溫州水牛凍精保種過程及結果

李良君，李挺志

(1.平陽縣鬧村鄉人民政府農業公共服務中心，浙江 平陽 325405；2.平陽縣挺志溫州水牛乳業有限公司)

溫州水牛是經過漫長的自然選擇和人工選擇培育出來的優秀地方品種，已有六七千年的養殖歷史，在國內外享有盛名。溫州水牛體型較小，飼料消耗較低，但具有潛在的乳用性能，以其產奶量高、鮮奶含脂率高而著稱于世。溫州水牛奶含脂率,在泌乳前期、中期、后期分別達到10.9%、9.55%、8.87%,平均為9.77%,是黑白花奶牛的3倍多。溫州水牛1988年收錄于《中國牛品種志》，2006年列入《國家畜禽遺傳資源保護名錄》，溫州水牛作為奶水牛有著很好的開發前景。

平陽縣挺志溫州水牛乳業有限公司種牛場于2012年5月通過農業部評審，認定為國家級溫州水牛保種場。該保種場的溫州水牛三代內無近親血緣關系，血緣比較純正，而且保種場所處南岙村及周邊環境貼近原生態，對溫州水牛保種起到了保障性作用。近年來，溫州水牛作為耕田的役用功能逐步淡化，純種數量直線下降，面臨遺傳基因消失的危險，2019年農業農村部全國畜牧總站專家來到該保種場，采集純種溫州水牛精液，并制成凍精移送國家級家畜基因庫進行長期保存，對溫州水牛的遺傳資源起到了雙重保護的作用。現將溫州水牛的凍精保種過程及結果總結如下：

1 采精前準備

1.1供體公牛的選擇 挑選供體公牛10頭，條件如下：符合溫州水牛品種特性、特征，系譜清楚，三代以內無血緣關系；健康，無傳染性疾病和遺傳疾病，有檢疫證明。

1.2供體公牛信息檔案 包括供體信息(來源地、群體情況等)、系譜、生產性能測定記錄、電子照片等。

2 采精過程

2.1供體公牛營養保障 采精期間，每頭公牛每天飼喂2 kg以上全價精料、1個雞蛋、2 kg青綠草料，直到每頭公牛制作凍精不少于300劑。

2.2臺牛準備 選擇有黃體的空懷母牛，產犢牛后50 d左右，注射氯前列烯醇(PG)0.2 mg進行人工催情，一般注射后1-2 d發情。采精前將發情母牛固定在采精架上，清洗干凈外陰、臀部，把尾巴固定。

2.3采精用具準備

2.3.1將采精用具有規則地擺放在操作臺上，采精器潤滑劑(凡士林與液體石蠟1∶1)。每次用前，用水浴煮沸消毒后，置于62～65 ℃水浴鍋內待用。也可使用商品化的專用潤滑劑。

2.3.2采精器用75%的酒精棉球擦試消毒，無消毒劑殘留后注入38 ℃左右溫水，并用消毒紗布將采精器口包裹好，放置于44～46 ℃的恒溫箱內。采精前將采精器從恒溫箱中取出，套上保護套，從活塞孔打氣使采精器口呈三角形狀，涂擦適量潤滑劑，采精器加上保護套。青年公牛用光面內胎的采精器，成年公牛可用紋狀面內胎的采精器。采精時采精器內溫度控制在38～40 ℃之間，根據季節和不同的牛，溫度可做適當調整，最高不得超過43 ℃。

2.4采精

2.4.1用溫水沖洗公牛包皮及其周圍表面污物，氣溫高時可先用清水將公牛全身沖洗干凈，擦干后用溫0.1%髙錳酸鉀溶液清洗腹部和包皮，特別是包皮部，再用溫水清洗、擦干。陰毛過長時應適度修剪。

2.4.2采精前先進行2次～3次充分的空爬，使之有良好的性欲后開始采精。采精員右手持采精器，站在公牛右后方，當公牛起跳，前肢爬上臺牛時，迅速向前用左手托著公牛包皮，右手持采精器，采精器口斜向下方，左右手配合將公牛陰莖自然地導入采精器口內，公牛往前一沖即完成射精，公牛隨即而下，采精員右手緊握采精器，隨公牛陰莖而下，待公牛前肢落地，陰莖縮回后緩慢地把采精器退出；立即將采精器口斜向上方，打開活塞放氣，使精液盡快地流入集精管內，然后小心地取下集精管，迅速從專用的傳遞窗口送至精液處理室。安裝好的采精器只能使用一次，不得重復使用。公牛每周一般采精兩次，視年齡、身體狀況可增減次數；每次可連續采精兩回(間隔時間30 min以上)，采精充分(集精管內泡沫豐富，精液體量多且稠密)的公牛一般不宜連續采精。

3 精液稀釋

精子活力和密度檢查后，根據檢查結果用34～36 ℃的稀釋液進行稀釋，稀釋比例以每支凍精有效精子800個為宜；稀釋后放室溫30～40 s后分裝細管。

4 精液平衡及冷凍

4.1平衡 分裝后的細管先用紗布或毛巾包裹1～2層，再放入4～5 ℃冰箱內平衡2～3 h。冰箱放置在干燥陰涼處，避免強光高溫影響。

4.2冷凍 采用自制的冷凍箱或泡沫盒冷凍細管，冷凍箱的深度應在50 cm以上。第一步先薰蒸細管，距液氮面的距離一般3～5 cm。細管放入后通過開啟蓋子或攪動液氮來調節溫度，能升降冷凍架更好。細管溫度一般控制在-80～-120 ℃。薰蒸細管8 min后投入液氮中，標記包裝后放入液氮罐保存。溫度調控主要起決于自制冷凍箱或泡沫盒保溫效果，細管離液氮面的距離和一次冷凍的細管數。

5 結果

最終，制作成0.25 mL細管凍精3200劑。經全國畜牧總站專家團隊解凍精液和一系列的常規檢測，保種冷凍精液解凍活力平均為43.3%,符合國家級家畜基因庫收藏要求(活力≥30%)。

6 小結

現在，生物技術保種已經成為戰略性舉措，保存的家畜遺傳物質具有長遠、潛在和可持續的利用價值。主要包括以下幾個方面：(1)保存的遺傳物質不會受到自然災害、戰爭、疫病等的影響，可以最大限度地防止基因丟失；(2)可以利用保存的遺傳物質對畜禽遺傳資源高繁殖力、抗病、抗逆、生態適應性等優異基因進行挖掘，為新品種和新品系培育提供育種素材；(3)作為戰略性遺傳物質進行長期保存儲備，為今后的科學技術研究和高新技術的利用可持續性提供必要的素材，例如可以作為克隆和轉基因的遺傳材料儲備。