細胞DNA倍體聯合Hsp90α、LDH診斷良惡性胸腔積液、腹水的臨床價值*

張 姚，楊麗瓊，葉 敏，吉彩霞

德陽市人民醫院檢驗科，四川德陽 618000

正常情況下，胸/腹腔內存在少量液體(胸腔內液體<15 mL，腹腔內液體<200 mL)對人體具有積極作用，當胸/腹腔內液體超過該限度時則提示機體可能處于病理狀態[1]。病理狀態的胸腔積液、腹水可由惡性腫瘤、心血管疾病、肝硬化等良性或惡性疾病引起，及時鑒別其良惡性并有效干預十分重要[2]。脫落細胞學檢查是目前診斷良惡性胸腔積液、腹水的金標準，但靈敏度低，假陽性率高，操作過程繁瑣，通常需要多次采集胸腔積液、腹水來確診[3]。DNA倍體分析是近十年來惡性腫瘤早期診斷的重要方法之一，但該方法在國內的應用尚未十分成熟，因此臨床將良惡性胸腔積液、腹水診斷重點放在了DNA倍體分析與多項腫瘤分子生物標志物的聯合檢測上[4]。熱休克蛋白90α(Hsp90α)是一種與腫瘤相伴的蛋白，能夠促進腫瘤增殖、侵襲及轉移[5]。乳酸脫氫酶(LDH)是一種糖酵解酶，存在于機體所有組織細胞胞質內，可在組織細胞受損時釋放入血，引起外周血中LDH水平上升[6]。已有研究顯示，Hsp90α、LDH對良惡性胸腔積液、腹水具有一定診斷價值[7-8]。為此，本研究分析了細胞DNA倍體聯合Hsp90α、LDH診斷良惡性胸腔積液、腹水的臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 經本院醫學倫理委員會批準，選擇2019年2月至2020年2月本院收治的137例胸腔積液患者為研究對象，根據胸腔積液性質分為胸腔積液良性組(n=53)與胸腔積液惡性組(n=84)。胸腔積液良性組：男32例、女21例；年齡18～78歲，平均(63.85±5.07)歲；病因：結核性胸膜炎16例，肝硬化5例，心力衰竭17例，肺炎相關低蛋白血癥15例。胸腔積液惡性組：男50例、女34例；年齡20～80歲，平均(62.68±5.42)歲；病因：肺癌48例，肝癌8例，胃癌5例，乳腺癌10例，卵巢癌7例，胸膜間皮瘤6例。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。另選取本院同期收治的122例腹水患者，根據腹水性質分為腹水良性組(n=50)與腹水惡性組(n=72)。腹水良性組：男30例、女20例；年齡22～75歲，平均(65.11±4.98)歲；病因：結核性胸膜炎5例，肝硬化37例，心力衰竭8例。腹水惡性組：男42例、女30例；年齡20～80歲，平均(65.96±5.13)歲；病因：肝癌20例，胃癌14例，膽囊癌9例，卵巢癌13例，胰腺癌8例，結腸癌6例，腎癌1例，胸膜間皮瘤1例。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

納入標準：(1)胸腔積液和腹水性質均經脫落細胞學檢查證實；(2)入院前未接受任何治療；(3)無感染性疾病、凝血系統疾病、傳染性疾病；(4)病歷資料完整；(5)患者及家屬知情同意本研究而且自愿簽署知情同意書。排除標準：(1)合并精神系統疾病；(2)妊娠期或哺乳期女性；(3)依從性差，不能配合完成本研究；(4)合并代謝性疾病；(5)合并自身免疫性疾病。

1.2研究方法 (1)胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平檢測：對各組患者行胸腔/腹腔穿刺術，采集胸腔積液、腹水各10 mL，采用HC-2518R高速冷凍離心機(安徽中科中佳科學儀器有限公司)，3 800 r/min離心10 min，分離上清液，采用乳酸底物法檢測胸腔積液、腹水LDH水平，儀器為西門子ADVIA2400全自動生化分析儀，試劑為乳酸脫氫酶測定試劑盒(邁克生物股份有限公司)；采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測胸腔積液、腹水Hsp90α水平，儀器為Bayer1650酶標儀(深圳海思安生物技術有限公司)，試劑為Hsp90α水檢測試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司)。

(2)胸腔積液、腹水DNA倍體分析：采集胸腔積液、腹水各10 mL，制成單細胞懸液，用1-氨基碘化吡啶(廈門研科生物技術有限公司)染色，使用FACSCantoⅡ流式細胞儀(美國Beckman-Counter公司)進行DNA定量分析，將不容易分辨的群體細胞分類為G1期、S期、G2期，在FACSDiva軟件上獲取DNA數據，再在FlowJo軟件上分析細胞周期及細胞DNA倍體，細胞DNA倍體采用DNA指數(DI)表示，二倍體DI=1.0±0.1(陰性)，異倍體DI<0.9或>1.1(陽性)。

2 結 果

2.1兩組患者胸腔積液中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較 與胸腔積液良性組比較，胸腔積液惡性組患者胸腔積液中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率呈現上升趨勢，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者胸腔積液中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較

2.2胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性胸腔積液的相關性 胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性胸腔積液均呈正相關(r=0.753、0.844、0.573，P<0.05)。

2.3胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價值 胸腔積液Hsp90α對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價值明顯優于胸腔積液LDH(P<0.05)；胸腔積液DNA倍體陽性率對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價值明顯優于胸腔積液Hsp90α(P<0.05)；胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯合檢測對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價值明顯優于各項單獨檢測(P<0.05)，見表2、圖1。

表2 胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價值

圖1 胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率鑒別診斷良惡性胸腔積液的ROC曲線

2.4腹水良性組與腹水惡性組患者腹水中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較 與腹水良性組比較，腹水惡性組患者腹水中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率呈上升趨勢，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

2.5腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性腹水的相關性 腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性腹水均呈正相關(r=0.807、0.832、0.456，P<0.05)。

2.6腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性腹水的鑒別診斷價值 腹水Hsp90α對良惡性腹水的鑒別診斷價值明顯優于腹水LDH(P<0.05)；腹水DNA倍體陽性率對良惡性腹水的鑒別診斷價值明顯優于腹水Hsp90α(P<0.05)；腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯合檢測對良惡性腹水的鑒別診斷價值明顯優于各項單獨檢測(P<0.05)，見表4、圖2。

表3 腹水良性組與腹水惡性組患者腹水中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較

表4 腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性腹水的鑒別診斷價值

圖2 腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率鑒別診斷良惡性腹水的ROC曲線

3 討 論

胸腔積液、腹水分為良性和惡性，其性質不同給機體帶來的影響也不同，治療方法亦有很大區別，惡性胸腔積液、腹水是惡性腫瘤常見并發癥之一，如肺癌、卵巢癌、惡性腹膜腫瘤、結直腸癌、胰腺癌、胃癌等，對人類健康及生活造成嚴重影響，因此準確鑒別良惡性胸腔積液、腹水具有重要臨床指導意義。

診斷惡性胸腔積液、腹水的金標準是胸腔積液、腹水脫落細胞學檢查，但其診斷陽性率差異大，通常為 50%～72%，其通常取決于腫瘤負荷、病理診斷醫師經驗、腫瘤類型，推廣性不強。腫瘤細胞內DNA變化是細胞癌變重要的特征之一，癌細胞DNA變化能夠反映癌細胞增殖能力，癌細胞內DNA含量可隨癌細胞增殖能力的增強而增加。DNA倍體分析是一種DNA定量分析技術，主要通過檢測細胞內DNA含量變化判定細胞是否發生癌變[9]。正常情況下，人體內大部分細胞為二倍體，當這些細胞受到各種因素刺激后大量增殖，呈現異倍體形態。有研究顯示[10]，細胞DI值與異倍體細胞數量及細胞惡變程度具有顯著相關性。本研究將DNA倍體分析應用于良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷中，發現胸腔積液、腹水惡性組DNA倍體陽性率明顯高于胸腔積液、腹水良性組，提示DNA倍體分析對良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷有一定價值。Hsp90α是一種廣泛表達于真核細胞中的分子伴侶蛋白，在生物進化中高度保守，具有維持蛋白質穩態、參與細胞加工(如細胞活化、凋亡、增殖、侵襲、轉移等)、促進組織修復、誘導血管生成等作用。Hsp90α也是一種與腫瘤相伴的蛋白，能夠促進腫瘤增殖、侵襲及轉移。有研究報道[11]，乳腺癌細胞分泌Hsp90α具有促進乳腺癌腫瘤生長的作用，血漿Hsp90α水平檢測可用于評估肝細胞肝癌患者介入治療后的療效[11-12]。有研究發現[13]，肺癌患者癌組織中Hsp90α表達水平與臨床分期、淋巴結轉移呈正相關，Hsp90α可用于肺癌患者病情監測。本研究顯示Hsp90α在惡性胸腔積液、腹水中高表達，提示Hsp90α可能與惡性胸腔積液、腹水有關。LDH是一種糖酵解酶，存在于機體所有組織細胞胞質內，在腎臟中含量最高，LDH可在組織細胞受損時釋放入血，引起外周血中LDH水平上升[14]。有研究報道，造血系統惡性腫瘤(如多發性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤)患者血清LDH水平升高，LDH已被證實是預測侵襲性淋巴瘤患者生存期的強有力因子[15]。本研究顯示，胸腔積液、腹水惡性組患者胸腔積液、腹水中LDH水平較胸腔積液、腹水良性組呈上升趨勢，分析其原因可能是肺癌、卵巢癌、惡性腹膜腫瘤、結直腸癌等腫瘤生長造成正常組織破壞，從而導致胸腔積液、腹水中LDH水平升高。ROC曲線分析得出，胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯合檢測對良惡性胸腔積液、腹水的鑒別診斷價值明顯優于各項單獨檢測，胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯合檢測對良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷價值較高，有望成為鑒別良惡性胸腔積液、腹水的有效方法。

綜上所述，胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯合檢測對良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷價值較高，具有較好的臨床應用價值。但本研究研究時間較短，納入病例不多，故仍需深入研究。