乳腺癌組織AGR-2的表達及其臨床意義

范小慶　周國鳳　陶珊珊　熊秋云

【摘要】 目的：探討AGR-2蛋白在乳腺浸潤性癌組織中的表達及其與臨床病理分子分型特征之間的關系。方法：收集2020年1-8月本院手術治療的150例乳腺浸潤性導管癌患者的臨床資料。應用免疫組織化學EliVison二步法檢測150例乳腺浸潤性導管癌組織的精氨酸酶-2（AGR-2）、人表皮生長因子受體2（HER2）、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和細胞增殖指數（Ki-67）的表達，分析AGR-2在乳腺浸潤性癌組織中的表達水平，及其與乳腺癌患者臨床病理分子分型指標的關系。結果：在150例乳腺癌組織中，AGR-2蛋白低表達者92例，高表達者58例;而對應的150例癌旁組織中AGR-2蛋白均為低表達。乳腺癌組織學分級高者AGR-2表達水平高于組織學分級低者，淋巴結有轉移者AGR-2表達水平高于淋巴結無轉移者，ER陰性者AGR-2表達水平高于ER陽性者，Ki-67高表達者AGR-2表達水平高于Ki-67低表達者，差異均有統計學意義（P<0.05）。AGR-2蛋白表達水平在患者的年齡、腫瘤大小、PR及HER2狀態間比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。結論：AGR-2蛋白在乳腺浸潤性癌中有較高表達，AGR-2高表達與組織學分級、淋巴結轉移、ER、Ki-67的表達有關，但與乳腺癌的生存預后關系有待進一步研究。

【關鍵詞】 乳腺癌 AGR-2蛋白 淋巴結轉移 ER

Expression of AGR-2 in Breast Cancer and Its Clinical Significance/FAN Xiaoqing， ZHOU Guofeng， TAO Shanshan， XIONG Qiuyun. //Medical Innovation of China， 2021， 18（15）： -123

[Abstract] Objective： To investigate the expression of AGR-2 protein in breast cancer， and its relationship with clinicopathologic and molecular features. Method： The clinical data of 150 cases of invasive ductal carcinoma of breast treated by our hospital from January to August 2020 were collected. The expression of arginase-2 （AGR-2），

human epidermal growth factor receptor 2 （HER2）， estrogen receptor （ER）， progesterone receptor （PR） and cell proliferation index （Ki-67） were detected by two-step immunohistochemistry （EliVison）. The expression level of AGR-2 in invasive breast cancer tissue and its relationship with the clinicopathological molecular classification index of breast cancer patients were analyzed. Result： In 150 cases of breast cancer， the expression of AGR-2

protein was low in 92 cases and high in 58 cases. The expression of AGR-2 protein was low in 150 adjacent tissues. The expression level of AGR-2 in breast cancer with high histological grade was higher than that with low histological grade， the expression level of AGR-2 in patients with lymph node metastasis was higher than that in patients without lymph node metastasis， the expression level of AGR-2 in ER negative patients was higher than that in ER positive patients， the expression level of AGR-2 in Ki-67 high expression group was higher than that in Ki-67 low expression group， the differences were statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in the expression level of AGR-2 protein among patients’ age， tumor size， PR and HER2 status （P>0.05）. Conclusion： AGR-2 protein is highly expressed in invasive breast cancer. The high expression of AGR-2

is related to histological grade， lymph node metastasis， ER and Ki-67 expression， but its relationship with survival and prognosis of breast cancer needs further study.

[Key words] Breast cancer AGR-2 Lymph node metastasis ER

First-author’s address： Third Municipal Hospital， Nanchang 330009， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.15.029

乳腺癌發病率逐年升高，已經成為女性最常見的惡性腫瘤，盡管乳腺癌的治療取得了巨大的進步，但由于其生物學特性復雜、復發轉移率高，約30%以上的患者死于復發和遠處轉移[1-2]。因此，更深入地研究與乳腺癌發生發展相關的因子及分子機制對乳腺癌的早期診斷、療效預測和預后判斷具有重要意義。

精氨酸酶-2（arginase-2， ARG-2）是一種雙核含錳的金屬酶，基因定位于染色體14q24.1～24.3，廣泛分布于腦、乳腺、前列腺和腎臟等臟器，在生物體的新陳代謝中起著十分重要的作用，并能調節機體免疫功能[3-6]。有研究表明，ARG-2在人類多種惡性腫瘤中呈異常表達，與癌癥有著密切的關聯，然而ARG-2在乳腺癌組織中的表達和意義尚不明確[7-8]。為此，本課題旨在研究ARG-2在人乳腺浸潤性癌中的表達情況，探討其與乳腺癌臨床病理分子分型和預后的相關性。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2020年1-8月本院手術治療的150例乳腺浸潤性導管癌患者的臨床資料。（1）納入標準：①女性;②可手術;③經常規石蠟切片病理確診為乳腺浸潤性導管癌;④進行了前哨淋巴結活檢;⑤術前未接受過化療、內分泌治療和放療。（2）排除標準：①妊娠或哺乳期;②合并其他部位的惡性腫瘤。本研究得到患者的知情同意和醫院倫理委員會批準。

1.2 方法 免疫組織化學實驗及結果判定：采用EliVison二步法進行免疫組織化學檢測，具體步驟參照免疫組織化學試劑盒（上海基因科技有限公司）說明書進行。對所有乳腺癌患者的AGR-2、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體2（HER2）和細胞增殖指數（Ki-67）表達進行檢測，所有標本經10%甲醛固定，常規石蠟包埋，4 μm連續切片。陰性對照用PBS代替一抗，用正常乳腺上皮組織作陽性對照。主要試劑：AGR-2購自美國Epitomics公司，ER、PR、HER2、Ki-67及相關試劑盒均購自北京中杉生物技術有限公司。由兩位中級以上病理師采用雙盲法評定染色結果。

1.3 觀察指標與判定標準 觀察AGR-2、ER、PR、HER2及Ki-67在乳腺浸潤性癌組織中的表達，分析AGR-2的表達與年齡、腫瘤大小、組織學分級、淋巴結轉移等臨床病理學的關系，及其與ER、PR、Ki-67和HER2表達的相關性。（1）AGR-2蛋白陽性反應為棕黃色顆粒定位于細胞膜和細胞質，由兩位中級以上病理醫師采用雙盲法評定染色結果。每張切片在400倍放大光學顯微鏡下隨機選擇5個視野，計數1 000個癌細胞，計算染色細胞陽性率。采用半定量積分法對癌細胞染色強度和染色細胞陽性率進行評分。染色強度分為4個等級：棕褐色為3分，棕黃色為2分，淺黃色為1分，無著色為0分[9]。染色細胞陽性率分為5個等級：81%～100%為4分，51%～80%為3分，11%～50%為2分，1%～10%為1分，無染色細胞為0分[10]。將兩組評分相乘所得值，分為2個等級：0～4分為低表達，5～12分為高表達。（2）ER和PR陽性判斷標準：腫瘤細胞無細胞核棕黃染色或<1%的細胞核較弱棕黃染色為陰性，≥1%的細胞核棕黃染色則為陽性。（3）HER2陽性判斷標準：細胞膜棕黃染色為陽性。無細胞染色或<10%的細胞膜較弱染色為（-）;>10%的細胞膜部分較弱染色為（+）;>10%的細胞膜完全較弱到中等染色為（++）;>10%的細胞膜完全強染色為（+++）[11-13]。對HER2（++）者進一步進行FISH檢測。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用χ檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者的一般資料 共獲得150例乳腺癌患者的臨床病理資料（包括癌及癌旁組織）。年齡29～68歲，中位年齡48歲，年齡≤35歲者28例（18.7%），>35歲者122例（81.3%）。腫瘤≤2 cm者45例（30.0%），>2 cm者105例（70.0%）。

2.2 AGR-2蛋白的表達與乳腺癌臨床病理指標的關系 乳腺癌組織學分級高者AGR-2表達水平高于組織學分級低者，淋巴結有轉移者AGR-2表達水平高于淋巴結無轉移者，ER陰性者AGR-2表達水平高于ER陽性者，Ki-67高表達者AGR-2表達水平高于低表達者，差異均有統計學意義（P<0.05）。AGR-2蛋白表達水平在患者的年齡、腫瘤大小、PR及HER2狀態間比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.3 AGR-2蛋白在乳腺浸潤性導管癌中的表達情況 應用免疫組織化學法檢測AGR-2在150例乳腺癌及其對應癌旁乳腺組織中的表達情況，結果顯示：AGR-2陽性信號定位于細胞質;在150例乳腺癌組織中，AGR-2蛋白低表達者92例，高表達者58例;而對應的150例癌旁組織中AGR-2蛋白均為低表達。因此，AGR-2在乳腺癌組織中的表達水平明顯高于癌旁組織，見圖1。

3 討論

AGR-2是一種線粒體酶，基因定位于染色體14q24.1-24.3，廣泛分布于腦、肺、肝臟、前列腺和腎臟等臟器，其主要功能是促進人體新陳代謝，并調節免疫功能等[14-16]。有研究表明，AGR-2的異常表達與癌癥有著密切的關聯，在前列腺癌、肺癌、肝癌等腫瘤組織中高水平表達，其在腫瘤發生、發展中的角色成為新的研究熱點[17-18]。為了評定ARG-2對于人類癌癥的影響，該研究分析了超過2 000例歐美乳腺癌人群中的ARG-2表達水平，結果發現ARG-2高表達于特定乳腺癌類型，并與患者不良生存結局密切相關[19-21]。

本研究結果顯示，AGR-2在乳腺浸潤性癌組織中也存在異常表達，其表達水平在乳腺癌組織中明顯高于乳腺正常組織，且AGR-2表達強度與乳腺癌的組織學分級呈正相關，提示AGR-2可能與乳腺癌的不良生物學行為有關。乳腺浸潤性癌組織中AGR-2表達與細胞增殖標志物Ki-67表達正相關，間接提示了AGR-2異常表達可能參與了調節乳腺癌腫瘤細胞的增殖過程。研究結果發現，淋巴結轉移組AGR-2蛋白陽性表達高于淋巴結陰性組，因此提示 AGR-2蛋白在乳腺浸潤性癌組織中高表達與淋巴結轉移、TNM分期正相關。ER陰性、HER2過度表達的乳腺癌患者預后較差已成定論，本研究免疫組化檢測結果顯示，ER表達陰性者AGR-2表達顯著高于ER表達陽性者，而HER2過表達者AGR-2表達顯著高于HER2陰性者，因此推斷AGR-2高表達可能與乳腺浸潤性癌患者的預后較差有相關性。

臨床上根據乳腺癌ER、PR、HER2和Ki-67分子表達特征將乳腺癌分成4種亞型：導管型（Luminal型：ER+/PR+），預后良好、HER2過表達型（ER-、PR-、HER2+）、三陰型（TN型：ER、PR-、HER2-），預后較差。本組研究中Luminal型87例（58%），HER2過表達型34例（22.7%），三陰型29例（19.3%），其比例與文獻[19-21]報道的類似，進一步研究發現不同的乳腺癌亞型的AGR-2蛋白表達有一定區別，三陰型顯著高于Luminal型（P=0.01），可以推測AGR-2高表達可能與三陰型的乳腺癌患者預后較差有相關性。

本研究結果提示ARG-2蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中有較高的表達，AGR-2高表達與乳腺癌的增殖、分化、淋巴結轉移及TNM分期有著密切關系，ARG-2在評估乳腺癌侵襲性的及預測腫瘤的復發轉移方面具有一定的參考意義，但由于目前尚缺乏統一的ARG-2檢測標準和評估方案，ARG-2能否成為乳腺癌新的預測因子或治療靶點需要進一步研究。

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（收稿日期：2021-03-29） （本文編輯：姬思雨）