甘藍(lán)8398 愈傷組織誘導(dǎo)條件研究

武延生 張 杰 王僧虎 郭 麗 牛偉濤 武麗娜 曹 萌

（邢臺(tái)學(xué)院生物科學(xué)與工程學(xué)院 河北 邢臺(tái) 054001）

甘藍(lán)(Brassinca oleraceavar.emmifera)又稱為卷心菜、包菜、洋白菜，是十字花科蕓薹屬中能形成葉球的變種，是主要的蔬菜作物之一。8398 甘藍(lán)是利用8101-2-20-2 和8180-l-1-2-l 這2 個(gè)優(yōu)良的自交不親和系雜交而成，葉球圓球形，結(jié)球緊實(shí)，單球重0.9 ~ l kg，葉質(zhì)脆嫩，風(fēng)味、品質(zhì)俱佳，具有早熟、豐產(chǎn)等優(yōu)良性狀，從定植到收獲50 d 左右，一般每667 m2的產(chǎn)量為3 300 ~ 3 800 kg。目前在我國華北、西北和東北地區(qū)已經(jīng)大面積示范推廣[1]。采用常規(guī)方法進(jìn)行甘藍(lán)育種費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而采用組織培養(yǎng)技術(shù)則耗時(shí)短且遺傳性狀穩(wěn)定，因而，開展甘藍(lán)組織培養(yǎng)技術(shù)是培育甘藍(lán)新品種的一條有效途徑。1988 年，Horeau Netal 誘導(dǎo)出結(jié)球甘藍(lán)幼苗子葉的不定芽，由此鋪開了甘藍(lán)組織培養(yǎng)研究[2~5]，但不同的激素濃度對(duì)不同甘藍(lán)的愈傷組織誘導(dǎo)情況不同。本研究以不帶胚軸的子葉為外植體誘導(dǎo)甘藍(lán)8398 愈傷組織，探索NAA、6-BA 在8398 甘藍(lán)愈傷組織誘導(dǎo)過程中的作用，為建立甘藍(lán)8398 快速培養(yǎng)體系奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及藥品。甘藍(lán)8398 種子，要求籽粒飽滿，無機(jī)械損傷。藥品為6-芐氨基腺嘌呤(6-BA，98%)、萘乙酸(NAA，98%)、瓊脂粉(99%)、蔗糖，均為國產(chǎn)試劑。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 獲取無菌幼苗。將甘藍(lán)8398 種子用清水浸泡25 min，先后在70%的乙醇和0.1%升汞溶液中分別浸泡40 s 和5 min，最后用無菌水漂洗3 次，接種到MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為25 ℃2 ℃，16 h 光照/8 h 黑暗的光周期，照度2 000 Lx，培養(yǎng)室的濕度為70%~80%，20 d 后觀察幼苗的萌發(fā)情況。

表1 6 種不同激素濃度的培養(yǎng)基

1.2.2 愈傷組織的誘導(dǎo)。平展期的子葉作為外植體，大小約0.3 cm ×0.3 cm，分別接種在含有不同濃度NAA 和6-BA 配比的6 種MS 固體培養(yǎng)基(表1)上，每瓶20 粒，編號(hào)1~6。15 d 后觀察外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率、大小、顏色、質(zhì)地等指標(biāo)，并由此結(jié)果確定出對(duì)于誘導(dǎo)8398 甘藍(lán)子葉期愈傷組織最合適的6-BA 和NAA 的濃度。

圖1 甘藍(lán)種子

圖2 甘藍(lán)子葉

圖3 愈傷組織

2 結(jié)果與分析

研究結(jié)果顯示，不同激素配比下誘導(dǎo)出的愈傷組織的特性差異明顯(表2)，由此可以得出結(jié)論：8398甘藍(lán)的子葉在MS + 1.5 mg·L-16-BA + 0.1 mg·L-1NAA 和MS + 1.5 mg·L-16-BA + 0.15 mg·L-1NAA的培養(yǎng)基上能夠誘導(dǎo)出更多的愈傷組織。

表2 愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

影響愈傷組織形成的因素有很多，激素及其配比是其中一個(gè)很重要的影響因素[6]。本次試驗(yàn)中用NAA、6-BA 這2 種生長激素對(duì)8398 甘藍(lán)子葉進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，NAA 能促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，6-BA 能夠促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)非分化組織分化。