采用免疫透射比濁法對疑似肝腎疾病患者進行血清視黃醇結(jié)合蛋白檢測的意義

劉志偉，陳書恩★，吳小花

（1.深圳市羅湖醫(yī)院集團醫(yī)學(xué)檢驗中心，廣東 深圳 518021;2. 深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院檢驗科，廣東 深圳 518021）

臨床上常見的肝腎疾病有肝炎、肝硬化、肝癌、腎小球腎炎、糖尿病腎病、腎功能衰竭等。有研究資料顯示，采用免疫透射比濁法對疑似肝腎疾病患者進行血清RBP 檢測診斷其病情的準(zhǔn)確率較高[1]。在本次研究中，筆者主要探討采用免疫透射比濁法對疑似肝腎疾病患者進行RBP 檢測的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對象是2019 年7 月至11 月期間某醫(yī)院收治的50 例肝病患者、50 例腎病患者及在該院進行體檢的50例健康人。將50 例肝病患者設(shè)為A 組。將50 例腎病患者設(shè)為B 組。將50 例健康人設(shè)為C 組。在A 組研究對象中，男女的比例為30:20 ；其年齡為27 ～81 歲，平均年齡為（54.15±6.23）歲；其中有25 例急性肝炎患者，有17 例肝硬化患者，有8 例肝癌患者。在B 組研究對象中，男女的比例是27:23 ；其年齡為27 ～80 歲，平均年齡為（53.84±6.20）歲；其中有24 例腎小球腎炎患者，有16 例糖尿病腎病患者，有10 例腎功能衰竭患者。在C 組研究對象中，男女的比例為28:22 ；其年齡為25 ～81 歲，平均年齡為（53.58±6.19）歲。三組研究對象的一般資料相比，P ＞0.05，具有可比性。

1.2 方法

1）采用免疫透射比濁法對三組研究對象進行血清RBP檢測，方法為：檢測使用的儀器為全自動生化檢測儀。在清晨采集研究對象的空腹靜脈血4 ml 作為樣本。將研究對象的靜脈血進行離心后獲取4 μl 的血清。在血清樣本中添加240 μl 的試劑A1（由廠家提供），然后放置在37℃的環(huán)境下進行孵育，連續(xù)孵育16 個循環(huán)，并讀出第一點吸光值B1。然后，在血清樣本中添加50 μl 的試劑A2（由廠家提供），在37℃的環(huán)境下進行孵育，連續(xù)孵育16 個循環(huán)，并讀出第二點吸光值B2。待測血清的吸光值B=B2-B1。血清RBP 的水平= 〔（B2-B1）/ 校準(zhǔn)品吸光值〕 ×RBP 校準(zhǔn)濃度。2）進行空白試驗的方法為：將濃度為0.9% 的生理鹽水作為樣本，按照上述檢測方法連續(xù)檢測三次，并計算樣本的吸光值。3）進行精密度試驗的方法為：根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）規(guī)定，分別取低、中、高三個濃度的血清樣本，按照上述檢測方法重復(fù)檢測20 次，連續(xù)檢測20 d。4）進行回收試驗的方法為：獲取新鮮血清一份，分別添加三個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品（由廠家提供），然后按照上述測定方法對標(biāo)準(zhǔn)樣品進行測定。5）進行穩(wěn)定性試驗的方法為：在第0 d、第5 d、第10 d、第20 d、第30 d，對各項參數(shù)均相同的樣本進行RBP 測定。檢測時，分別在2 ～8℃開瓶放置樣本，在2 ～8℃閉瓶放置樣本，在37℃熱破壞樣本的穩(wěn)定性（在第一次校準(zhǔn)儀器后對樣本進行檢測，檢測時不再進行儀器校準(zhǔn)，直至檢測失控）。每天檢測結(jié)束后，及時為樣本擰緊瓶蓋，將樣本密封保存。6）進行干擾性試驗的方法為：選取濃度已知的樣本，加入三種不同濃度的膽紅素、三酰甘油、血紅蛋白，然后對樣本進行檢測，觀察檢測的結(jié)果是否受到干擾。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

對本次研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s ）表示，采用t 檢驗，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。以P ＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對象血清RBP 的水平

B 組研究對象血清RBP 的水平高于C 組研究對象，C組研究對象血清RBP 的水平高于A 組研究對象，P ＜0.05。詳見表1。

表1 三組研究對象血清RBP 的水平（mg/L，± s ）

表1 三組研究對象血清RBP 的水平（mg/L，± s ）

C 組 50 50.11±12.79 A 組 50 21.91±9.72急性肝炎患者 25 25.76±9.21肝硬化患者 17 20.17±9.08肝癌患者 8 19.81±10.87 B 組 50 90.58±19.44腎小球腎炎患者 24 88.67±19.54糖尿病腎病患者 16 94.78±20.13腎功能衰竭患者 10 88.28±18.65

2.2 進行精密度試驗的結(jié)果

進行精密度試驗的結(jié)果顯示，不同濃度血清樣本的精密度相比，P ＜0.05。詳見表2。

表2 進行精密度試驗的結(jié)果

2.3 進行回收試驗的結(jié)果

進行回收試驗的結(jié)果顯示，三個不同濃度樣本的回收濃度及回收率相比，P ＜0.05。詳見表3。

表3 進行回收試驗的結(jié)果

2.4 進行穩(wěn)定性試驗的結(jié)果

進行穩(wěn)定性試驗的結(jié)果顯示，本次研究使用的試劑具有較好的穩(wěn)定性。詳見表4。

表4 進行穩(wěn)定性試驗的結(jié)果

2.5 進行干擾試驗的結(jié)果

進行干擾試驗的結(jié)果顯示，對樣本進行血清RBP 檢測時，樣本中的血紅蛋白≤4 g/L、三酰甘油≤10 mmol/L 及膽紅素≤420 μmol/L 對檢測結(jié)果無干擾。

3 討論

血清RBP 是維生素A 的轉(zhuǎn)運蛋白。血清RBP 可與甲狀腺素結(jié)合前白蛋白形成復(fù)合物[2-3]。健康人體內(nèi)多余的RBP 可被腎臟代謝。但腎病患者體內(nèi)多余的RBP 則不能被腎臟代謝完全。因此，血清RBP 的水平是評估腎病患者病情的重要指標(biāo)之一[4]。有研究資料顯示，肝病患者血清RBP 的水平可出現(xiàn)下降。因此，血清RBP 的水平可作為評估肝病患者病情的指標(biāo)之一。目前，臨床檢測血清RBP的方法包括免疫透射比濁法、放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫法、免疫電泳等[5]。其中免疫透射比濁法是臨床上檢測血清RBP 的主要方法。采用免疫透射比濁法測定樣本時通過測定樣本的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品進行對照，即可計算出樣本中抗原的含量[6]。有研究資料顯示，采用免疫透射比濁法測定血清RBP 具有操作簡單、安全性高、對檢測設(shè)備的要求比較低、環(huán)保、檢測結(jié)果比較準(zhǔn)確等優(yōu)點[7]。但有研究指出，采用免疫透射比濁法檢測血清RBP 時對抗體的純度及特異性有較高的要求[8]。

本次研究的結(jié)果證實，采用免疫透射比濁法對肝腎疾病患者進行血清RBP 檢測可準(zhǔn)確診斷其病情。