微小RNA-493- 5 p表達與肝癌患者臨床特征及預后的關系

劉亮，韓曉書

撫順市中心醫院消化內科，遼寧 撫順 113006

在中國，肝病的發病率較高，多種肝病均可誘導肝癌發生。近年來，隨著醫學技術的不斷發展，肝癌的臨床檢出率逐漸升高。肝癌主要分為肝細胞癌、膽管細胞癌和混合型肝癌，其中，以肝細胞癌較為常見。目前，臨床上，肝移植和根治性切除是肝癌的主要治療手段，但部分肝癌早期患者的臨床癥狀不明顯，就診階段就已發展為中晚期，導致治療效果欠佳，且治療后存在較高的復發率。近年來，隨著關于腫瘤分子生物學研究的不斷增多，臨床對微小RNA（microRNA，miRNA）的認知不斷增加，多項研究證實某些miRNA的調控失常會導致某些腫瘤的發生與發展，同時，可通過某些miRNA對腫瘤的預后、復發情況進行判斷。miRNA-493-5p作為其中之一，被證實存在潛在的抑癌作用。基于此，本研究對miRNA-493-5p表達水平在肝癌患者病情及預后中的評估價值進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年5月至2017年5月撫順市中心醫院收治的肝癌和良性肝病患者。納入標準：①符合《原發性肝癌診療規范（2017年版）》中關于肝癌的診斷標準，且經病理學檢查證實；②采樣前均未接受過抗腫瘤治療；③肝癌患者均接受根治性手術治療；④良性肝病患者均符合慢性肝炎、肝硬化的診斷標準。排除標準：①合并其他惡性腫瘤、免疫系統缺陷、重要臟器（心、肺、腎）功能不全、造血及凝血功能嚴重障礙等疾病；②存在器官移植、藥物性肝損傷等。根據納入和排除標準，本研究共納入78例肝癌患者作為肝癌組和40例同期良性肝病患者作為良性組。肝癌組中，男46例，女32例；年齡40～75歲，平均（55.12±8.36）歲。根據血清miRNA-493-5p表達水平的均值將肝癌患者分為高表達組（

n

=36）和低表達組（

n

=42）。良性組中，男22例，女 18例；年齡41～73歲，平均（54.76±8.83）歲；疾病類型：慢性肝炎24例，肝硬化16例。另選取25例健康體檢者作為對照組，其中，男14例，女11例；年齡40～75歲，平均（55.80±8.02）歲。

1.2 檢測方法

抽取所有受試者的空腹外周靜脈血5 ml，其中，肝癌組患者的抽血時間為術前1 d，以3000 r/min的速度于4℃下離心10 min，收集上清液，置于-80℃冰箱中保存備用。選用RNA提取分離試劑盒，采用離子交換層吸法對血清中總RNA進行提取，再選擇核酸蛋白檢測儀對其吸光度進行測定，計算miRNA水平；使用miRcute miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒將miRNA反轉錄為cDNA，再將反轉錄后的cDNA樣本存放于-20℃低溫保存。對cDNA進行實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）。反應條件：95℃預變性10 min，進行5個循環；95℃變性15 s，60℃退火20 s，72℃延伸40 s，進行40個循環；以

GAPDH

為內參，利用2法計算miRNA-493-5p的表達水平。

1.3 觀察指標及隨訪

比較肝癌組、良性組和對照組患者血清miRNA-493-5p的表達水平，分析血清miRNA-493-5p表達情況與肝癌患者臨床特征[年齡、性別、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染、巴塞羅那臨床肝癌（Barcelona clinic liver cancer，BCLC）分期等]的關系，比較不同血清miRNA-493-5p表達水平的肝癌組患者的生存情況，分析血清miRNA-493-5p表達水平對肝癌患者預后的評估價值。對肝癌組患者進行為期3年的隨訪，隨訪截止時間為2020年5月。治療后，每3個月隨訪1次，隨訪內容包括腹部B超檢查、CT檢查、外周血甲胎蛋白檢測、外周血癌胚抗原水平檢測等，并記錄其生存情況。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 血清miRNA-493- 5 p表達水平的比較

肝癌組患者血清miRNA-493-5p的表達水平為（1.082±0.095），明顯低于良性組的（1.425±0.109）和對照組的（1.677±0.141），差異均有統計學意義（

t

=19.714、17.650，

P

＜0.01）；良性組患者血清miRNA-493-5p的表達水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（

t

=8.090，

P

＜0.01）。三組受試者血清miRNA-493-5p的表達水平比較，差異有統計學意義（

F

=335.509，

P

＜0.05）。

2.2 血清miRNA-493- 5 p表達情況與肝癌患者臨床特征的關系

根據血清miRNA-493-5p表達水平的均值將肝癌組患者分為高表達組（

n

=36）和低表達組（

n

=42）。高表達組與低表達組患者的TNM分期、BCLC分期比較，差異均有統計學意義（

P

＜0.05）；高表達組與低表達組患者的年齡、性別、HBV感染情況、腫瘤直徑、血清甲胎蛋白水平、分化程度比較，差異均無統計學意義（

P

＞0.05）。（表1）

表1 血清miRNA-493- 5 p表達情況與肝癌患者臨床特征的關系（ n=78）

2.3 血清miRNA-493- 5 p表達水平與肝癌患者生存情況的關系

截至隨訪結束，肝癌組患者的總生存率為47.44%。其中，血清miRNA-493-5p高表達組患者的生存率為61.11%，高于低表達組患者的35.71%，差異有統計學意義（

χ

=4.624，

P

＜0.05）。（圖1）

圖1 血清miRNA-493- 5 p高表達組（ n=36）與低表達組（ n=42）肝癌患者的生存曲線

2.4 血清miRNA-493- 5 p表達水平對肝癌患者預后的評估價值

ROC曲線分析結果顯示，血清miRNA-493-5p表達水平對肝癌組患者預后評估的AUC為0.675（95%CI：0.554～0.796），靈敏度、特異度分別為56.76%、75.61%。（圖2）

圖2 血清miRNA-493- 5 p表達水平評估肝癌患者預后情況的ROC曲線

3 討論

原發性肝癌的發病率在全球范圍內居高不下，而肝細胞肝癌仍是肝癌中最常見的類型，其作為高度惡性腫瘤之一，具有較高的侵襲性，但早期不易被發現，多數患者被確診時已處于中晚期，導致治療效果不佳。手術、化療等是臨床治療肝癌的主要治療手段，但中晚期患者多已錯過最佳治療時機，因此，即便患者接受手術治療，預后仍欠佳，生命安全受到嚴重威脅。肝癌與其他惡性腫瘤一樣，其發生、發展均涉及較復雜的生理過程和分子生物學機制。隨著臨床醫學對惡性腫瘤的研究逐步轉向miRNA，發現miRNA作為非編碼小分子RNA經逆轉錄后可對靶基因水平進行調控，進而影響細胞的增殖、分化、凋亡等，導致其在惡性腫瘤的預測中發揮巨大潛能。腫瘤的發生、轉移及浸潤等均與新生血管生成密切相關，血管內皮細胞作為腫瘤血管生成因子之一，在腫瘤發生、發展過程中可以加速生成大量結構、功能異常的新生血管，進而加速腫瘤形成和體積增大，而miRNA在血管內皮細胞中高表達，能夠在一定程度上抑制腫瘤新生血管的生成。現代醫學研究還發現，上皮-間充質轉化在促進肝癌細胞侵襲中發揮重要作用，而miRNA還可抑制上皮-間充質轉化，進而防止肝癌細胞發生轉移，進一步降低其侵襲能力。

研究發現，miRNA-493-5p在多種腫瘤中的表達水平均較低，與本研究結果一致。本研究通過調查肝癌患者、良性肝病患者和健康體驗者血清miRNA-493-5p的表達水平，發現其在肝癌患者血清中的表達水平最低，證實其對惡性腫瘤具有一定的抑制作用。miRNA-493-5p能夠通過抑制腫瘤細胞有絲分裂從而抑制缺陷蛋白2的表達，發揮與紫杉醇化療類似的功效，同時其還能通過降低細胞活力、抑制細胞的侵襲和增殖能力，進一步促使細胞凋亡。為此，本研究對肝癌患者血清miRNA-493-5p水平與臨床特征的關系進行分析，結果顯示，血清miRNA-493-5p高表達肝癌患者的TNM分期明顯低于低表達患者，與陳琳等的研究結果基本一致，證明血清miRNA-493-5p水平與肝癌患者的病情惡化程度密切相關。本研究進一步分析了血清miRNA-493-5p表達水平與肝癌患者預后情況之間的關系，并對肝癌患者的3年生存情況進行分析，發現血清miRNA-493-5p高表達組患者的生存率高于低表達組，且ROC曲線分析結果顯示，血清miRNA-493-5p表達水平評估肝癌組患者預后的 AUC為 0.675（95%CI：0.554～0.796），靈敏度、特異度分別為56.76%、75.61%，提示血清miRNA-493-5p表達水平可作為肝癌預后評估的客觀指標。有研究發現，miRNA-493-5p通過調控突觸小泡締合型膜蛋白2，抑制肝癌細胞的增殖、遷移，進而誘導細胞凋亡。

綜上所述，miRNA-493-5p在肝癌患者血清中的表達水平較低，其表達水平與肝癌患者的臨床分期密切有關，且血清miRNA-493-5p高表達患者的預后相對較好，有望成為肝癌患者預后的評估指標。