系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清炎癥因子水平檢測價值的臨床研究

張園媛，粟 濤，劉 梅，胡玉海

武漢市漢口醫(yī)院檢驗科，湖北武漢 430015

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)為一種常見的多器官損傷性自身免疫性炎性疾病，但其致病機制仍不明確。研究顯示，SLE病因復雜，與遺傳、環(huán)境、機體免疫狀況等多種因素密切相關(guān)[1]。隨著對SLE病因及致病機制的深入研究，發(fā)現(xiàn)機體免疫細胞的異?；顒邮荢LE發(fā)病及病情加重的重要因素[2]。因此，在治療及監(jiān)測SLE病情時，除了檢測相關(guān)自身抗體譜外，細胞因子水平的檢測也具有重要意義[3]。因此，為進一步探究炎癥因子在SLE患者中的水平變化，本研究選擇三類在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用的細胞因子，檢測其在SLE患者和健康對照者水平變化，探究其與疾病嚴重程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取武漢市漢口醫(yī)院2018年1月至2019年5月在本院就診的SLE患者218例作為研究對象，其中男性9例，年齡35～52歲，平均(44.7±3.8)歲；女性209例，年齡20～57歲，平均(37.1±6.9)歲。同期選擇來本院體檢健康者50例作為健康對照組，其中男性5例，年齡35～55歲，平均(45.1±4.0)歲；女性45例，年齡20～55歲，平均(40.6±5.4)歲。SLE患者根據(jù)SLE活動性指數(shù)(SLEDAI)評分標準[4]分為活動組、緩解組。SLE組與健康對照組的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，所有研究對象均簽署知情同意書，且本研究符合并已通過本院倫理委員會審理。

1.2納入標準 (1)SLE患者均符合文獻[4]的診斷標準；(2)患者臨床資料完整；(3)未使用免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素。

1.3排除標準 (1)合并肝、腎、心、腦等基礎(chǔ)疾??；(2)合并其他感染性疾??；(3)合并其他自身免疫性疾病或腫瘤等；(4)妊娠或哺乳期；(5)診斷不明確。

1.4儀器與試劑 酶標儀為雷杜全自動酶標儀(RT-6100)；全自動洗板機為深圳匯松(PW350)；血清炎癥因子檢測試劑盒購自武漢博士德生物技術(shù)公司。

1.5方法 所有研究對象均在早晨空腹采集血標本2 mL，3 000 r/min，離心5 min，血清-80 ℃凍存?zhèn)溆?。使用酶?lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清白細胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和γ-干擾素(IFN-γ)水平，ELISA操作過程嚴格按照產(chǎn)品說明書進行。具體為每孔25 μL血清加入225 μL樣本稀釋液中，37 ℃孵育90 min，自動洗板機洗板3遍，每孔加入100 μL生物素標記抗體，37 ℃孵育60 min，自動洗板機洗板3遍，然后加入90 μL 3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色液，37 ℃避光15 min，然后加入100 μL TMB終止液450 nm檢測光密度(A)。

2 結(jié) 果

2.1SLE組與健康對照組炎癥因子水平比較 與健康對照組比較，SLE組血清IL-2水平降低，血清IL-4、 IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2活動組與緩解組炎癥因子水平比較 與緩解組相比，活動組血清IL-2水平降低，血清IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 兩組炎癥因子水平比較

表2 活動組與緩解組SLE患者炎癥因子水平比較

2.3各血清炎癥因子與SLEDAI評分相關(guān)性分析 SLE患者血清IL-2與SLEDAI評分呈負相關(guān)，SLE患者血清IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平與SLEDAI評分呈正相關(guān)。見表3。

表3 各血清炎癥因子與SLEDAI評分相關(guān)性分析

3 討 論

SLE為一種好發(fā)于育齡女性的自身免疫性疾病，病情復雜易反復，常造成多種組織器官的損傷，危害較大，目前發(fā)病機制尚不明確。但綜合研究顯示其發(fā)病與遺傳、激素、環(huán)境等多種因素密切相關(guān)，在相關(guān)危險因素的相互刺激下，多種免疫細胞(如T細胞、B細胞及NK細胞等)異常激活，導致炎癥因子的異常釋放，進而介導組織器官慢性炎癥性損傷[1,5]。同時，釋放的炎癥因子又通過刺激機體相關(guān)免疫細胞異常活動，產(chǎn)生大量自身抗體，在補體作用下，自身抗體與相應抗原密切結(jié)合形成抗原抗體復合物沉積于組織器官，導致多組織器官的損傷[6]。而炎性損傷與免疫性損傷相互交加，形成惡性循環(huán)，進一步加重病程[7]。因此，研究SLE患者血清中炎癥因子的變化，對進一步明確該病的發(fā)病機制，以及采取針對性藥物進行抑制/激活相關(guān)炎癥因子，進而抑制/激活相關(guān)免疫細胞，對于治療該病具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，與健康對照組比較，SLE組血清IL-2水平降低，血清IL-4、 IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與緩解組相比，活動組血清IL-2水平降低，血清IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。同時本研究將各炎癥因子與SLEDAI評分進行相關(guān)性分析，也證實各炎癥因子變化與SLEDAI評分具有一定相關(guān)性，血清IL-2水平與SLEDAI評分呈負相關(guān)，血清IL-4，IL-6，IL-10，TNF-α和IFN-γ與SLEDAI評分呈正相關(guān)。這說明IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ在SLE發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，有可能成為SLE治療的潛在靶點。

研究表明在SLE發(fā)病過程中調(diào)節(jié)性T淋巴細胞增殖分化功能顯著受抑制，效應性T淋巴細胞數(shù)量顯著增加，功能明顯增強，使機體針對自身抗原的免疫耐受能力降低，導致自身抗體的產(chǎn)生[8]。IL-2主要由活化的T淋巴細胞產(chǎn)生，具有調(diào)節(jié)免疫細胞增殖分化及維持機體免疫功能穩(wěn)定的作用[9]。本研究SLE患者血清IL-2與SLEDAI評分呈負相關(guān)。這說明在SLE發(fā)病過程中降低的IL-2很可能是由于調(diào)節(jié)性T細胞被抑制所造成，這與臨床試驗也顯示使用低劑量的IL-2對SLE患者進行治療，可顯著促進調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量和功能的增加，使效應性T細胞的促炎作用得到顯著抑制，可達到緩解病情，治療該病的目的是一致的[10]。但調(diào)節(jié)性T細胞是如何在SLE患者中被抑制的，尚有待進一步探究。

在SLE發(fā)病的不同時期，患者外周血中Th細胞和Tc細胞比例失衡，當二者比例失衡時就會產(chǎn)生針對自身抗原的特異性自身抗體，形成免疫復合物[11]。IFN-γ和IL-4分別作為Th1細胞和Th2細胞代表性細胞因子，在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)平衡過程中具有重要作用[12]。本研究結(jié)果顯示，SLE患者體內(nèi)Th細胞/Tc細胞明顯失衡，Th細胞釋放炎癥因子量顯著增高，加重患者自身免疫的損傷。因此，如何恢復患者體內(nèi)Th細胞和Tc細胞的比例，降低IFN-γ和IL-4水平成為治療SLE的一個重要方向。周嬌等[13]通過雷公藤多苷對SLE小鼠模型進行治療，發(fā)現(xiàn)治療后SLE小鼠失衡的Tc細胞和Th細胞的比例得到顯著恢復，且炎癥因子也顯著降低，這從側(cè)面也反映IFN-γ和IL-4在SLE致病中的重要作用。

研究表明Th2細胞與自身免疫炎癥性疾病密切相關(guān)，其在SLE患者體內(nèi)嚴重失衡，且SLE患者疾病嚴重程度與Th1、Th2和Th17具有相關(guān)性[14-15]。本研究結(jié)果顯示，與健康對照組比較，SLE組血清IL-6水平變化不顯著，但IL-10水平顯著升高，且與SLEDAI評分呈正相關(guān)，這說明Th2細胞的異常增高可能對SLE的發(fā)病起著明顯促進作用，通過抑制Th2細胞的活性有可能會對SLE的治愈起到一定的促進作用。最新研究也證實通過抑制轉(zhuǎn)錄因子ETS1可以顯著抑制Th2細胞的分化過程，達到改善SLE患者發(fā)病進程的目的[16]。

TNF-α則是一種非特異性細胞分泌的細胞因子，在自身免疫性疾病中也發(fā)揮了重要作用。有研究報道在SLE患者中，它可通過促進T細胞與滋生抗原發(fā)生反應，進而加重SLE的進程，是SLE疾病進程中的一個重要促進因素[15,17]。因此動態(tài)監(jiān)測SLE患者體內(nèi)TNF-α水平對于判斷疾病進展、病情輕重均有較好的指導意義。

綜上所述，SLE患者炎癥因子水平檢測有助于了解疾病的進展情況及嚴重程度，而且對于深入研究SLE致病機制并尋找升高或降低相應炎癥因子的藥物具有重要的臨床意義。