酶聯免疫斑點技術T-SPOT.TB在艾滋病合并結核感染中應用的診斷價值分析

黃麗靜，李錫芳，張麗丹，吳波霖，鄧世富，韋永孜

（1欽州市第一人民醫院 感染科，廣西 欽州 535000；2廣西醫科大學附屬武鳴醫院 感染科，廣西 南寧 530199）

0 引言

艾滋病為嚴重傳染病之一，受艾滋病影響，近年來我國肺結核患者日漸增多，因為艾滋病可導致患者免疫功能大幅降低，增加患者感染率，引發肺結核[1]。艾滋病患者合并肺結核可進一步降低患者免疫功能，致使HIV病毒復制能力增強而導致肺結核病灶加速擴散，提高患者死亡率[2]。因此，有效給予肺結核患者快速診斷與治療是控制艾滋病合并肺結核患者病情進展、提高患者生存質量的關鍵。但目前尚無準確、快速、可靠檢測結核分枝桿菌感染的有效方法。近年來，酶聯免疫斑點技術T-SPOT.TB成了診斷肺結核的重要方法，具有高特異性高、靈敏度及準確率[3]。為進一步探究T-SPOT.TB診斷效果，筆者進行了如下研究，現總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取我院2018年1月至2019年12月收治的70例艾滋病合并肺結核（合并組）患者及50例單純肺結核患者（單純組）。其中，合并組男40例，女30例；年齡22～70歲，平均（40.11±8.76）歲。單純組男27例，女23例；年齡24～68歲，平均（40.24±8.83）歲。兩組數據顯示，P＞0.05，可予以對比。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB試驗采用上海復星科技有限公司提供的試劑盒，取5 mL枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，分離PBMC放在包被INF-γ抗體的微孔板，加入結核特異性抗原早期分泌靶向抗原（ESAT-6）和培養濾過蛋白（CFP-10）作為刺激原，溫箱培養24 h后，洗去抗原致敏效應T淋巴細胞，加入生物素標記二抗，酶聯顯色，在細胞因子分泌的地方形成斑點，通過記錄斑點數檢測結核特異抗原致敏的效應T淋巴細胞數量。結果判斷：當空白對照孔內斑點數＜6時，任一實驗孔斑點數減去空白孔斑點數≥6，為陽性；若空白對照孔斑點數＞6時，任一實驗孔斑點數大于空白孔斑點數的兩倍，為陽性。

1.2.2 結核抗體試驗（TB-Ab）：采用艾博生物醫藥（杭州）有限公司生產的結核分枝桿菌IgG抗體檢測試劑盒，經金標法檢測：采集被檢者血清，在反應板反應孔中間依次加入2滴封閉液、40μL血清標本、6滴洗滌液、2滴金標液、6滴洗滌液，等待薄膜吸入。結果讀取，薄膜中間有紅圓點為陽性，否則為陰性。

1.2.3 結核分枝桿菌核酸（TB-DNA）檢測：采用中山大學達安基因股份有限公司生產的試劑盒，遵照說明書經PCR-熒光法檢測TB-DNA：預處理血液標本及質控品，取50μl的TB-DNA提取液加入備用沉淀物混合后煮沸10 min，10000 r/min速度離心5 min，將上層清液放入pcr擴增體系以6000 r/min速度離心，放于93℃環境2 min，接著依次置于93℃及55℃環境中45s、120s循環30次。擴增結果由熒光檢測儀自動記錄，根據循環閾值（ct）判定：如果Ct值＜30，則實驗結果為陽性。

1.2.4 CD4+T淋巴細胞計數測定 經美國BD公司生產的流式細胞儀測量患者外周血CD4+T淋巴細胞計數。

1.3 觀察指標。比較兩組T-SPOT.TB、結核抗體、TBDNA結果，并比較不同CD4+T淋巴細胞計數時T-SPOT.TB檢測的敏感性、特異性及準確率。

1.4 統計學分析。選用SPSS 19.0統計學軟件處理分析，計數資料實施t檢驗，計量資料實施χ2檢驗，P＜0.05，差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對比三組檢測結果。T-SPOT.TB診斷準確率高于TB-Ab、TB-DNA（P＜0.05），見表1。

表1 對比三組檢測結果[n（%）]

2.2 對比不同CD4+T淋巴細胞計數檢測方法敏感度、診斷率、特異性。CD4+T淋巴細胞≥200個/ul組敏感度、準確率高于CD4+T淋巴細胞＜200個/ul組（P＜0.05），但兩組特異性無顯著差異（P＞0.05），見表2。

表2 對比不同CD4+T淋巴細胞計數檢測方法敏感度、診斷率、特異性[n（%）]

3 討論

艾滋病以人體免疫功能缺陷為主要特征，相比健康人群，艾滋病患者更易伴發其他疾病、感染等，因此死亡率較高[4]。目前，我國是艾滋病合并肺結核高感染率、高發病率、高潛伏感染、高新發率、高死亡率的高負擔國家。因艾滋病、肺結核可相互作用，即艾滋病合并肺結核后生存期顯著縮短，而艾滋病也可增加肺結核傳播，促使病情持續進展[5]。因此，如何提高肺結核檢測準確率，使患者能夠早診斷、早干預成了抑制艾滋病合并肺結核感染的關鍵。

臨床診斷以往多實施痰標本涂片法、結核抗體檢測法等，有檢出率偏低、敏感性較差等不足。痰涂片檢查結核分枝桿菌（MTB）陽性率偏低，原因為：巨噬細胞內MTB極易喪失抗酸性，并且多為播散型結核及肺外結核。雖然相關學者提出了BD-960結核菌快速培養法，明顯縮短檢測時間，但陽性檢出率仍相對較低。近年來，T-SPOT.TB成了臨床診斷肺結核的重要方法，靈敏度、特異性、準確率均較高，且可于送檢24 h即可獲取檢測結果。本文研究結果顯示，T-SPOT.TB診斷準確率高于TB-Ab、TB-DNA（P＜0.05），CD4+T淋巴細胞≥200個/ul組敏感度和準確率高于CD4+T淋巴細胞＜200個/ul組（P＜0.05），但兩組特異性無顯著差異（P＞0.05）。這是因為CD4+T淋巴細胞可傳遞抗原信息，使機體細胞免疫功能得以正常維持。研究發現，艾滋病所致CD4+T細胞計數降低與結核傳播、死亡相關，而抗病毒治療雖可升高CD4+T細胞計數，卻無法降低艾滋病患者感染結核風險。由本文研究可見，一旦CD4+T細胞計數降低至200個/ul以下，即便行T-SPOT.TB診斷，敏感度也不高，因此須臨床予以患者早診斷、早治療，以免病情加重。

綜上所述，T-SPOT.TB檢測在診斷艾滋病合并結核感染上具有較高敏感性、特異性及準確率，且當CD4+T淋巴細胞≥200個/ul時其敏感性更高。