姓名、性別和年齡等）與呼氣乙醇熱敏紙檢測結(jié)果中的受試者信息是否一致，如有不一致及時聯(lián)系Ⅰ期臨床試驗中心查找原因。③結(jié)果判定與審核：檢驗人員（操作人員）根據(jù)本院檢驗科《呼氣乙醇檢測標準操作規(guī)程》對呼氣乙醇熱敏紙檢測結(jié)果顯示的BAC定量結(jié)果進行定性判讀。血液乙醇濃度為0.0 mg/100 mL，結(jié)果判定為“陰性”，高于0.0 mg/100 mL，結(jié)果判定為“陽性”。結(jié)果初判后，由其他檢驗人員（非操作人員）對最終結(jié)果進行再次審核，以保證最終判讀結(jié)果的準確性。④報告單打印分發(fā)：再次審核無誤后，檢驗人員打印報告單并做好相關(guān)登記，將報告單發(fā)放給Ⅰ期臨床試驗中心。

5 討 論

利用呼氣乙醇含量檢測儀進行BAC間接檢測的方法，雖不如氣相色譜法直接檢測血液樣品檢測結(jié)果準確，但該方法以其檢測儀器價格低、操作簡便和出結(jié)果快等優(yōu)點，被大多數(shù)機構(gòu)認可，并廣泛應(yīng)用于BE試驗中[8]。目前，大多數(shù)機構(gòu)檢驗科無法進行呼氣乙醇檢測室間質(zhì)控，導(dǎo)致核查人員會對呼氣乙醇檢測數(shù)據(jù)獲取的規(guī)范性提出質(zhì)疑。希望國家藥品監(jiān)督管理局（national medical products administration，NMPA）能聯(lián)合計量檢測部門早日為BE試驗呼氣乙醇檢測提供室間質(zhì)控標準物質(zhì)及質(zhì)控方法，使檢驗人員在進行呼氣乙醇檢測過程中能開展室間質(zhì)控，以保證臨床試驗數(shù)據(jù)采集的規(guī)范性[9-10]。開展BE研究時，無論采用直接還是間接BAC檢測方法，機構(gòu)都要建立完善的BAC檢測的標準操作規(guī)程，以滿足GCP對臨床試驗數(shù)據(jù)真實可靠、試驗結(jié)果完整可溯源的要求。