對紅景天屬植物中紅景天甙的高效液相色譜的研究

摘要：本文通過設(shè)計試驗，使用高效液色譜分析法對紅景天屬植物云南紅景天、喜馬紅景天、四裂紅景天、大花紅景天以及互生紅景天的紅景天甙的具體含量進(jìn)行了精確測定，最后得出測定結(jié)論。

關(guān)鍵詞：紅景天;紅景天甙;高效液相色譜

紅景天甙是紅景天屬植物的重要組成部分，該有效成分有很大的醫(yī)用價值。但是有關(guān)測定紅景屬植物中紅景天甙含量的測定報告少之又少，為研究測定紅景屬植物中的紅景天甙含量，本文設(shè)計了一種基于HPLC的紅景天甙測定方法。

1 紅景天概述

紅景天是一種具有明顯藥用價值的植物，一般生長于石隙、山坡草地、高山草甸以及向陽山坡的沙質(zhì)土壤中。紅景天屬植物的環(huán)境適應(yīng)能力較強，適合種植于冷涼溫潤的環(huán)境中，因此為保證紅景天的成活率，種植人員應(yīng)在氣候冷涼、海拔較高、無霜期短以及夏季晝夜溫差大的山區(qū)環(huán)境中將紅景天屬植物進(jìn)行栽種。紅景天適合在春季以及秋季進(jìn)行播種，春季播種時間為三月下旬到四月上旬，秋季播種時間為九月中旬至凍結(jié)之前。由于紅景天藥用價值極高，因此常被人們大量種植。

2 試驗藥品、試劑和儀器

本文設(shè)計的實驗的實驗藥品有紅景天植物大紅花紅景天干燥根莖，該紅景天經(jīng)TLC檢測為單一斑點，使用HPLC測定峰值情況單峰。實驗試劑為甲醇、注射用水。甲醇的作用為收集63.5-64.5攝氏度的餾分，甲醇和注射用水都來自華西醫(yī)科大學(xué)附屬藥廠。本實驗的儀器為Waters 510 HPLC泵、Baseline 810色譜工作臺、uBondapak ODS柱、Waters 484可變波長紫外檢測器、超聲波振蕩器以及10uL Hamilton U6K進(jìn)樣器。其中Waters 510 HPLC泵、Baseline 810色譜工作臺、uBondapak ODS柱以及Waters 484可變波長紫外檢測器均來自美國Wates公司，超聲波振蕩器來自上海超聲波制造廠，10uL Hamilton U6K進(jìn)樣器來自美國Hamilton廠[1]。

3 試驗方法和試驗條件

實驗第一步為配制紅景天甙對照品溶液。首先使用精密儀器稱量紅景天甙對照品20.0毫克，稱量完畢后將紅景天甙對照品放于10毫升容量中，使用準(zhǔn)備好的甲醇將對照品溶解稀釋到刻度，得到濃度為2.0毫克/每毫升的紅景天甙對照品儲備液，為保證儲備液的質(zhì)量，需要將之后將紅景天甙對照品儲備放置于冰箱中進(jìn)行保存，這樣只要將紅景天甙對照品儲備液進(jìn)行稀釋即可開始測試驗。第二步，實驗色譜條件。本試驗的色譜條件為Waters uBondapak ODS柱，規(guī)格為3.9mm*300mm，10um。Waters uBondapak ODS柱的溫度環(huán)境為室溫環(huán)境，即需要將環(huán)境溫度控制在10攝氏度到30攝氏度之間。與此同時，為保證試驗結(jié)果2的準(zhǔn)確性，需要將甲醇和水的比例控制在0.25左右，且要將液體流速控制在1.0mL/min。本試驗設(shè)定的紅景天甙檢測波長為276納米，建設(shè)試驗定量參數(shù)為峰高H，該峰高可使用Baseline810色譜工作臺測定得到。第三步，試驗線性范圍和最低檢出限。首先取一定量的紅景天甙對照品儲備溶液，加入一定量的甲醇溶液，稀釋成2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、80ng/mL、120ng/mL以及200ng/mL的紅景天甙對照品溶液。在該條件下，分別進(jìn)樣10uL的紅景天甙稀釋液，測定峰高，每個稀釋液測定三次峰高，計算平均峰高，并對絕對進(jìn)樣品平均峰值高進(jìn)行回歸分析。使用回歸分析方法進(jìn)行回歸分析后，可得出回歸方程為W=0.1402H-9.1187*γ=0.9999。將相關(guān)數(shù)據(jù)代入進(jìn)行計算后，可得出的結(jié)論為：在20-2000ng范圍內(nèi)，H與W之間呈良好的線性關(guān)系。此后，使用該方法對紅景天甙儲備液信噪進(jìn)行測定，得出信噪比為3：1，經(jīng)過計算得到儲備液中的紅景天甙最低檢出量為15ng。第四步，制備和測定紅景天甙樣品供試液。首先取一克紅景天生藥粉末、0.2克大花紅景天各三份，使用精密稱測定具體的質(zhì)量。將紅景天甙生藥樣品裝入Soxhlet提取器中，之后往提取器中加入30毫升甲醇，進(jìn)行連續(xù)回流提取，回流提取時間為兩個小時。使用30毫升甲醇對大化紅景天提取物進(jìn)行超聲處理，處理時間為一個小時。之后將兩種提取液過濾，過濾后的濾液靜置于50毫升容量瓶中，并加入適量的甲醇，將濾液稀釋到刻度線，待容量瓶中的溶液穩(wěn)定后，即完成了對紅景天生藥以及大化紅景天提取物供試品溶液的制備。其次，根據(jù)制備液保時間要求和標(biāo)準(zhǔn)加入法的要求，使用Baseline810色譜工作臺測定出紅景天供試品溶液中的紅景天甙峰峰高。該測定步驟的測定條件為為HPLC條件。同時由于紅景天甙色譜峰保留時間只有十個小時，因此需要使用一種快速的分析方法對樣品進(jìn)行分析，這里可使用外標(biāo)兩全法對紅景天甙樣品進(jìn)行有效分析，通過合理使用Baseline210色譜工作臺，即可測定紅景天甙提取物供試品溶液的具體峰高。峰高測定完畢后，使用上文得到的回歸方程即可計算出紅景天甙提取物供試品溶液中紅景天甙的實際百分含量。使用建立的方法即可測定出十個樣品液中的紅景天甙含量。第五步，測定加樣回收率和精密度。首先，使用精密儀器稱量0.02克大花紅景天藥材以及0.02克大花紅景天提取物。稱量完畢后將不同量的紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)品加入進(jìn)來，并按照測定流程對紅景天甙含量進(jìn)行測定。經(jīng)過測定可知，大花紅景天甙生藥的回收率為97.14%，大花紅景天甙提取物回收率為99.07%。其次，選取一定量的林芝紅景天供試品溶液，按照標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟對試品溶液進(jìn)行測定，測定次數(shù)為九次，測定精密度為1.55%，取九次測定結(jié)果的平均值，作為林芝紅景天甙的含量。經(jīng)過測定可知，林芝紅景天中的紅景天甙的含量為97.11%。

4 試驗結(jié)果與討論

經(jīng)過上述一系列的試驗操作，可準(zhǔn)確測定出紅景天中的紅景天甙的具體含量。首先，根據(jù)測定結(jié)果可以得出結(jié)論：質(zhì)地堅實、主根粗壯的紅景天生藥含有大量的紅景天甙，比如互生紅景天以及大花紅景天等。反之，主根細(xì)小、質(zhì)地較差的紅景天的紅景天甙含量較低，比如云南紅景天、喜馬紅景天等。與此同時，處于不同地區(qū)的同一種紅景天的紅景天甙含量也有所不同，比如不同海拔、氣候等的不同紅景天中的紅景天甙含量有所差別，一般情況下，海拔高的地方紅景天中的紅景天甙含量較低，海拔低的地方的紅景天中的紅景天甙含量相對較高，比如帕里地區(qū)的紅景天中的紅景天甙含量僅為0.17%。其次，當(dāng)甲醇：水=20：80的流動相流動速度為1.0毫升/每分鐘時，紅景天的容量因子為2.19，即K=2.19時，測定的結(jié)果最準(zhǔn)確，最后通過分析和對比可知，K的最佳范圍為2-5。與此同時，當(dāng)甲醇與水的含量比為15比85時，Baseline810色譜工作臺測出的紅景天甙色譜峰會變寬，此時說明紅景天甙與溶液中的雜質(zhì)有交叉的現(xiàn)象。最后，本實驗曾使用超聲振蕩提取法和超聲法反復(fù)提取和制備紅景天生藥供試液，提取次數(shù)為四次。但是經(jīng)過提取后的紅景天藥渣中仍含有一定量的紅景天甙。由此表明使用該方法并不能完全提取出紅景天藥材中所有紅景天甙，使用Soxhlet法即可完全提取出所有的紅景天甙[2]。

結(jié)論

合理使用高效液色譜分析法能夠有效測定出紅景屬植物中的紅景天甙含量，且測定結(jié)果良好。因此，可以大范圍使用該測定方法對紅景屬植物中的紅景天甙含量進(jìn)行測定。

參考文獻(xiàn)

[1]羅敏婷，何海彤，伍志航.高效液相色譜法測定植物精油中雙氯芬酸鈉的含量[J].香料香精化妝品，2020（06）：26-28.

[2]吳學(xué)進(jìn)，王明月，馬晨等.QuEChERS/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定香蕉中8種植物生長調(diào)節(jié)劑殘留[J].熱帶作物學(xué)報，2020，41（11）：2297-2304.

作者簡介：

華蕾（1982.04——），性別：女，民族：漢族，籍貫：四川，職稱：講師，學(xué)歷：研究生，研究方向：園林植物，設(shè)施園藝組培。

（新疆石河子職業(yè)技術(shù)學(xué)院?新疆?石河子?832000）