血紅蛋白含量與血紅蛋白A2及基因檢測在β地中海貧血診斷中的應用價值

黃曉彬，黃 歡，林佳燕，洪欽明

揭陽市榕城區婦幼保健計劃生育服務中心檢驗科，廣東 揭陽 522000

β-地中海貧血是一組由β 珠蛋白基因缺失或突變導致β 肽鏈合成障礙而引起的遺傳性溶血性貧血［1］，在我國多發于廣西、廣東和四川等省［2］，目前臨床尚無有效的治療方法，僅能夠通過輸血維持生命。地中海貧血致死致殘率高，給家庭和社會帶來沉重的經濟負擔。因此，對新生兒、婚前檢查、孕前檢查及產檢人群進行地中海貧血篩查和地貧基因診斷具有重要意義。基因診斷是確診β-地中海貧血最可靠的診斷指標［3］，但耗時長、費用昂貴，在基層醫院難以廣泛開展，不能夠及時有效的檢出β 地中海貧血。國內外學者對血液學指標平均血紅蛋白含量（MCH）［4］、血紅蛋白A2（HbA2）［5］在地中海貧血篩查中的應用進行了單項研究，根據MCH 和HbA2 在機體的含量能夠在一定程度上篩查出地中海貧血患者，但聯合檢測研究還鮮有報道。本次研究擬通過基因檢測、MCH、HbA2、MCH 聯合HbA2 對β 地中海貧血患者的篩查效能進行分析，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年10 月—2019 年10 月在揭陽市榕城區婦幼保健計劃生育服務中進行地中海貧血篩查和地貧基因診斷者為研究對象。納入標準：（1）自愿接受基因檢測、MCH、HbA2 檢查；（2）臨床依從性高；（3）病例資料完整。排除標準：（1）嚴重心、肝、腎等器質性疾病者；（2）妊娠婦女、腫瘤患者等；（3）其他血液學疾病患者。最后納入136例，年齡9～40 歲，平均年齡（22.15±10.63）歲，男性50例，女性86例。本次研究經過醫院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 基因檢測：采用深圳亞能生物技術有限公司的基因診斷試劑盒。采集清晨空腹12 h外周靜脈血5 ml，枸櫞酸鈉抗凝，試劑盒提取基因組DNA，β 地貧基因分析采用反向點雜交技術，檢測β珠蛋白基因突變位點。

1.2.2 MCH 檢測：采用Sysmex XE2100 全自動血細胞分析儀進行檢測。采集清晨空腹12 h外周靜脈血5 ml，EDTAK2抗凝，標本采集后1 h內以3000轉/min 進行分離，取上清液，全自動血細胞分析儀進行檢測。MCH的正常參考值為27 pg～31 pg.

1.2.3 HbA2 檢測： 采用美國BIO-RAD 公司生產的Variant 血紅蛋白分析儀以及美國Helena 蛋白電泳分析儀進行檢測。采集清晨空腹12 h 外周靜脈血5 ml，肝素鈉抗凝。采用毛細管電泳儀對外周靜脈血進行血紅蛋白電泳分析。質控品和標本檢測按一起和試劑盒說明書步驟進行。成年男、女性HbA2的正常參考值為2.2%～3.5%，沒有異常血紅蛋白帶出現。

1.3 觀察指標

收集所有研究對象的人口學、基因檢測、MCH 檢測、HbA2 檢測以及聯合檢測的結果，觀察不同檢測方法患者的陽性檢出情況，計算診斷的敏感性、特異性假陽性率、假陰性率、約登指數。 靈敏度=真陽性例數/(真陽性例數+假陰性例數)×100%；特異度=真陰性例數/(真陰性例數+假陽性例數)×100%；假陽性率=假陽性例數/真陰性例數×100%；假陰性率=假陰性例數/真陽性例數×100%；約登指數=（靈敏度+特異度）-1。

1.4 統計學方法

數據采用IBM SPSS 25.0 軟件進行統計分析。分類變量采用例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。聯合診斷采用受試者工作特征曲線（ROC）分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因檢測、MCH、HbA2、MCH 聯合HbA2 檢測β 地中海貧血陽性率比較

136 例研究對象中基因檢測陽性者84 例，陰性者52例。MCH、HbA2、MCH 聯合HbA2 檢測陽性率分別為94.0%、84.5%及98.8%，陽性率差異有統計學意義（P＜0.05），MCH聯合HbA2檢測陽性率較單一指標高，見表1。

表1 基因檢測、MCH、HbA2、MCH聯合HbA2檢測β地中海貧血陽性率比較 例（%）

2.2 MCH、HbA2、MCH 聯合HbA2 檢測β 地中海貧血各指標比較

以基因檢測為金標準，三種方法在靈敏度、特異度、假陽性率、假陰性率以及約登指數上差異均有統計學意義（P＜0.05），聯合檢測的靈敏度、特異度和約登指數均較單一指標檢測高，假陽性率和假陰性率均較單一指標低，見表2。

表2 MCH、HbA2、MCH聯合HbA2檢測β地中海貧血各指標比較

2.3 MCH、HbA2、MCH 聯合HbA2 檢測β 地中海貧血的ROC曲線分析

以基因檢測為金標準，MCH、HbA2、MCH聯合HbA2檢測β 地中海貧血的AUC 分別為0.820、0.779 和0.903，MCH 聯合HbA2 檢測β 地中海貧血的AUC 最大，診斷效能較單一MCH、HbA2 檢測好，差異有統計學意義（P＜0.001），見表3。

表3 MCH、HbA2、MCH聯合HbA2檢測β地中海貧血的ROC曲線分析

3 討論

地中海貧血是一組遺傳性溶血性疾病，與珠蛋白基因缺陷使得血紅蛋白成分比例失衡導致血紅蛋白不穩定、紅細胞破壞有關［6］。β地中海貧血是其中的一種常見類型［7］。目前尚無有效的治療方法，只能通過輸血維持患者的生命健康。而該病具有多種臨床并發癥，在青年時期患者可因并發癥導致殘疾和死亡，給家庭及社會帶來沉重的負擔。因此，婚前、產前地中海貧血的篩查工作需引起重視。基因檢測是目前診斷地中海貧血的金標準，但基層醫院缺乏基因檢測開展的條件，一般需送至上級醫療單位進行檢測，耗時長；同時基因檢測成本高，在基層推廣應用具有局限性。因此，探究采用臨床和實驗室指標對地中海貧血進行篩查，及時發現地中海貧血患者或基因攜帶者具有重要意義。

MCH 和HbA2 是地中海貧血常用的篩查指標之一［8-9］，但在檢測過程中由于方法學和儀器等對兩者的影響因素較多，單一指標檢測對于地中海貧血篩查的意義不大，臨床上較少單純采用MCH 或HbA2 去討論地中海貧血的篩查與診斷。聯合檢測是近年來常用的地中海貧血篩查策略，通過多指標的聯合應用減少單一指標的不足，為基層醫院缺乏基因檢測情況下MCH 聯合HbA2 用于β 地中海貧血診斷的臨床應用提供科學理論依據。

本次研究中，MCH、HbA2、MCH 聯合HbA2 檢測陽性率分別為94.0%、84.5%及98.8%，三種方法檢測陽性率差異有統計學意義，MCH 聯合HbA2 檢測陽性率高于單一指標檢測，提示聯合檢測能夠提高陽性檢出率。地中海貧血的患者體內紅細胞能夠被珠蛋白鏈所黏附，導致紅細胞對滲透溶解產生抵抗［10］，因此在臨床檢測中可導致漏檢，而聯合檢測時HbA2 電泳檢測能夠減少這種黏附的影響，提高篩檢的陽性率。此外學者研究［11］也發現，HbA2聯合其他指標用于地中海貧血的篩查除了能夠提高陽性篩查率，還能夠有效的辨別地中海貧血的分型，為臨床上篩查陽性后指導治療提供助力。檢驗效能分析中，MCH 聯合HbA2 檢測的靈敏度、特異度、約登指數均較單一指標檢測高，假陽性率和假陰性率較單一指標檢測低，提示MCH聯合HbA2 檢測能夠進一步提高篩檢的靈敏度、特異度和準確性，具有較高的臨床價值。雖然與基因檢測相比仍有一定的差距，但仍較單一指標檢測的效果好。小部分漏檢患者可在臨床實際操作中根據現有的標準適當進行放寬，可減少漏檢的概率。此外，初篩判斷為地中海貧血的患者中有一部分是由于缺鐵性貧血所導致，因此在進行MCH聯合HbA2 檢測前還可以經過血清鐵蛋白檢測排除，從而降低β 地中海貧血的檢測假陽性率［12］。ROC 曲線分析中，MCH、HbA2、MCH 聯合HbA2 檢測β 地中海貧血的AUC分別為0.820、0.779 和0.903，MCH 聯合HbA2 檢測β 地中海貧血的AUC 最大，聯合篩查對于β 地中海貧血的診斷效能較單一指標檢測好。在臨床實踐中應根據實際情況選擇不同的篩查策略，特別是在經濟成本受限又急需了解可能的患病可能性時，可應用MCH 聯合HbA2 檢測進行初篩，根據初篩結果再決定是否需要進行基因診斷。

綜上所述，MCH、HbA2 在β 地中海貧血診斷中具有一定的應用價值，MCH 聯合HbA2 檢測可進一步提高β 地中海貧血的檢出率，為提高人口質量減少重型地貧兒的出生提供科學理論依據。