獸醫實驗室抗體檢測結果影響因素分析及注意事項

張伯杰，劉文天，張會春，王俊強，李煥婷

（天津市寶坻區農業發展服務中心，天津 301800）

近年來，國家增加了對動物疫病的重視，不斷提升基礎設施建設水平，并且農業部門也連續促進獸醫實驗室考核工作，提升了全國縣級以上的獸醫實驗室設備水平。抗體檢測工作的開展，能夠快速檢測出一些畜禽的疾病，根據結果能夠提出相應的治療方法，進一步提升治療的效果。但是在開展抗體檢測過程中，樣品因素、人為因素等會造成檢測結果失真，無法為治療提供有效的依據。因此，相關部門要優化獸醫實驗室抗體檢測環節，提高檢測準確性。

1 獸醫實驗室抗體檢測的必要性

隨著生存環境的不斷惡化，各種疾病的發生率也越來越高，畜禽業動物疫病類型也變得復雜，不再是單一感染，混合型感染加繼發性感染多，很多疾病的臨床表現與剖檢結果類似，如果不能準確找出病因，將無法達到良好的治療效果[1]。實驗檢驗利于中獸醫明確疫病類型，從而采取針對性的治療，不僅能減少治療成本，還能提高治療效果。獸醫實驗室開展抗體檢測工作就是為了將治療的被動狀態變為主動。常見的檢測方法有血清學檢測、ELISA檢測等，基本原理都是根據抗原抗體的特異性結合酶標物，催化檢測樣本，使其發生反應顯色，根據顯色的深淺判斷結合酶的多少。其中ELISA 檢測的類型分為間接法、雙抗夾心法以及競爭法，不同的方法適合不同的抗體檢測工作，需要根據實際情況選擇。

2 獸醫實驗室的現狀

2.1 實驗技術人員較少

目前，我國大部分縣區的獸醫實驗室的工作人員都是兼職的身份，具有較強的流動性，且缺乏相應的專業知識與技術，實驗室工作人員較為短缺，部分動物抗體檢測工作甚至無法正常開展。部分實驗室中只有2 名工作人員身兼數職，無法以實驗工作為主，加上多種因素的影響，實驗室的工作人員沒有學習與進修的機會，工作人員的能力不能滿足新時期獸醫工作的需求。

2.2 獸醫實驗室經費不足

很多地方對獸醫實驗室的經費投資力度不夠，導致部分獸醫實驗室出現經費不足的情況[2]。一些地區雖然在表面上將動物抗體檢測的經費列入了支持范疇，但是實際用來建設獸醫實驗室的經費較少，實驗室的設備與儀器不能及時更新，設備采購年限較長，在設計運用中可能會出現故障與問題，部分實驗室還會出現缺少試劑的情況，無法保證抗體檢測的準確性與可行性，阻礙抗體檢測工作的順利開展。

2.3 缺乏嚴格的管理制度

獸醫實驗室的抗體檢測工作屬于專業性較強的實驗，只有建立健全相應的管理制度才能提高檢測結果的可信度。這就需要管理人員從實驗室的實際情況出發，制定合理的管理制度，提高工作人員的責任心與使命感，進一步提升實驗室工作人員的能力。同時，還要做好培訓工作，保證獸醫實驗室工作的順利開展，提高抗體檢測結果的準確率。

3 影響獸醫實驗室抗體檢測結果的因素以及注意事項

3.1 免疫因素

3.1.1 實驗物種因素

獸醫實驗室需要以物種綜合情況為依據對實驗物種進行合理選擇，實際選擇時不僅要對實驗物種的遺傳疾病進行準確評估，還要對其營養狀況進行全面判定，是否受免疫抑制劑的影響也是實驗物種選擇需要關注的重點。待確定好實驗物種且正式研究前，需要依靠人工方式對其進行一定時間的飼養，對其在實驗過程的正常死亡提供保證，避開其他客觀因素的影響。除上述情況外，若沒對實驗物種的遺傳疾病進行判定，在抗原抗體進行接種時其免疫應答會受到不同程度的影響。

3.1.2 實驗疫苗因素

免疫應答體現質量，實驗室選取疫苗的使用年限及質量有很大關系。基于此，相關負責人在選購實驗疫苗過程中要確認疫苗來源是否合理、生產廠家是否正規，尤其是所選購生產廠家是否是國家相關部門檢驗并通過審核，這這對免疫應答非常重要[3]。假冒偽劣的疫苗品種經常流通在相關市場，這類實驗疫苗具有較低的選購成本，但非常不利于做抗體研究，甚至會給獸醫實驗的整體結果帶來嚴重影響。除以上需要注意的外，還要保證實驗過程選擇變量的單一性，切忌不能將多種疫苗同時注入實驗物種中，這種錯誤的行為不僅影響實驗結果的準確性。

3.2 樣品因素

3.2.1 樣品采集時間

研究人員給實驗物種注射一定時間的疫苗后，要借助數據測量結果對疫苗作用的最高閾值及最低閾值進行確定。如果實驗物種疫苗達到最高閾值，研究人員應將作用時間及時記錄，然后結合其他類型不同的疫苗最高閾值進行仔細比對。通常情況下，疫苗活性和抗體產生速度成正比，活性越高實驗體內的抗體產生速度會越快，若實驗疫苗活性被滅，抗體產生的時間就會被拉長。

3.2.2 樣品采集方法

在檢測實驗抗體時，首先要進行血清樣本的采集工作，采集對象需要是已經接種疫苗的實驗物種。如果采集針對的實驗物種沒有生命體征，則該血清樣本采集無效。采集樣本的方式不僅要專屬、特定，還要借助專用設備進行物質分離，并保證采集全程無菌，還要保證研究人員動作的規范性。

3.2.3 對樣品的處置及保管

由于凝血因子的存在會導致所采血清樣品極易發生凝固[4]。基于此，為了保證采集質量，避免發生變質，實驗人員經常會將特殊化學試劑添加到所采的血清樣本中，并對其進行專業的物理處理。需要注意的是，抗凝劑不能直接添加到樣本中，應根據添加要求規范操作。待工序全面完成以后，應將所采樣品放置在離心管中進行低溫或冷凍保存，離心管要提前高溫消毒方可使用。由于實驗樣品的保存期非常有限，需要對其及時利用。

3.2.4 樣品分裝

獸醫研究人員在進行實驗時需要保持嚴謹的工作態度，這也是科學實驗的重要前提。為了預防交叉感染問題發生，分裝血清樣本過程中，務必使用獨立且符合應用標準的試劑滴管進行嚴格操作。離心管及注射器需要和血清樣本一一對應，離心管和注射器必須是一次性操作，不能重復使用。

3.3 實驗室因素

3.3.1 對實驗器械的檢測

實驗器械的使用質量及結構直接影響著實驗測量的最終結果，任何獸醫實驗都是如此[5]。如果選用了誤差較大的測量設備，或者靈敏度較低的儀器，會給實驗結果帶來不同程度的偏差，尤以抗體檢測最為明顯，如果器械使用質量不佳，會直接干擾最終的實驗數據。

3.3.2 對實驗試劑的檢測

雖然獸醫實驗室選購的試劑廠家都是正規且通過驗收標準的，但在對實驗試劑進行實際生產時，每個廠家會使用不同的成分元素，因此，實驗試劑最終成品還是會存在某方面的不同，在具體實驗中，研究人員需依據自身的實際需求，合理選擇試劑，以保證實驗開展的順利性。

3.3.3 實驗室溫度

實驗室溫度如何同樣影響著抗體實驗的檢測結果。因此，在抗體檢測實驗時，研究人員需要避免溫差較大問題出現。通常實驗溫度要求在25℃左右為最佳，如果抗體實驗中發生溫差較大現象，勢必會對抗原抗體的反應結果帶來直接影響，或快或慢都會降低實驗結果的嚴謹性，甚至出現實驗數據差異較大的結果。

3.4 人為操作因素

3.4.1 加樣操作

不同類型的抗體檢測技術，適用于相應的動物傳染性疾病抗體檢測。在實際檢測過程中，加樣環節是血清抗體檢測的重要步驟，也會直接影響試驗研究的結果[6]。因此，在進行添加樣品過程中，要保證樣品的均勻性，避免出現氣泡，并且要做到定量加入，一般的劑量控制在50 μl 左右，輕輕地將樣品加入被檢樣品孔。另外，還需要注意樣品檢測前要完全解凍，提前將需要使用的樣品拿出來，在室溫下完成解凍，混合均勻后在檢測。

3.4.2 孵育時間

采用ELISA 抗體檢測方法時，被檢樣品完成加樣后需要進行孵育，能夠使被檢樣本與所包被抗原或抗體進行充分結合，在此過程中要做好溫度與時間的控制。不同類型抗體檢測時，要嚴格按照說明書的要求進行孵育，以此防止抗原或抗體活性喪失后，造成檢驗樣品與抗體形成抗原復合物，影響實驗的結果。

3.4.3 洗板次數因素

ELISA 檢測相關抗體時，完成加樣與孵育后要進行洗板，常見的洗板方法有兩種，即手工洗板與機器洗板。在進行洗板過程中，洗滌的次數要在一定標準內，洗滌次數過多會將反應結合的復合物清洗掉，洗滌次數較少會出現洗滌不干凈的現象，造成二抗稀釋液的殘留，影響實驗結果。另外，在進行洗滌后還要注意拍板，將多余的洗滌液甩出去，保證實驗的準確性。

3.4.4 結果判定

在進行抗體檢測實驗過程中，完成顯色反應后要停止加入終止液，將酶標板放在酶標儀上，限定15 min 內讀取結果，保證設定的波長和試劑說明書一致。另外，需要注意的是，酶標板在使用前需要預熱15～30 min，空白版自檢2次后才能檢測樣品。

4 提高獸醫實驗室開展抗體檢測結果準確性的策略

4.1 加強對實驗室工作人員的技術培訓

在進行抗體檢測過程中，為了保證檢測結果的準確性與有效性，需要對獸醫實驗室的工作人員進行培訓[7]。為此，獸醫實驗室的管理人員要建立完善的培訓制度，根據實驗室的具體情況，制定合理的技術培訓計劃，幫助工作人員掌握先進的實驗方法與操作要點，規范工作人員的操作流程，進一步提升工作人員的素養與綜合能力。同時做好實驗人員的思想工作，使其樹立嚴謹的工作態度，提高工作的責任心，高質高量的完成抗體檢測工作，保證檢測結果的準確性。另外，還要制定完善的考核標準，保證實驗人員持證上崗，提升實驗室的檢測水平。

4.2 制定完善的監督管理制度

獸醫實驗室開展抗體檢測工作中，要根據實驗類型挑選準確率高、操作簡單的方法，嚴格按照相關流程進行檢測，保證器材使用的規范性，按照相應的標準添加試劑，并且要嚴格控制實驗室的環境，及時處理實驗肥料，減少出現實驗誤差的概率，保證實驗的準確性。同時，建立健全完善的監督管理制度，有利于保證獸醫實驗室抗體檢測工作的規范性[8]。在現有制度的基礎上進行完善與創新，嚴格按照管理制度規范與落實各項工作，還可以將實驗室監督管理納入實驗室人員績效考核中，在加強監督力度的基礎上，促進實驗室檢測水平的提升。

4.3 加強實驗室的硬件設備

獸醫實驗室在實際運行過程中，需要有一定的硬件設施作為支撐，才能提高檢測結果的準確性。這就需要相關政府部門的支持，加大對獸醫實驗室的資金支撐，為檢測工作的開展奠定基礎。政府部門要結合實驗室的具體情況進行規劃，明確科室人員的職責，實現精細化分工，保證檢測工作高效進行，并且要更新實驗室的硬件設置，注重日常維修與管理，保證設備正常運行，達到更高的檢測效率與質量。

4.4 加大對實驗環節的控制

首先，在進行抗體檢測過程中，樣本是檢測的基礎，實驗室需保證樣本的準確性與有效性。在采樣過程中，使用專業化水平較高的設備，按照一定的標準進行采樣，實現快速采樣與存儲，為實驗室檢測提供便利。

其次，選擇合適的實現試劑。不同的檢測項目，適合的檢測試劑不同，選擇便于存儲并且具有較高穩定性的試劑，確保試劑的有效性。

最后，嚴格控制實驗環境。只有將實驗溫度與濕度控制在一定范圍內才能達到最佳的實驗檢測效果。

5 結束語

在獸醫實驗室開展抗體檢測過程中，影響檢測結果的因素較多，如免疫因素、樣品因素、實驗因素以及人為因素等。針對不同的因素可采取相應的應對措施，重點是做好樣品收集與存儲工作，不斷提升工作人員的素質，使其形成嚴謹的科學態度，并做好實驗室儀器維修與保養工作，減少不良因素的影響，確保檢測結果的準確性，推動畜禽養殖業的長遠發展。