基于主成分分析和聚類分析的不同廠家維C銀翹片質量評價

崔新剛 王穎瑩

1.洛陽市婦幼保健院，河南 洛陽 471000；2.洛陽市食品藥品檢驗所，河南 洛陽 471000

維C銀翹片為《中國藥典》2015年版收載的中西藥復方制劑，由金銀花、連翹、牛蒡子、蘆根、桔梗及維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和薄荷素油制成，具有疏風解表，清熱解毒之功效[1]。用于外感風熱所致的流行性感冒，癥見發熱，頭痛，咳嗽，口干，咽喉疼痛。研究表明不同廠家維C銀翹片存在較大的質量差異[2]。目前，維C銀翹片質量評價方法多采用藥典收錄的HPLC法，方法較為繁瑣，本研究同時測定維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏含量，方法簡單、快速。藥典法測定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷含量，結合聚類分析和主成分分析，探討不同廠家維C銀翹片質量差異，旨在為其質量控制提供依據。

1 材料

1.1 儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀，包括G1315B型二極管陣列檢測器、自動進樣器(美國安捷倫科技有限公司)；KQ-100ES超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；賽多利斯BSA8201電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；易普易達Smart-S2型超純水機(南京易普易達科技發展有限公司)。

1.2 藥品與試劑 綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201713)；牛蒡苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110819-201807)；對乙酰氨基酚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：批號:100018-201508)；馬來酸氯苯那敏對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100047-201606)；維生素C對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100425-201804)。10批樣品分別為貴州的A廠(批號：190906；191001)、廣東的B廠(批號：190904；190702)、廣西的C廠(批號：181202；190904)、云南的D廠(批號：180605；180801)、江蘇的E廠(批號：20190106；20181103)；乙腈為色譜純(天津天津市科密歐化學試劑有限公司)；磷酸為分析純(國藥集團化學試劑有限公司)。

2 方法與結果

2.1 綠原酸的含量測定

2.1.1 色譜條件 參考《中國藥典》及相關文獻[3]，通過多次實驗驗證，最終確定色譜條件為，色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流動相：乙腈-0.4%磷酸(13∶87)；進樣量：10 μL；檢測波長：327 nm。

2.1.2 對照品制備 精密稱取綠原酸對照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含對照品 30 μg 的溶液，即得對照品溶液。

2.1.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細粉，取約1 g細粉，置于具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱定重量。將所制得供試品溶液進行超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再次稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，置棕色瓶中，即得供試品溶液。

2.1.4 樣品測定 按2.1.3制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液和對照品溶液各10 μL，按2.1.1色譜條件，分別測定10個樣品中的綠原酸，以外標法計算含量。色譜圖如圖1所示，測定結果見表1。

表1 不同廠家指標成分含量測定結果(mg/片)

2.2 牛蒡苷的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流動相：乙腈-5 mL/L冰醋酸溶液(18∶82)；進樣量：10 μL；檢測波長：280 nm。

2.2.2 對照品制備 精密稱取牛蒡苷對照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含對照品 50 μg 的溶液，即得對照品溶液。

2.2.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細粉，取0.5 g細粉，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇約45 mL，將所制得供試品溶液進行超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，離心機離心，取上清液，即得供試品溶液。

2.2.4 樣品測定 按2.1.4樣品測定方法。色譜圖如圖2所示，測定結果見表1。

2.3 維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流動相：0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.0，含1%三乙胺)-乙腈(75∶25)；進樣量：10 μL；檢測波長：260 nm。

2.3.2 對照品制備 分別準確稱取維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏對照品適量，以流動相溶解，置于同一50 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，制得含維生素C 103 μg/mL，對乙酰氨基酚102 μg/mL，馬來酸氯苯那敏218 μg/mL的混合對照品溶液。

2.3.3 供試品制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細粉，稱取適量(約相當于1片藥物的質量)，置于100 mL容量瓶中，加流動相適量，將所制得供試品溶液進行超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.3.4 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定。色譜圖如圖3所示，測定結果見表1。

2.4 主成分分析 主成分分析是利用降維的思想，在損失最少信息的前提下把多個指標轉化為幾個綜合指標的多元統計方法[4]。從不同廠家維C銀翹片中有效成分含量主成分分析結果可得，前2個主成分分析的累積方差貢獻率分別達到65.608%、90.593%，表明前2個主成分可以解釋分類信息的90.593%，能夠反映不同廠家維C銀翹片的質量，結果見表2和圖4。由圖4可知不同生產廠家的維C銀翹片分為3類，編號3、4、7和8為一類，編號1、2、9和10為一類，5和6為一類。

2.5 聚類分析 聚類分析是用距離來測定樣品之間的相似程度，為相似樣品歸類的最常用方法，常用于中藥質量評價[5-6]。本研究以維C銀翹片中的有效成分的含量結果為變量，運用SPSS 18.0 統計軟件，以平均Euclidean距離為度量標準，采用組間聯接的方法對10批樣品進行系統聚類分析，結果見圖5。在組間距為25時，將10個批次樣品分為3類，編號3、4、7和8為一類，編號1、2、9和10為一類，5和6為一類。該結果與主成分分析結果一致。

表2 主成分特征值和貢獻率

4 討論

4.1 不同廠家維C銀翹片中西藥成分分析 藥典規定維C銀翹片每片含維生素C 49.5 mg、對乙酰氨基酚105 mg、馬來酸氯苯那敏1.05 mg。每片含維生素C應為標示量的90.0%～110.0%，即44.55～54.45 mg，每片含對乙酰氨基酚應為標示量的90.0%～110.0%，即94～115.5 mg，每片含馬來酸氯苯那敏應為標示量的85.0%～115.0%，即0.8925～1.2075 mg。經檢測發現5個廠家藥品中3種成分含量均符合規定，但結果均在規定范圍的下限，分析原因可能是生產廠家在符合藥典規定的前提下采用接近下限投藥量來生產藥品從而減少生產成本。

4.2 不同廠家維C銀翹片中中藥成分分析 藥典規定每片含綠原酸不得少于1.5 mg，含牛蒡苷不得少于2.5 mg，大部分廠家的檢測結果均符合規定，但個別廠家的檢測結果中綠原酸的含量卻低于規定量。本研究認為該種藥物需增加金銀花藥材成分的含量測定，從而更有效地控制該種藥品的生產工藝，保證藥物療效。

4.3 檢測波長的確定 對維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏進行紫外掃描，在200～400 nm范圍內掃描，維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的最大吸收波長分別為245、249和260 nm。馬來酸氯苯那敏在該制劑處方中所占含量較少，因此選擇260 nm作為三種成分的共同檢測波長，在此檢測波長下，維生素C和對乙酰氨基酚也具有較大吸收，檢測靈敏度足以達到分析要求[7]。

5 結論

研究結果表明不同企業生產維C銀翹片質量有差異，主要因為生產工藝和生產原料的不同，為確保藥品的臨床療效和安全，不同廠家應嚴格把關原料的質量和穩定、規范的生產工藝。本研究所建立的HPLC法測定維C銀翹片指標成分含量，方法簡單、快速，通過主成分分析和聚類分析評價不同生產企業樣品質量，為維C銀翹片的質量評價提供了客觀數據和參考方法。