引起寧都黃雞支氣管栓塞病原菌的分離鑒定

鐘敏， 胡艷，邱光忠，蘇州，鐘如意，孔智偉 ，劉瑞平

(贛州市畜牧研究所，江西贛州341401)

支氣管栓塞是近年來肉雞群中流行的常見呼吸道疾病，以10～30 日齡肉仔雞為主要發病對象，病雞出現體溫升高、食欲減退、咳嗽、流涕、喘息、高度呼吸困難等癥狀，常急性死亡，秋末、冬春季節常發。該病主要通過呼吸道進行傳播，空氣中帶有病原體的塵埃和飛沫隨呼吸過程進入呼吸道引起雞只發病，常造成肉仔雞生長緩慢，料肉比升高，如不及時治療死淘率達到35%以上[1]。

2020 年贛州市某寧都黃雞養殖場發生了支氣管栓塞病，病雞表現精神沉郁、食欲廢絕，排黃白色、綠色稀薄糞便，剖檢可見病雞支氣管內有干酪樣纖維素性滲出物堵塞，肺臟水腫出血，肺泡內有泡沫樣或干酪樣物質，氣囊混濁、增厚，病死雞可見纖維素性肝周炎、纖維素性心包炎、腹膜炎。筆者采集病料進行了病原菌的分離鑒定，并對分離到的病原菌進行了耐藥性分析，為臨床防治提供指導。

1 材料與方法

培養基：營養肉湯培養基、營養瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基、伊紅美藍瓊脂培養基等，購自北京中海生物科技有限公司；微量生化管、藥敏試紙等購自杭州天和微生物試劑有限公司；鑒定血清與標準菌株：大腸桿菌標準抗O 血清購自中國獸醫藥品監察所。

2 診斷方法

2.1 病原菌鏡檢與分離純化

2.1.1 病料中的病原菌鏡檢。無菌采集9 只發病雞的肺、肝、心臟等實質器官，進行病料的觸片革蘭氏染色、鏡檢[2]。

2.1.2 分離培養及純化。將觀察到大量明顯細菌的病料樣品，分區劃線接種于營養瓊脂平板、伊紅美藍瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板上，37℃培養18～24h，挑取在麥康凱瓊脂平板上生長的單個紅色的典型菌落，在普通營養瓊脂斜面上進行純培養，37℃培養 18～24h。如此反復純化 3～4 代，直到獲得單菌落為止，挑取單個灰白色菌落進行涂片、干燥、固定后進行革蘭氏染色、鏡檢，觀察細菌的形態和染色特性[3]。

2.2 生化鑒定

取分離純化的單個菌落，分別接種各種細菌微量生化管進行生化鑒定，37℃培養24h。

2.3 血清型鑒定

將營養瓊脂平板上的純培養物用少量0.5%石炭酸生理鹽水洗下，制成菌懸液，121℃滅菌處理2h，破壞K 抗原，抗原和大腸桿菌標準抗O 血清各取一白金耳，在載玻片上作凝集試驗，同時抗原與生理鹽水進行反應作為對照，以排除自身凝集反應。通過對分離菌株作血清型的檢測，鑒定 O 血清型[4]。

2.4 耐藥性分析

無菌操作條件下分別將每個分離到的菌株挑取適量的純培養物接種于普通營養瓊脂斜面，37℃培養18～24h，再用滅菌生理鹽水將細菌洗下制成0.5 麥氏單位的菌懸液。用滅菌的涂布器將待檢病原菌均勻涂布在營養瓊脂平板上，采用紙片擴散法，進行藥敏試驗[5]。

3 結果

3.1 鏡檢與分離純化

3.1.1 鏡檢結果。對采集的支氣管栓塞發病雞病料直接觸片，用革蘭氏染色，鏡檢發現，9 份病例中有7 份觀察到大量散在的兩端鈍圓、無莢膜的革蘭氏陰性小桿菌，疑似大腸桿菌。

3.1.2 分離純化結果。將在顯微鏡下觀察到大量細菌的7 份病料樣品進行細菌分離，可分別在麥康凱培養基上培養出表面光滑、邊緣整齊、圓形、隆起的紅色菌落，在伊紅美藍瓊脂平板上培養出深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的菌落，經培養純化后獲得單菌落，共分離到7 株細菌，經涂片，革蘭氏染色，鏡檢，結果發現，分離株均為革蘭氏陰性的中等大小的桿菌，初步判定這些細菌為大腸桿菌。

3.2 生化試驗結果

分離到的7 個菌株均符合大腸桿菌的特征，發酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇、果糖，產氣產酸，不發酵蔗糖，VP 試驗陰性，MR 試驗陽性，三糖鐵底層產酸，產生靛基質，尿素酶試驗陰性，結果見表1。

3.3 血清型鑒定

經細菌分離培養及生化鑒定，所分離到的病原菌確定為大腸桿菌。應用微量平板凝集試驗鑒定分離株的O 抗原血清型，結果顯示均屬于O78血清型。

表1 分離株生化鑒定結果

3.4 耐藥性分析

耐藥試驗結果顯示，7 個分離株對頭孢西丁、頭孢吡肟高度敏感，對大多數抗生素耐藥，其中對強力霉素的耐藥性最強。結果見表2。

表2 7 株分離菌耐藥性試驗結果

4 討論

寧都黃雞是江西省優良地方雞種，支氣管栓塞是近年來該雞種常發的疫病之一，主要流行于季節交替時期。一般情況下，雛雞患病后死亡率較高，給養殖戶帶來一定的經濟損失。由于肉雞沒有明顯而完整的膈，其肺臟小巧，又與氣囊相通，病原微生物很容易沿著呼吸道進入肺和氣囊，導致氣囊發炎，而氣囊壁很薄，血管少，很多藥物在氣囊內難以有效停留發揮藥效，造成病程持久引發支氣管栓塞。另外，許多養殖場因為要為雞群保溫，經常緊閉門窗忽視通風，密閉的環境令雞舍內氨氣濃度越來越高，造成病原菌入侵呼吸道引發支氣管栓塞[6]。在生產實踐中養殖戶要加強對本病的防治，以減少損失，提高養殖經濟效益，可采用以下綜合防治措施：

一是處理好通風與保溫的關系。一般1～2 周齡以保溫為主，3～4 周齡時適當通風，4 周齡后以通風為主。另外，在進風口外側加一個可加溫的緩沖間是防止冷應激的好辦法。

二是加強飼養管理，搞好環境衛生、及時清糞，定期消毒，保持適宜的濕度，減少室內氨氣等有害氣體濃度；降低飼養密度，平衡營養，減少應激，提高抵抗力，盡量減少發病誘因。

三是科學免疫接種，飲水中添加電解多維，提高機體抵抗力，減少應激反應和混合感染，控制繼發感染。

四是藥物防治。許多研究報道表明，肉雞支氣管栓塞往往是多種疾病混合感染的結果，對發病病例進行病原的分離及鑒定發現，分離率較高的是H9 亞型禽流感病毒和不同血清型的禽致病性大腸桿菌[7]。疾病前期主要表現在呼吸道上，癥狀為支氣管栓塞，后幾天才會出現流感和大腸桿菌的癥狀。因此，治療上需采用聯合用藥，采取有效的抗病毒藥和敏感抗生素聯合用藥，可以起到較好的治療效果，大腸桿菌極易產生耐藥性，所以臨床治療最好使用經藥敏試驗篩選的敏感性藥物以合理的治療劑量作治療性用藥。本試驗通過對分離株進行耐藥性分析，篩選敏感藥物，同時結合抗病毒藥物使用，加強對癥治療，祛痰、平喘、降低體溫，使發病雞場疫情得到及時控制。