高等院校動物實訓場所布魯氏桿菌的診斷方法與預防措施

周博武

(廣西農業職業技術學院，廣西 南寧 530007)

布魯氏桿菌病是指因布魯氏桿菌侵入動物機體而引起的一種急性或慢性人畜共患病，簡稱布病，屬于二類動物傳染病。主要侵害牲畜的生殖系統，引起母畜生殖器官和胎膜發炎、流產、不育，公畜睪丸炎、附睪炎[1]。

近年來，我國農業高等院校和科研機構相繼報道多起布魯氏桿菌感染的事件，嚴重威脅人民的生命健康安全。2011年，東北農業大學動物醫學學院授課的教師和學生在實訓課時使用了未經檢疫的山羊，導致該校27名學生和1名教師相繼確診感染布魯氏桿菌[2]；近期，中牧蘭州生物藥廠在生產獸用布魯氏桿菌疫苗時，因工作疏忽使用了過期的消毒劑，導致生產發酵罐滅菌不徹底而形成帶菌氣溶膠彌散在空氣中，被該研究所的工作人員和附近居民吸入或接觸而感染。截至2020年9月，甘肅省疾控中心確診陽性3245人[3]。人類對布魯氏桿菌易感，感染后臨床主要表現為不定期發熱(也叫“波浪熱”)、乏力、多汗、肌肉疼痛、淋巴結腫大、關節炎、睪丸炎等。基于此，本文通過對農業高校動物實訓場所布魯氏桿菌的檢測和防控措施進行分析，總結診斷方法與預防措施，以期為涉農高校動物實訓場所的安全提供參考。

1 布魯氏桿菌的生物學特性與傳染來源

1.1生物學特性 布魯氏桿菌為細小的球形、球桿形或短桿形，無芽孢，無鞭毛，無莢膜，屬于革蘭氏陰性菌。常用科茲洛夫斯基染色法、姬姆薩染色法等進行染色，布魯氏桿菌被染成紅色，其他細菌被染成綠色，以此可與其他細菌相區別。布魯氏桿菌有6個種，20個生物型，6個種分別為牛布魯氏桿菌、羊布魯氏桿菌、豬布魯氏桿菌、犬布魯氏桿菌、沙林鼠布魯氏桿菌和綿羊布魯氏桿菌[4]。布魯氏桿菌最適宜生長的溫度為37℃，最適宜的pH值為6.6～7.4，對日光直射、紫外線、加熱、常用消毒劑比較敏感，可被0.5%洗必泰或0.01%新潔爾滅在5 min內殺滅，對磺胺類、鏈霉素、慶大霉素、四環素及卡那霉素等藥物敏感。但是，對自然因素的抵抗力較強，在污染的土壤和水、皮毛、乳、肉食品上能存活1～4個月。

1.2傳染來源 布魯氏桿菌的傳染源主要是患病動物和帶菌動物，其中牛、羊最易感，豬次之。一般有以下幾個傳染來源：一是患病母畜通過分娩，病菌隨著胎衣、胎兒、陰道分泌物、羊水等大量排出體外，污染環境，傳播病原；二是患病的公畜精液中含有大量病菌，通過自由交配或人工授精而進行傳播，甚至負責人工配種的工作人員由于黏膜與帶有病菌的精液接觸，從而很容易被感染；三是患病的動物，如牛、羊、豬等病畜通過乳汁、糞便和尿液排出病菌，污染墊草、圈舍、飲水、飼料及排水溝等而使病菌散播；四是人類加工處理患病動物的皮毛和肉制品時，由于皮毛和肉制品帶有病菌，直接或者間接通過呼吸道和皮膚黏膜感染布病；五是通過蚊子、蜱蟲等吸血昆蟲叮咬而傳播感染。人類對本病易感，牛、羊、豬三種類型布魯氏桿菌對人類均有致病作用，以羊型最大，豬型次之，牛型最小[5]。

2 實訓場所布魯氏桿菌存在的因素

2.1實驗人員缺乏安全意識 實驗人員對實驗室的生物安全不夠重視，在實驗室進行動物疫病實驗時，由于防護不當，導致病菌容易從眼、鼻、口、皮膚黏膜等處侵入人體而造成感染。另外，沒有嚴格按照滅菌過程操作也很容易受到病原菌的入侵感染。

2.2實驗動物的來源復雜 農業高校采購實驗動物時，沒有嚴格把好采購關和檢疫關，從而導致實驗動物的來源復雜，存在一定的生物安全隱患。在選擇實驗動物供應商時，沒有充分了解動物供應商的資質，供應商魚龍混雜，在整個采購過程中，某些環節缺乏必要的跟蹤和監督。另外，采購的實驗動物沒有嚴格進行必要的隔離檢驗檢疫和隔離觀察飼養，部分動物也沒有經過免疫和消毒，導致動物個體攜帶有布魯氏桿菌。所以實驗動物的來源問題需要進行科學考證。

2.3密切接觸動物 進行動物疫病分析和實訓教學的過程中，農業高等院校的師生避免不了要與實驗動物近距離接觸，比如在進行動物解剖、動物微生物技術、動物外產科等課程的教學時， 這些環節難免會觸碰動物機體的皮膚、內部組織和分泌物，這無形中增加了感染的風險。

2.4實驗操作不規范 動物實驗過程中，每一個環節如果操作方法不規范，就很容易引發感染人畜共患病的風險。例如，一些缺乏經驗的高校老師和學生抓取動物時，由于方法不當而被動物咬傷或抓傷；或者由于沒有養成實驗操作的良好習慣，不穿手術服和不戴滅菌乳膠手套、口罩等情況，直接與實驗動物接觸。這些不規范的實驗操作存在著不可忽視的安全隱患，應引起重視。

3 布魯氏桿菌診斷方法

布魯氏桿菌的診斷方法有初步診斷法和實驗室診斷法，臨床上通過觀察動物流產、乳房腫脹的病理特征初步診斷，但是此方法不能作為診斷標準，因為布魯氏桿菌致病的癥狀復雜，難與其他疾病區別，比如流產死胎、乳房腫脹等，其他有些疾病也伴隨有這種癥狀，還需要結合實驗室診斷法進行綜合診斷。實驗室診斷法主要有細菌學診斷、血清學診斷、變態反應診斷，常用的一般是血清學診斷、變態反應診斷。

3.1細菌學診斷 采用母畜的陰道分泌物、乳汁、血液、精液、尿液等作為病料涂片，做柯氏染色鏡檢，若發現紅色細小的球狀或短小桿菌，再結合臨床癥狀可做出初步的診斷。但是此法檢出率不高，一般比較少用。

3.2免疫學診斷 血清學診斷方法是免疫學診斷方法中最常用的檢測方法，機體在感染布魯氏桿菌7～15 h后血清中可出現抗體，通過對血清中抗體的測定可以作為檢測和診斷布魯氏桿菌病的一種行之有效方法[6]。農業高校實訓教學用得較多的主要包括琥紅平板凝集試驗、全乳環狀試驗、試管凝集試驗、補體結合試驗等。

3.2.1琥紅平板凝集試驗 琥紅平板凝集試驗是國際貿易中牛、羊、豬布魯氏桿菌病檢測的指定試驗，對牛、羊布魯氏桿菌病的檢疫可用琥紅平板凝集試驗進行初篩。其原理是抗原抗體反應，在制備的動物被檢血清旁滴加布魯氏桿菌病琥紅抗原，用牙簽混勻4 min后，出現凝集現象者判為陽性。該方法操作方便快捷，成本低，適用于現場或牧區大群檢疫。

3.2.2全乳環狀試驗 全乳環狀試驗方法適用于泌乳期的奶畜布病初篩。其原理也是抗原抗體反應，操作方法為取被檢乳樣于滅菌試管內，滴加布魯氏桿菌全乳環狀抗原，混勻充分37～38 ℃水浴加熱60 min觀察結果，若乳脂層出現紅色環帶，可判定為陽性。該方法采樣方便，容易操作，適用于大規模奶牛初篩，可節省大量人工和時間成本，但不適用于患有乳房炎的奶畜檢測。

3.2.3試管凝集試驗 試管凝集試驗是布病的確診試驗之一。由于該方法準確性高，能夠定量測定抗體水平，在實際運用中，經過琥紅平板凝集試驗或全乳環狀試驗初步篩查后，結果出現陽性的動物再結合試管凝集試驗做出最終的確診。但是該方法操作復雜，耗時長，不適用于現場大規模疫病的快速診斷。

3.2.4補體結合試驗 補體結合試驗也是布病確診試驗的一種常用方法。試驗原理主要通過觀察紅細胞溶血與否來判斷被檢血清中有無待檢抗體，也是抗原抗體反應的試驗類型。對于琥紅平板凝集試驗或全乳環狀試驗初篩陽性的均可用補體結合試驗進行再確診。雖然該方法敏感性較高、特異性強，但由于溶血素制備困難，試驗操作繁雜，時間長，難以在實際檢測工作中推廣。

3.3變態反應診斷 動物感染布魯氏桿菌20～25 h以后，出現變態反應陽性，對于慢性病例的檢出率高，所以常用于動物的大規模檢疫，主要用于綿羊、山羊和豬。檢測方法是于羊尾根皺褶部或豬耳根部皮內注射布魯氏桿菌水解素0.2 mL，24 h和48 h觀察一次，若注射部位紅腫，即可確診為陽性反應。

4 布魯氏桿菌預防的措施

4.1加強宣傳教育樹立自我保護意識 農業高等院校師生經常與牛、羊、豬等實訓動物接觸，增加了布魯氏桿菌感染的風險。鑒于此，為提高廣大師生的防范意識，做到防患于未然，可以通過如下兩種方式積極宣傳學習布病防治的基本知識，認識布病的危害。第一，教師借助課堂言傳身教，系統全面地給學生灌輸布病防治的知識；第二，學校通過官網、宣傳欄、知識競賽、主題活動等途徑，有效宣傳布病的知識，甚至可以專門做成一個專題板塊，進行歸納分類，便于受眾者學習，從而提高相關人員的布病防治素質，養成科學的預防習慣。

4.2嚴格選購實訓動物把好檢疫關 降低布病風險最好的辦法是自繁自養，但是由于場地、環境等因素的影響，自繁自養不一定能滿足教學、科研的需求，所以需要不定期購買實訓動物。那么，如何選購健康安全的實訓動物呢。第一，選購前需了解該動物所在地是否為疫區，杜絕疫區的動物產品及飼料；第二，進行嚴格的產地檢疫，隔離觀察2個月，確保健康后才能進場，期間每年進行2次血清學檢疫。

4.3科學飼養定期免疫接種 實訓動物的飼養管理要做到科學規范，建立健全的飼養管理制度，具體做到以下兩點：第一，給實訓動物一個適宜的生活環境，做好圈舍的防寒保暖、通風衛生、干濕合理，以及動物飼養密度適中，確保實訓動物擁有足夠的活動空間；第二，保證飼料營養和飲水的供給，做到營養齊全均衡和水質清潔衛生，從而增強實訓動物的抵抗力。

4.4嚴格消毒防止疫病傳播 消毒是防范布病傳播的主要措施。在飼養、實訓的過程中，需要規范消毒制度，定期定點做好消毒工作。及時清理動物糞便、尿液和更換墊草，對病死動物嚴格進行無害化處理；定期對圈舍、實訓室、器械工具消毒。只有有效做好消毒工作，才能防患于未然，減少布病感染和傳播的風險。

4.5規范實訓操作養成良好習慣 動物實訓操作課程是農業院校動物相關專業重要的教學環節，通過實訓操作，增強學生的動手能力，進一步鞏固理論知識，從而達到理論實踐相結合的良好教學效果。由于在動物實訓操作過程中，師生不可避免要與動物、微生物等打交道，所以規范實訓操作極其重要。如何規范實訓操作，可從以下三個方面著手：第一方面是學校層面，學校需落實實訓場所的規劃建設、實訓經費的投入、實訓儀器設備的更新維護，保證硬件和軟件設施的正常運行；第二方面是師生層面，教師需時刻提升教學業務水平，系統熟練掌握實訓儀器設備的使用，教會學生正確的實訓操作方法，第三方面是在實訓教學過程中，師生時刻要做好個人防護，必須穿戴防護服、鞋套、口罩、乳膠手套、一次性帽子等個人防護用品。

綜上所述，布魯氏桿菌是一種較為嚴重的人畜共患傳染病，嚴重威脅著人類和動物的生命健康，所以涉農高校在實訓教學過程中一定要注重對該病的科學檢測和防控，從而保證農業高校師生和實訓動物的健康，安全有效的完成教學和科研工作。