CXCL12、CXCR4與IL-6在特發性膜性腎病中的表達及臨床意義*

王思微，牛廣華

遼寧中醫藥大學附屬醫院臨床檢驗中心,遼寧沈陽 110032

膜性腎病是一種引起成人腎病綜合征常見的病理分型，可分為病因不明的特發性膜性腎病(IMN)與由自身免疫性疾病、感染、腫瘤等原因引起的繼發性膜性腎病(SMN)?，F階段研究證實IMN發病機制與抗磷脂酶A2受體(PLA2R)抗體水平等有關，抗PLA2R抗體被認為是引發足細胞損傷最重要的自身抗體[1]。趨化因子是發揮免疫學作用的一群小分子蛋白，具有穩態與炎性雙重的趨化作用。趨化因子CXC亞家族的成員CXCL12又名基質細胞衍生因子-1α，其結合到受體CXCR4上發揮獨特的生物學效應[2]，CXCL12/CXCR4軸被認為廣泛作用在腫瘤細胞的遷移與分化、促進干細胞歸巢、并誘導炎性反應與免疫調節等方面。本研究旨在檢測IMN患者血清CXCL12、CXCR4與白細胞介素(IL)-6水平，探究其在疾病的發生與發展中的重要作用，并研究其能否成為IMN新的診斷指標，為IMN疾病診療提供新的線索。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取遼寧中醫藥大學附屬醫院2018年9月至2019年11月經皮穿刺腎活檢明確診斷為IMN的患者共105例(IMN組)，除外感染、腫瘤、自身免疫性疾病等原因引起的SMN，全部入選患者均為初次診斷，未經免疫抑制劑或激素治療。IMN組男性53例、女性52例，年齡為19～83歲，平均(55.19±6.73)歲，根據患者的24 h尿蛋白定量(24 h UTP)將IMN患者分為高蛋白排泄組(24 h UTP≥1.5 g/24 h)54例與低蛋白排泄組(24 h UTP<1.5 g/24 h)51例，所有IMN患者按照Ehrenreich-Churg的病理分期標準分為Ⅰ期27例、Ⅱ期42例、Ⅲ期19例、Ⅳ期17例，并選取55例體檢健康者作為對照組，無血清學及尿液的異常，其中男性30例、女性25例，年齡為22～78歲，平均(48.23±8.12)歲。本研究所有研究對象均簽訂知情同意書，經本院倫理委員會批準。

1.2儀器與試劑 儀器：美國SpectraMax iD3多功能酶標儀；日立7600-020全自動生化分析儀。試劑：CXCL12酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購自南京森貝咖生物科技有限公司，CXCR4 ELISA試劑盒購自武漢博士德生物科技有限公司；IL-6和抗PLA2R抗體檢測ELISA試劑盒購自德國歐蒙公司；24 h UTP專用試劑盒購自四川邁克公司(免疫比濁法)。

1.3方法 本研究所有對象在清晨空腹采血，在4 ℃條件下13 000 r/min離心10 min，收集血清用ELISA法對CXCL12、CXCR4、IL-6及抗PLA2R抗體水平進行檢測，所有標本均無黃疸、脂血或溶血；患者均空腹留取晨尿，并標記24 h尿量。所有操作均嚴格按照說明書進行，ELISA試劑盒采用五點定標，兩個濃度的質控品均在控，且具備符合檢測要求的線性條件及其他性能要求。

2 結 果

2.1各組CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平比較 與對照組相比，IMN組CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平增高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。高蛋白排泄組CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；高蛋白排泄組CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平與低蛋白排泄組相比明顯增高，差異有統計學意義(P<0.05)；低蛋白排泄組CXCR4、抗PLA2R抗體水平與對照組相比明顯增高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表1 IMN組與對照組CXCL12、CXCR4、IL-6與抗PLA2R抗體水平比較

2.2不同病理分期CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平比較 4種病理分期CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。進一步兩兩比較，Ⅱ期患者抗PLA2R抗體水平高于Ⅰ期患者；Ⅲ期、Ⅳ期患者CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平高于Ⅰ期患者；Ⅲ期患者CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平高于Ⅱ期患者；Ⅳ期患者CXCL12、CXCR4、抗PLA2R抗體水平高于Ⅱ期患者，Ⅳ期患者CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平高于Ⅲ期患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表2 3組CXCL12、CXCR4、IL-6與抗PLA2R抗體水平比較

表3 不同病理分期CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體水平比較

2.3各指標間相關性分析 應用Pearson相關分析顯示，CXCL12、CXCR4與抗PLA2R抗體呈正相關(r=0.85、0.82，P<0.05)，而IL-6與抗PLA2R抗體無相關性(r=0.02，P>0.05)；CXCL12、CXCR4、抗PLA2R抗體與24 h UTP呈正相關(r=0.85、0.83、0.85，P<0.05)，而IL-6與24 h UTP無相關性(r=0.24，P>0.05)，見表4。

2.4各指標單項或聯合檢測診斷IMN的診斷效能 CXCL12、CXCR4、IL-6聯合抗PLA2R抗體診斷IMN的靈敏度為90.27%，特異度為95.19%，陽性預測值為91.26%，陰性預測值為94.73%，AUC為0.937，多指標聯合檢測AUC優于單項指標檢測(P<0.05)或兩項指標聯合檢測(P<0.05)，見表5。

表4 各指標間相關性分析

表5 CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體單項或聯合檢測診斷IMN的診斷效能

續表5 CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗體單項或聯合檢測診斷IMN的診斷效能

3 討 論

IMN是一種足細胞被破壞的自身免疫性腎病，其基本的病理變化是免疫復合物在腎小球上皮下沉積，激活補體、促進攻膜復合物的形成，進一步誘導終末分化的足細胞的凋亡，其中免疫因素可能與其密切相關[3-4]。在IMN的發生和發展過程中炎癥因素為其重要的致病因素之一，慢性炎癥是IMN的主要病理特征之一[5]。ZHANG等[6]構建了膜性腎病、免疫、炎癥相關的三聯體網絡。在一系列炎癥物質的研究中，趨化因子被認為是具有較強活性的炎性細胞因子，其與腎臟疾病的關系日益被關注，在IMN患者的腎臟組織采用免疫組化的方法檢測到一系列趨化因子的高表達，可能加劇疾病發展[7]。

CXCL12與其特異性的受體CXCR4結合通過激活通路發揮其特定的生物學功效[8]。CXCL12/CXCR4趨化軸因其對腫瘤細胞存活、轉移和免疫細胞遷移的影響而備受關注[9]。在自身免疫性疾病相關的研究中，CXCL12與非典型趨化因子受體ACKR3結合，ACKR3是調節CXCR4功能的非典型趨化因子受體，在多種癌癥類型中過表達。CXCL12/CXCR4/ACKR3軸不僅通過干擾細胞遷移，而且通過調節免疫反應，在眾多的自身免疫疾病中調控炎性反應及免疫狀態。CXCL12與CXCR4特異性結合后通過激活FAK及ERK1/2通路介導IL-6的高表達[10]，可能與炎性反應增強有關。一些關于腎臟疾病尤其是膜性腎病的研究中，CXCL12/CXCR4軸對足細胞的損傷也日益被關注。在腎病方面，阻斷CXCL12可以防止小鼠腎小球足細胞的損壞，可能參與糖尿病腎病的發病機制[11]。在狼瘡性腎炎小鼠中拮抗CXC4R也可改善腎病的嚴重程度與炎癥狀態[12]。SHA等[13]在體外c5b-9誘導的足細胞損傷模型中，足細胞增殖受到抑制，而CXCL12/CXCR4和磷酸化的STAT3 (p-STAT3)升高。膜性腎病作為一種自身免疫腎病，仍舊依賴于腎組織穿刺活檢的診斷方法[14]，抗PLA2R抗體是IMN致病重要的靶抗原，具有較高的靈敏度與特異度[15]，但仍存在一定的假陽性，多種檢測指標的應用輔助IMN診斷顯得尤為重要。

所以，本研究選取CXCL12、CXCR4與IL-6，探討其成為IMN診斷評估足細胞損傷的新指標，同時探究聯合檢測能否替代對患者有創性的腎穿刺活檢病理檢測手段，并聯合特異性的抗PLA2R抗體，探討新型診斷模式。本研究結果顯示，CXCL12、CXCR4、抗PLA2R抗體與24 h UTP呈正相關，可能與足細胞損傷腎小球機械屏障受損有關，符合IMN部分患者存在腎病綜合征的臨床表現。本研究還發現，4種指標聯合檢測具有更高的診斷效能。但是本研究仍存在樣本量少、入選病例存在偏倚、機制研究不足、統計學方法單一等問題，在后續研究中應進一步完善。